干扰试验课件

1、干扰试验分析的干扰分析的干扰广义上是指某一物质对某分析物的浓度或催化活力测定中任何一步骤的影响作用称为分析干扰。很难区分清楚2个相互很近的词义“干扰”(Interference)和“固有的特异性欠缺”(Inherent lack of specificity)。分析物(Analyte)是标本中准备测定的组分。干扰物(Interferent)也是标本中的一个组分，它不是被分析物，但它改变最后的结果。干扰作用可看成是绝对的或相对的，绝对干扰作用是：一般病人标本中不含有某物质，一旦它的存在即会引起干扰。相对干扰作用：一般病人标本中含有某物质，其含量相当于混合样品中的平均浓度，不同病人样品中含该物质的

2、浓度变化引起干扰作用的变化。从实用考虑：相对的内容在临床实验中更有意义。例如：在标本中含有120g/L蛋白和正常标本含有70g/L相比较确定蛋白会引起干扰。这样，纯粹的干扰作用是50g/L而不是120g/L蛋白。在正常血清的基体中70g/L蛋白的作用是恒定的，相对于真正的分析物是系统的方法偏倚。常以空白测定和样品的预处理来消除这样的干扰所产生的恒定偏倚。用含有血清的校准品作校准及计算补偿因子也是用来消除这类系统偏倚。干扰不涉及在分析前就使分析物浓度发生真实变化的作用，这些作用可以是：体内药物作用（如：因使用药物后的生理响应使激素浓度变化）。标本处理（由于蒸发、溶血或者血清和凝块过长的不分离使电

3、解质、蛋白、水含量的改变）。标本收集例如：在静脉滴注时（内含分析物）取样。这些作用可能会影响实验结果的临床应用，但不能视作“分析干扰”。因为不管分析物原来如何，一个检测系统或分析方法应检测标本中所有的分析物。分析干扰所引起最终结果是人为的增加（阳性干扰）或减少（阴性干扰）。干扰物质的来源：在标本中的干扰物可分成内源性和外源性；1体内某些病理条件下产生的（例如：胆红素、脂肪、蛋白质、血红蛋白等）；2在病人治疗时摄入的（例如：药物、非肠道维生素、血浆增溶剂、抗凝剂等）；3自我摄入（营养补充、饥饿过度、酒精或药品中毒）；4由于标本被污染（抗凝剂、防腐剂、血清分离器、收集、容器、塞子等）；3非特异性干

4、扰物可能和分析物以同样的方式参与反应，例如：苦味酸肌酐方法中酮酸干扰，重氮胆红素方法中吲哚酚硫酸盐的干扰。在免疫化学方法中干扰物可能和抗体发生交叉反应。例如：茶碱方法中咖啡因的干扰。干扰物可能催化某一反应，反应结果中和了底物。例如：腺苷激酶可在CK反应中消耗底物ADP。4.基质效应 干扰物可改变样品基质的物理特性，如粘度、表面张力、浊度或离子强度等，从而改变被测量浓度。5.水取代作用 非水物质（蛋白、脂质），由于取代了血浆中部分水体积，影响了一些分析物的测定。这些作用考虑或不考虑为干扰作用，取决于要求的结果是以总体积的浓度表示，还是以血浆水的浓度来表示。临床要求较之分析原理更重要，须确定是否考

5、虑取代作用是一个干扰，例如：用火焰光度法或间接电位法作Na+测定时，高脂血症被考虑为是一种干扰。因为Na+在血浆水中的浓度在临床上有重要意义。6.酶抑制作用 干扰物可与金属激活因子形成螯合物、与催化位点结合、氧化必需巯基基团而改变被测量或试剂中酶的活性。2干扰可视作系统的和随机的。 对一个特别监测的病人而言，如干扰物总是以同一浓度存在的话，偏倚将是恒定的，偏倚随干扰物浓度而改变。这种干扰是系统的。 对于一给定病人人群，由于干扰物浓度各异，由干扰物所形成的偏倚将是随机的，而且显著地作用于总随机误差，影响病人结果。 无论何种情况，由一个干扰物引起的未预料作用可导致对实验室结果解释的严重误差。3实验

6、室是克服这些问题的主要角色，可由：1) 只使用对干扰物的敏感度不高和确定的方法。2) 获取资料，确定是否有干扰物质存在于样品。3) 告诉医生，由于有干扰存在，结果可能是不可靠的。 厂商可提供给实验室完整的有关干扰评价的结果文件，这是很好的资料来源。可能干扰物 样品类型干扰物实验浓度药物与代谢物血清、血浆与全血 至少三倍于治疗药物浓度或最高预期浓度 尿液至少三倍于24小时尿清除率 内源性干扰物血清、血浆与全血 目标病人群体中预期最高浓度 抗凝剂与防腐剂血清、血浆与全血 五倍于添加浓度 尿液五倍于24小时尿清除率 样品采集与处理设备血清、血浆与全血 样品与设备接触24小时，样品体积应与实际使用相同

7、，需注意防止样品蒸发与不稳定分析物的丢失，同时应准备一份与实验样本相同的对比样本，此样本除了不与实验设备接触外其余处理过程均与实验样本相同。 干扰标准及被测量与干扰物实验浓度的确定建立被评价方法的干扰标准 因干扰所致的允许误差标准与实验结果的临床应用有关，可通过总允许误差进行推断。总允许误差(TEa)包含方法学偏差、不精密度及干扰成份，是对检测方法的准确性要求。对于已明确提出准确性要求的分析物，可从总允许误差中减去方法学偏差、不精密度及相应生物学变异，剩余残差即为干扰成份。对于无明确准确性要求的分析物，可采用下述方法确定总允许误差。a)根据生物学变异确定总允许误差：不同被测量均有其固有的个体内

8、（CVI）及个体间生物学变异（CVG），现被广泛接受的观点是检测方法的理想质量指标为结果偏倚，总允许误差 。对因方法学或技术能力无法满足上述要求的分析项目，可使用最低质量规范。据生物学变异导出的常见生化检验项目质量规范见附录A。b)通过临床实践得出总允许误差：基于大量临床和实验室经验，经过广泛讨论，由专业学会、组织或个人在专业建议或指南中提出的准确性指标。c)据分析变异确定总允许误差：干扰标准也可从总的长期分析不精密度中得出。如果干扰物所引起的误差小于一个标准差，则可认为被评价干扰物的作用不大可能影响临床决定，因此不认为这种物质是干扰物。但考虑到现有的检测系统常具有极佳的精密度，用这种方法决定

9、干扰标准可能使很多物质的干扰效果放大。d) 基于法规和室间质量评价的质量规范：总允许误差也可以从有关实验室质量管理的法规中得到。如CLIA88法规文件中提供的常见检测项目的质量规范。被测量实验浓度的确定 通常选取被测量的2个医学决定水平作为干扰实验时的被测量浓度，也可根据临床需要选用参考范围的高限或低限或病理浓度。样品制备基础样品从未服用过药物的健康人群中采集新鲜标本（血清、尿液等），将标本混匀后即成为基础样品。如新鲜标本难以取得，也可采用冰冻或冻干样品。但应注意这类样品中含有防腐剂与稳定剂或其他可能会对检测结果造成影响的成分。因此在应用此类样品之前应参照相应国家卫生行业标准对其基质效应进行评价。 确定基础样品中的被测量浓度，可通过添加纯分析物使样品中被测量浓度达到医学决定水平。操作方法1.取以上正常样本分为三份，每份0.9ml并编号。2.基础样本：加蒸馏水0.1ml 干扰样本1：加溶血标本和蒸馏水各0.05ml 干扰样本2：