柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊测定USP课件

1、柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊测定（USP）水杨酸的限量测定样品的氯仿溶液冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林）洗脱：冰HAc+乙醚（解吸）洗脱：氯仿（水杨酸）测定：306nm，A样 A对限量：以阿司匹林标示量计，允许水杨酸的量为0.75%三氯化铁作用与水杨酸形成紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。尿素作用高浓度尿素的存在可使配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄。磷酸的作用若有少量FeCl3被冲洗下来，色带变黄，影响结果，磷酸可与Fe3+形成不溶性磷酸铁而避免干扰。对照溶液75g10ml/50ml,样品液100mg/50ml阿司匹林的含量测定上样：样品的氯仿溶液冲洗：氯仿（弃去）洗脱：冰HAc-CHCl

2、3（阿司匹林+水杨酸）测定 ：280nm计算：对照品比较法（测得的是总量）碳酸氢钠的作用：使阿司匹林和水杨酸均成钠盐保留在柱上。冰Hac作用：解吸 高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入进样阀的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。 现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动

3、相改为高压输送（最高输送压力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。溶液配制：内标溶液：取咖啡因，加乙醇制成4mg/ml对照品溶液：阿司匹林0.15g，精密加内标液5ml，稀释至50ml，精密量取2ml，稀释至50ml。供试品溶液：取5粒，精密称定，在40-50C水浴上熔融，精密量取适量（相当于阿司匹林0.15g），精密加内标液5ml，加乙醇至5

4、0ml，精密量取2ml，稀释至50ml。测定法：取对照品溶液和供试品溶液各10ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算求得供试品溶液中阿司匹林的浓度Cx计算供试液 C样=（R样/R标）C标C样稀释倍数平均粒重称样量标示量 100% 标示量%=测定法：精密称取丙磺舒对照品流动相溶液和供试品流动相溶液各20ul，分别进样，记录色谱图（按课本页公式计算丙磺舒含量）固定相填充剂的选择最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶 反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用 正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等 硅胶适用PH2-8 当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当p

5、H小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落PH大于8需选用耐碱填充剂PH小于2需选用耐酸填充剂 返回流动相的选择由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于5，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。 返回 系统适用性试验对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起当作完整的系统进行评估。 系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。系统适用性试验参数的设置需根据被验证方法类型而定。 色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部分。 ：是色谱柱的理论板数：是分离度重复性：取各品种项下的对照溶液，连续进样35次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大