PCR基因扩增实验室的规范化设置

1、PCR 基因扩增实验室的规矩化设置为避免污染，必需严格遵循临床基因扩增试验实验室设置标准设置临床基因扩增试验实验室。 临床基因扩增试验实验室四个隔开的工作区域中每一区域都须有专用的仪器设备。各区域都必需有明确的标记，以避免设备物品如加样器或试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备物品发生混淆。进入各个工作区域必需严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反映混合物配制和扩增区（简称扩增区）至产物分析区，避免发生交叉污染。在不同的工作区域应使用不同颜色或有鲜明区别标志的工作服，以便于辨别。此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。 清洁方法不当也

2、是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。（一）试剂贮存和准备区下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反映混合液的制备。贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。在打开含有反映混合液的离心管或试管前，应将其快速离心数秒。试剂原材料必需贮存在本区内，并且在本区内制备成所需的贮存试剂。当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于经常打开反映管吸液而造成污染。含反映混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。

3、为避免因单次反映取液而频繁的冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反映数来决定。主反映混合液的组成成份尤其是聚合酶的适用性和稳定性经过预试验来检查，评判结果必需有书面报告。关于于热启动技术（在第一个高温变性步骤后加入酶），聚合酶也可不包含在主反映混合液中。在整个本区的实验操作进程中，操作者必需戴手套，并且经常更换。此外， 操作中使用一次性帽子也是一个有效地防止污染的措施。 严禁用嘴吸取液体， 加样器和吸头等必需经高压处理。工作结束后必需立即关于工作区进行清洁。本工作区的实验台表面应可耐受 由于紫外照射的距离和能量关于去污染的效果非常关键，

4、因此可使用可移动紫外 灯（254nm），6090cmbp，关于紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必需延长照射时间，最好是照射过夜。实验室及其设备的使用必需有日常记录。（二）标本制备区下述操作在该区进行：临床标本的保存，核酸（RNA、NA）提取、贮存RNAcNA）线管灯可用来确保工作后关于实验台面的充分照射。 样本处理关于核酸扩增有很大影响，必需使用有效的核酸提取方法，可在开展临床标本检测前关于提取方法进RNAcNARNAcNANAcNARNAcNA制备区，不得在本区关于样本进行 PCR 扩增。（三）扩增区下述工作在本区内进行：NAcNANAcNA（来自样本制备区）的加入和主反映混合液（来自

5、试剂贮存和制备区）PCR但必需注意的是，矿物油本身也可能成为一种持续性的污染源。用过的加样器 必需注意清洁消毒。 完成操作及每天工作后都必需关于实验室台面进行清洁和消毒，紫外照射方法与前面区域相同。如有溶液溅出，必需处理并且作出记录。（四）扩增产物分析区下述操作在本区内进行：扩增片段的测定。 核酸扩增后产物的分析方法多种多样，如膜上或微孔板上探针杂交方法（同位素标记或非同位素标记）、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SouthernPCR-ELISAHC1PCR掉。用过的吸头也必需放至 1mol/L HCl如焚烧。由于本区有可能会用到某些可致基因突变和有毒物质如溴化乙锭、丙烯酰胺、甲醛或同位素等，故