肺癌个体化治疗课件

1、 肺癌个体化治疗相关分子标记的研究进展 北京协和医院 曾瑄肺癌的驱动基因 90酪氨酸激酶（TKs） 56跨膜 （i.e.受体酪氨酸激酶, RTKs） 518蛋白激酶 34非跨膜 丝氨酸/苏氨酸激酶（STKs） 脂质激酶 NSCLC中，驱动突变的关键基因大多数为信号传导蛋白 (如蛋白激酶) 编码基因， 信号传导蛋白通过将磷酸基团从ATP转移至特异性靶蛋白，调节细胞增殖和生存。 NSCLC中，驱动突变也常见于编码GTP结合蛋白的基因， G蛋白通过与下游分子的相互作用，调节细胞生长、分化和凋亡。肺癌驱动基因酪氨酸激酶丝氨酸/苏氨酸激酶脂质激酶RASRAFMEKERK pathwayPI3KAKTmT

2、OR pathwayLung CancerAdenocarcinoma 50% in ChineseSquamous Cell Cancer驱动基因异常及临床意义12345678910111213J Clin Oncol 31:1097-1104, 2013J Clin Oncol 31:1097-1104, 2013分子检测技术RNA检测chromosomeDNA检测3730XL (2002)GS-FLX/Titanium 454 (2005)G1/G2Illumina(2006) SOLiD v2.03/3.0 ABI(2007)HeliscopeHelicose (2008)Pacifi

3、c Bio(2009) Complete Genomics (2009)Seq. Chem.SangerPyroseqSBSSBLSBSSBSSBLRead length (bp)800 225-40033-7533-502580032# of reads/run96-384400,000 1 x 10640-100 x 10640-100 x 106500 x 106TBDNAAccuracy99.999%99.5%99.0%99.94%99.95%TBDTBDCost/Mb$800$80$5$4$3TBD$2各种NGS比较NGS: Next Generation Sequencing分子检

4、测方法的选择检测试剂方法：伴随诊断 Companin diagnoticsV1E13;A20E20;A20E20ins18;A20E6;A20E6ins33;A20E14;ins11del49A20T3;A20KI24;A20KI15;A20E6;A19E2;A20E2;ins117A20E3;ins69A20E14;del12A20E14;del36A20E17;ins30A20E17ins61;ins34A20E15del19;del20A20E18;A20V2V3aV3bV4V5bV5aV7V6V8aV8b“V5”“V4”E17ins68;A20EML4-ALKKIF5B-ALKTFG-

5、ALKKI17;A20ALK-PTPN3KLC1-ALKKL9;A20ALK Kinase domain在非小细胞肺癌中已确定了几种EML4-ALK 融合变异体，并证明其具有功能活性转化需要ALK酪氨酸激酶的活性。证据表明ALK抑制剂可致体内肿瘤缩小 ，提示癌基因依赖，可以作为潜在的靶点非小细胞肺癌中的ALK基因 融合ALK激酶结构域（80%, 其中81%， 未知19%）（20%）HIP1-ALK . . J Thorac Oncol. 2014;9: 285294举例 ALCL: 间变性大细胞淋巴瘤 IMT: 炎性肌纤维母细胞瘤 DLBCL: 弥漫大B细胞淋巴瘤 NSCLC: 非小细胞肺癌K

6、IF5B-ALKt(2;10)(p23;p11)肿瘤中已知的ALK融合基因类型荧光原位杂交ALK (+) Fluorescence in situ hybridization, FISHALK: Anaplastic Lymphoma Kinase2p21 EML4Positive: 15% ALK临床研究的数据均使用FISH诊断PROFILE 1001PROFILE 1005PROFILE 1007PROFILE 1014PROFILE 1029I期临床II期临床III期临床分离探针FISHNCT00932893 NCT00932451 NCT01154140Phase III clinic

7、al trialsCrizotinibFDA将FISH作为克唑替尼的伴随诊断方法其它融合基因Virchows Arch (2014) 464:347358各种靶分子的检测方法分子检测的要点 规范化操作（SOPs） 人员 实验室 标本 设备 试剂 流程 多学科合作 临床 病理 影像 新技术平台病理评估与质量控制肿瘤组织标本病理学评估组织切片非小细胞性肺癌诊断及类型肿瘤细胞比例肿瘤细胞总数标识肿瘤丰富的区域富集肿瘤细胞H&E 染色片用于病理评估白片用于提取DNA建议最少切片数：-手术标本，5 m X4-小活检标本，5 m X8 组织标本来源手术标本支气管下活检经皮穿刺活检 标本处理及贮存新鲜冻存：

8、液氮或-80CFFPE选择合适的检测方法及流程的优化-SOP包括.实验室人员试剂设备标本库存文件操作36PCR实验室空间ReagentPreparationSpecimenPreparationReaction Set-up andAmplificationProductAnalysis试剂准备DNA提取PCR产物分析Workflow新技术平台201120122013检测率6%14%20%阳性率30%32%33%检测中心数395070平均检测时间(天)1076中国EGFR突变检测现状Data form AstraZeneca China internal截至2013年4月，全国共有58家医院建立了院内EGFR基因突变检测平台2012年院内检测中心2013年新建的院内检测中心中国院内EGFR基因突变检测中心针对驱动基因靶点的新药研究1J Carcinog. 2013; 12: 22. Published online Dec 31, 2013. doi: 10.4103/1477-3163.123972212345678910111213141516A s