色谱指纹图谱评价课件

1、中药色谱指纹图谱操作规范与评价探讨祝晨蔯博 士教 授广州中医药大学中药学院zhuchenchen2022/10/111主 要 内 容 色谱指纹图谱的缘起、属性、特点和作用 中药色谱指纹图谱方法学 中药色谱指纹图谱试验的规范化 中药色谱指纹图谱的定性评价方法 应用实践2022/10/112 色谱指纹图谱的缘起、属性、特点和作用2022/10/113中药质量控制现状中国药典关于药材所收录的信息【浸出物】【炮制】【性味与归经】【名称】【性状】【鉴别】【检查】【含量测定】【功能与主治】【用法与用量】【贮藏】【来源】宏观特征鉴别微观特征鉴别生药学动物分类学植物分类学矿物学微生物分类学药物分析学经验鉴别定

2、性鉴别含量测定指标成分、对照药材2022/10/114齐墩果酸、熊果酸、大黄酸、槲皮素、小檗碱目前中药质量控制的局限 缺乏化学对照品 化学对照品缺乏专属性 物质群体间的量化特征无法体现黄柏、黄连 小檗碱、巴马亭的比例人参、西洋参或三七几种人参皂苷的比例 中药整体的用药的特色无法体现2022/10/115中药色谱指纹图谱的特点及属性 中药指纹图谱同传统鉴别方法的区别在于：它不是从一个“点”，而是从一个二维的“面”（一个在特定条件下的完整色谱的整体特征信息）来鉴别真伪，同时在定量操作的前提下，得到“量”方面的信息还可以估量待测样品之间总体量的差别，从而从量的角度给以动态的质量评价。 色谱指纹图谱不

3、强调个体的绝对唯一性，而强调统一药材群体的相似性，及物种群体内的唯一性2022/10/117中药色谱指纹图谱的特点及属性整体性模糊性对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同 比较色谱的“完整面貌”，在不同环境的样品色谱中搜索和提取与该药材指纹图谱“面貌”相关的特征，加以区别 因此，中药色谱指纹图谱强调的是准确的辨认，而不是精确的计算2022/10/118柱色谱Column Chromatography平面色谱Planar Chromatography液相色谱 Liquid Chromatography (LC)气相色谱Gas Chromatography (GC)薄层色谱Thin L

4、ayer Chromatography (TLC)毛细管电泳Capillary Electrophoresis（CE）2022/10/1110反相高效液相色谱 (RP-HPLC)Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography适用范围广分离性能好分析速度快流动相选择范围宽灵敏度高色谱柱可多次重复使用流出组分可以收集采用多种检测器，可同时获取保留值信息和化合物的光谱、值谱信息 对较为复杂的色谱实验条件要求比较苛刻，由此带来不同实验室之间重现性的难度增大2022/10/1111薄层色谱Thin Layer Chromatography (T

5、LC)可在同板同时分析多达18个样品，时效高所用的是正相展开剂，其组成变化灵活，可适应多种成分的分离离线操作，即可直观比较图谱，又可扫描得到轮廓图和处理数据占机时间短具有色彩参数，可获得色彩丰富的色谱图像，直观性强；同时辅以功能团显色剂还可提示成分的类别，提高鉴别的专属性。展距局限在10cm20cm ，柱效相对较低，对复杂组分不提高分离度则难以提取指纹特征的药材受到限制。开放系统，对环境温度、相对湿度要求较高2022/10/1112 中药色谱指纹图谱试验的规范化2022/10/1114中药指纹图谱的建立指纹图的获取方法验证指纹图的校验和复核中药材指纹图谱饮片指纹图谱中药提取物指纹图谱中药生产中

6、间产品指纹图谱中药各类制剂和相关产品指纹图谱中药指纹图谱2022/10/1115供试品的收集真实性、代表性；收集量不少于 10 批原始纪录药材名称供试品来源药材名称收集时间及收集人货源情况调查基原鉴定及鉴定人质量评估供试品的留样、贮藏和标签 原料药材2022/10/1117 半成品原始纪录半成品名称混批前批号日期提取方法（关键技术）混批后批号中药指纹图谱供试品的留样、贮藏和标签2022/10/1118 成 品原始纪录供试品批号生产单位供试品数量供试品的留样、贮藏和标签2022/10/1119供试品制备取样称样制备定容放置标签避光、低温、密闭容器条件下短期放置 标示浓度溶剂萃取、固相萃取、其他方

7、法供试品与选样1:10具有代表性与药材标号一致2022/10/1120对照品（参照物） 对照品（参照物）的作用 考察指纹图谱的稳定程度和重现性 有助于指纹图谱的辨认 对照品（参照物）的选择 供试品种的活性成分或指标成分 指纹图谱中的稳定的指纹峰 内标物 对照品（参照物）溶液制备2022/10/1121色谱方法选择的原则 专属性 建立的指纹图谱必须能够表达该品种的特征 重现性 同一品种同一样品指纹图谱中构成指纹特征的各特征峰（或斑点）作为整体（峰位、峰数、峰的丰度、各峰的大致比例）在不同实验室和不同操作者之间得到的色谱整体特征应有较高的相似度 普遍适用性 色谱方法和实验条件应易于推广和便于操作指

8、纹图谱的实验研究2022/10/1122 仪 器 性能能够满足指纹图谱实验需要 需经校验 试验方法和试验条件优选的目的 选取相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特征的指纹图谱，以满足指纹图谱的专属性、重现性和普遍适用性的需要2022/10/1124试验需考察的内容 液相色谱 色谱柱：比较试验加以选择2022/10/1125 适宜的柱温和检测波长2022/10/1127 薄层色谱 展开剂系统：至少需作三种进行比较 考察湿度和温度的影响2022/10/1128 气相色谱 色谱柱：选择适宜色谱柱 升温程序设定样品的预处理不同提取方法比较样品预处理前后比较2022/10/1129中药指纹图谱的方

9、法验证 目的 考察和证明采用的指纹图谱测定方法具有可靠性和可重复性，符合指纹图谱的要求。 验证内容 专属性 准确度（结果准确度和系统准确度） 精密度（重复性、中间精密度、重现性） 范围 稳健性（耐用性）2022/10/1130 专属性（Specificity） 指纹图谱的测定方法对中药样品的分析鉴定能力专属性的考察参数 峰纯度 总峰响应值 容量因子分布 最难分离物质对的分离情况 总分离效能 此外，还需评价有关样品（药材、中间体、制剂和相关产品）见的相关性，并尽可能显示出样品中特征响应2022/10/1131 准确度（Accuracy） 测定系统所的指纹图谱与“对照用指纹图谱”之间的相近程度 系

10、统准确度 仪器的操作指标与波动范围 样品在分析系统中的残留和对基线的响应 色谱分离情况（峰纯度、再现程度、峰型变化描述） 指标成分的定量内容 结果准确度 多批次（10 批以上）样品测定结果的相似度2022/10/1132 精密度（Precision） 规定条件下对均质样品多次取样进行一系列检测结果有相近程度（离散度） 重复性（Repeatability） 同样的操作条件下在较短的时间间隔的精密度 线性范围内至少测定 9 次或100的试验浓度下测定6次 中间精密度（Intermediate Precision） 实验室内部条件改变测定的精密度 重现性（Reproducibility） 不同实验室

11、间的精密度2022/10/1133 范围（Range） 样品中被分析组分的较高浓度和较低浓度的一个区间，并已证实在此区间内，该方法具有合适的准确度和精密度 相似度维持在0.9以上的浓度范围位指纹图谱测定范围 稳健性（Robustness） 不同条件下分析同一样品所得结果的变化程度，是中药指纹图谱测定方法耐受环境变化的显示2022/10/1134指纹图谱实验操作规程 高效液相色谱指纹图谱实验操作规程 薄层色谱指纹图谱实验操作规程 气相色谱指纹图谱实验操作规程 毛细管电泳指纹图谱实验操作规程2022/10/1135 中药色谱指纹图谱的定性评价方法2022/10/1136中药指纹图谱整体评价方法面临的难题? 没有足够的标样，能否进行可靠的中药多组份的定性定量分析？能否建立起基于中药的色谱指纹图谱中要质量的评价标准？ ? 如何对待色谱峰保留时间的漂移？? 如何对待色谱分析仪器的背景与基线的漂移？? 如何选取合适的内标化合物？如果难于选取，是否存在其他的方法来解决此问题? 如何处理色谱图中大量的未知成分2022/10/1137中药指纹图谱的信息意义 表达中药复杂混合体系中各种不同化学成分浓度分布的整体状况中药指纹图谱的标准建立与矢量相似度量原理相关系数：反应的是变化趋势。比较各种波谱的相似程度时均采用该参数作为比较标准。相关系数在