高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量

1、高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量【摘要】目的：建立牛黄清胃丸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱：AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250,5，流动相：甲醇-0.1l/L磷酸二氢钠缓冲液pH=2.770：30，V/V，流速：1.0lin-1，检测波长：328n，柱温：室温22。结果：绿原酸在0.010.25gl-1范围内线性关系良好r=0.9998；平均加样回收率为98.3%，RSD=1.4%n=6。结论：该方法简便易行，结果准确可靠，可适用于牛黄清胃丸的质量控制。【关键词】高效液相色谱法牛黄清胃丸绿原酸含量测定Deterinatinfhl

2、rgeniAidinNiuhuangqinEipillsbyHPL【Abstratbjetive】TsetupaethdfrqualityntrlfNiuhuangqingeipills.ETHDHPLethdasdevelpedtquantitativedeterinatin.AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250,5).Thebiliphaseasethanl-0.1lphsphriNaH2P4(70:30V/V).Thelunteperatureas22,theavelengthfrdetetinas328n,flrateas1.0lin-1.RESUL

3、TSThehlrgeniAid;averagefreveryrateas98.3%,andRSDas1.4%(n=6).NLUSINTheethdissiple,aurateandsuitablefritsassaying.【Keyrds】HPL;Niuhuangqingeipills;hlrgeniAid;deterinatin牛黄清胃丸为?卫生部药品标准?第一册中药成方制剂收载的品种，由牛黄、菊花、黄芩、黄柏、桔梗、麦冬等17味中药组成，具有清胃泻火，润燥通便之成效。临床用于心胃火盛、头晕目眩、口舌生疮、牙龈肿痛、乳蛾咽痛、便秘尿赤1，疗效良好。处方中菊花为君药之一，绿原酸为其主要有效成分

4、，原标准中只有显微鉴别。为了更好地控制制剂的内在质量，本文采用高效液相色谱法测定牛黄清胃丸中绿原酸的含量，以期为该制剂的质量提供快速、准确的测定方法，现报告如下。1仪器与试药L2022A高效液相色谱仪，LASSVP色谱工作站；绿原酸对照品批号：110753-200212，由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；牛黄清胃丸为市售样品北京同仁堂股份同仁堂制药厂，规格6g/丸，批号：7013189，6015504，7011172。甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：AgilentTehnlgiesZRBAXExtend-184.6250

5、,5；流动相：0.1l/L磷酸二氢钠缓冲液取磷酸二氢钠NaH2P42H215.6g，加水至1000l，制成0.1l/L的溶液，参加磷酸适量，使pH值为2.7-甲醇70：30，V/V；检测波长：328n；流速：1.0l.in-1；柱温：室温22。理论板数按绿原酸峰计应不低于2500。2.2溶液制备2.2.1对照品溶液的制备精细称取经五氧化二磷减压枯燥12小时以上的绿原酸对照品适量置棕色量瓶中，加水制成0.1gl-1的对照品溶液10以下保存，即得。2.2.2供试品溶液的制备取重量差异项下的牛黄清胃丸，剪碎，混匀，取约6g，精细称定，置锥形瓶中，精细参加甲醇20l，称定重量，加热回流2小时，冷却，再

6、称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤液10l，蒸干，残渣加三氯甲烷5l，浸渍3分钟，弃去三氯甲烷液，残渣挥去三氯甲烷，加水适量使溶解，并转移至2l量瓶中，加水至刻度，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液2。2.2.3阴性对照溶液的制备取除菊花以外的处方中其余药材的非常之一量，按法制成大蜜丸，再按供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液。2.3专属性试验分别精细汲取供试品溶液、阴性对照溶液和对照品溶液各10l注入液相色谱仪，记录色谱图图1。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一样保存时间绿原酸9.707in的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。2

7、.4线性关系考察精细汲取绿原酸对照品贮备液浓度：1.0gl-1各适量，分别置于10l量瓶中，加水定容，配成浓度分别为0.01、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25gl-1的溶液6份，摇匀，用0.45微孔滤膜过滤。精细汲取续滤液各10l，注入液相色谱仪，测得峰面积。以峰面积A为纵坐标，其浓度为横坐标，得绿原酸的回归方程为：A=2.1910-21.8210-2，r=0.9998n=6。结果说明，绿原酸在0.010.25gl-1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。2.5精细度和稳定性试验精细汲取绿原酸对照品溶液0.10gl-110l，在上述色谱条件下重复进样5次，求得绿原酸溶液峰面积的相

8、对标准偏向RSD为0.6%，说明精细度较好。取同一对照品溶液，在0、4、8、10、12h分别进展测定，结果说明黄芩苷对照品溶液的峰面积在12h内稳定，RSD为0.8%n=5。2.6重复性试验取供试品批号7013189，共5份，分别按“2.2.2供试品溶液的制备方法制备供试品溶液进展测定，求得绿原酸含量的RSD为1.7%n=5，说明重复性良好。2.7加样回收率试验精细称取含量的样品批号7013189，绿原酸含量0.0472gg-1，平均丸重5.932g丸-1适量，共6份，分别精细参加绿原酸对照品溶液适量，照“2.2.2供试品溶液的制备方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。2.8样品含量测定分别精细汲取供试品溶液与对照品溶液各10l注入液相色谱仪，测定三批样品中绿原酸峰面积，按外标法计算其含量n=5，结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每丸牛黄清胃丸的绿原酸含量质控定量限为0.20g。表1绿原酸加样回收率试验表23批样品含量测定结果3讨论3.1通过对3批样品中绿原酸的测定，结果说明最高含量为0.30g丸-1，最低为0.28g丸