马拉色菌属的分类及其在几种皮肤病的分布情况

1、马拉色菌属的分类及其在几种皮肤病的分布情况发表时间：2010-09-12发表者：皮肤科(访问人次：24)中华皮肤科杂志2000年第5期第33卷论著作者：熊琳冉玉平周光平代亚林单位：610041成都，华西医科大学附属第一医院皮肤性病科关键词：马拉色霉菌属；分类法；皮肤疾病【摘要】目的研究马拉色菌属的分类及其在一些皮肤病的分布情况。方法以 标准株作对照，用生理生化学及形态学方法将150株来源于花斑癣(29株)、 马拉色菌毛囊炎(16株)、脂溢性皮炎(49株)、甲真菌病(33株)及正常人 皮肤(23株)的马拉色菌进行分类及描述，并分析了各菌种在一些皮肤病的分 布情况。结果共分离出4个菌种：合轴马拉色

2、菌65株、糠秕马拉色菌13株、 钝形马拉色菌1株、球形马拉色菌71株。其中合轴马拉色菌和球形马拉色菌各 占43.3%和47.3%；马拉色菌毛囊炎中全部 为球形马拉色菌。结论此分类系统 为经济、简便及可应用的马拉色菌属分类鉴定系统；球形马拉色菌与马拉色菌毛 囊炎密切相关。Study on Taxonomy of the Genus Malassezia and the Distribution of it in Some DermatosesXIONG Lin, RAN Yuping, ZHOU Guangping, et al.(Department of Dermato-venereolog

3、y, First Hospital, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041)Abstract Objective To study the taxonomy of Malassezia and distribution of the it in some dermatoses. Methods One hundred and fifty strains of Malassezia yeasts from pityriasis versicolor (29 strains), Malassezia folliculit

4、is (16 strains), seborrheic dermatitis (49 strains), onychomycosis (33 strains), and healthy individuals(23 strains) were studied, according to physiological and morphological features in culture, and compared to standard strains. Results 4 species of Malassezia yeasts including M.sympodialis (65 st

5、rains), M.furfur (13 strains), M.obtusa (1 strain) and M.globosa (71 strains) were found, and M.sympodialis and M.globosa were accounted for 43.3% and 47.3% respectively. M.globosa were found in Malassezia folliculitis only. Conclusion The methods described in this study represent an economical, sim

6、ple approach which is available for identification of Malassezia species. There is a close correlation between M.globosa and Malassezia folliculitis.【Key words Malassezia Classification Skin diseases马拉色菌属(Malassezia)是人类及温血动物皮肤的常驻菌群，与花斑癣、 马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎、特应性皮炎及某些银屑病有关。近年来还有引起 甲感染和系统感染的报道。该菌属的多形性已为人所知。我

7、们以标准株作对 照，用生理生化学及形态学方法对150株临床分离的马拉色菌进行分类和描述， 并分析了各菌种在不同皮肤病的分布情况。材料和方法一、菌株临床分离株：从本科真菌实验室选择马拉色菌150株，其来源分别为：花 斑癣29株、马拉色菌毛囊炎16株、脂溢性皮炎49株、甲真菌病33株及正常人 23株。标准株：合轴马拉色菌(M.sympodialis CBS 7222)、糠秕马拉色菌(M.furfur CBS 1878、M.furfur CBS 7019)、斯洛菲马拉色菌(M.slooffiae CBS 7956)、钝形马拉色菌(M.obtusa CBS 7876)、球形马拉色菌(M.globosa

8、 CBS 7966)、限制性马拉色菌(M.restricta CBS 7877)由法国巴斯德研究所Gueho 教授惠赠。二、培养基Leeming和Notman培养基：质量分数为1%蛋白月东、0.5%葡萄糖、0.1% 酵母浸膏、0.4%牛胆盐、0.1%甘油、0.05%单硬脂酸甘油脂、0.05%吐温60、 1%全脂牛奶、2%橄榄油、1.2%琼脂、0.5%放线菌酮、0.05%氯霉素。七叶苷(Esculin)琼脂培养基：上述培养基加入0.2%枸橼酸铁、0.1%七 叶苷。沙堡培养基：质量分数为1%蛋白东、4%葡萄糖、1.2%琼脂、0.5%放 线菌酮、0.025%氯霉素。：3*1月品：也酒.有注财状山煽的

9、剧即国秋仙裾，孔烈色提前尤步，fi 45 mn Im原段；担电*I 5住边我为嫁峭知暗隋此忡活们出 直径4-3 e值 v：帏庠孔袖也为 *出逝状必:毫够 降建曹店M.相It.礼哽住.直捶工z 山非?S俄牲WL右徂迎状 讪遂博眼旧承浙跚.点tfiMa,lUS色.h 糜皿图1马拉色菌属各菌种在Leeming和Notman培养基，32C培养10d后的菌落形态, ； fr斌的抱也足制昨出Stn小，薄球.叩很 mi rJ r& r-购 耻皿巧传a我rft2虫匡俭；.,大小布等句起亍，iyiw.,，！旺I ； 麻色的.前培囱 5弛（-I：.耳.膨叫q %代喧;EMW图2马拉色菌属各菌种细胞形态（50%派克

10、墨水染色，X1000）三、菌种分离、培养用刮屑法或胶带法在患者典型皮损或正常人面部取材，接种于Leeming和 Notman培养基平板中，32C培养714d。将经50%派克墨水染色后确定为马拉 色菌的第一代培养物在同种培养基平板上画线培养分离单菌落，取单菌落增菌保 存。四、菌种鉴定待鉴定菌株与标准菌株同时实验。鉴定前48h活化菌种。鉴定方法如下:将菌种接种于沙堡培养基上32C培养714d,能在沙堡培养基上生长者 为厚皮马拉色菌。过氧化氢酶试验：用无菌棉签挑一块菌落置于无菌载玻片上，滴加3%过 氧化氢溶液，产生气泡为阳性。可鉴定出限制性马拉色菌。吐温试验及PEG35蓖麻油(CremophorEL

11、)试验：取一环菌种与5mL生 理盐水充分混合后，取2mL菌悬液与16mL沙堡培养基(温度降至4045C)混 合制成含菌平板。用直径3mm打孔器在平板上无菌打孔5个，分别加入100%吐 温 20、100%吐温 40、100%吐温 60、100%吐温 80 及 100%PEG35 蓖麻油， 32C培养714d。在以上5种脂源周围都能生长的为糠秕马拉色 菌；高浓度吐 温20和PEG35蓖麻油周围无生长者为合轴马拉色菌；吐温80周围生长的面积 明显小于其他吐温，同时PEG35蓖麻油周围无生长者为斯 洛菲马拉色菌。吐 温20、吐温80周围无生长者为钝形、球形和限制性马拉色菌。七叶苷分解试验：取一环菌种接

12、种于七叶苷琼脂培养基上32C培养2 3d。能使培养基变黑至少1/3的为合轴马拉色菌和钝形马拉色菌，只能使培养 基顶端变黑的为糠秕马拉色菌，可疑阳性可为厚皮马拉色菌和糠秕马拉色菌，阴 性可为糠秕马拉色菌、斯洛菲马拉色菌、球形马拉色菌和限制性马拉色菌。形态学鉴定：主要用于区分钝形马拉色菌和球形马拉色菌。孢子为球形者 鉴定为球形马拉色菌，孢子为筒形者鉴定为钝形马拉色菌。形态学观察：将所得各种马拉色菌在Leeming和Notman培养基平板上画 线分离出单菌落，32C培养10d，观察菌落形态；用无菌接种针挑取单菌落涂片， 用50%派克墨水染色后观察孢子形态并照相；用2.5%戊二醛固定，按常规方法 处理

13、标本后在扫描电镜(AMRAY1000 B型)和透射电镜(JEM100SX型)下观 察并照相。结果一、150株马拉色菌的鉴定结果经生理生化学及形态学方法鉴定出合轴马拉色菌65株、糠秕马拉色菌13 株、钝形马拉色菌1株、球形马拉色菌71株，未发现厚皮马拉色菌、斯洛菲马 拉色菌和限制性马拉色菌。马拉色菌属各菌种吐温试验和PEG 35蓖麻油试验沙 堡培养基上32C培养10d，合轴马拉色 菌在高浓度吐温20和PEG35篦麻油周 围无生长，其余吐温周围生长良好；糠秕马拉色菌在所有脂源周围生长均良好； 钝形马拉色菌仅在吐温60周围生长，其余脂源周围无生长；球形马拉色菌在所 有脂源周围均无生长。马拉色菌属各菌

14、种七叶苷分解试验：七叶苷琼脂培养基上 32C培养72h，合轴马拉色菌和钝形马拉色菌使培养基完全变黑，糠秕马拉色 菌使培养基轻微变黑；球形马拉色菌使培养基不变色。二、各菌种形态学特征观察图3马拉色菌属各菌种细胞形态（扫描电镜，X10000）3a:合轴马拉色菌，卵形孢子，可见合轴出芽方式3b:钝形马拉色菌，筒形的孢子3c:糠秕马拉色菌，卵形孢子3d:球形马拉色菌，球形孢子图4马拉色菌属各菌种细胞形态（透射电镜，X10000）各菌种均有典型的内壁锯齿状结构4a：合轴马拉色菌外：糠秕马拉色菌如：钝形马拉色菌4d:球形马拉色菌马拉色菌各菌种菌落形态见图1，镜下各菌种孢子形态见图2,扫描电镜图 象见图3,

15、透射电镜图象见图4。三、各菌种在几种皮肤病的分布来源于花斑癣的29株中，合轴马拉色菌14株（48.3%）、糠秕马拉色菌2 株（6.9%）、球形马拉色菌13株（44.8%）；来源于马拉色菌毛囊炎中的16 株全部为球形马拉色菌；来源于脂溢性皮炎的49株中，合轴马拉色菌14株 （28.6%）、糠秕马拉色菌4株（8.2%）、钝形马拉色菌1株（2.0%）、球 形马拉色菌30株（61.2%）；来源于甲真菌病的33株中，合轴马拉色菌22株 （66.6%）、糠秕 马拉色菌5株（15.2%）、球形马拉色菌6株（18.2%）； 来源于正常人的23株中，合轴马拉色菌15株（65.2%）、糠秕马拉色菌2株 （8.7%

16、）、球形马拉色菌6株（26.1%）。讨论自1846年花斑癣的病原体被认识后，其命名及分类一直比较混乱。通过对 各菌种形态学和生理生化学特性的研究以及随机扩增多态性DNA分析等的应用， 该菌迄今被分为7个种。本文应用Guillot等6的方法，以标准株为对照， 对马拉色菌进行生理生化学及形态学分类，得到4个种：合轴马拉色菌、糠秕马 拉色菌、钝形马拉色菌及球形马拉色菌，所占比例分别为43.3%、8.7%、0.7% 和47.3%。由此发现从本实验室分离的菌种主要为合轴马拉色菌和球形马拉色 菌。从形态学观察来看，各菌种菌落形态不同，特别是钝形马拉色菌和球形马 拉色菌菌落形态特征明显，可作为鉴定指标之一；

17、各菌种生长10d后，其孢子形 态具有特征性，容易鉴别。扫描电镜观察显示形态上的差异与光学显微镜下基 本相同，特别是球形马拉色菌的形态与冉玉平等的报道完全相同。马拉色菌各菌种在皮肤病中的分布：甲真菌病及正常人中2/3为合轴马拉色 菌；花斑癣中主要为合轴马拉色菌和球形马拉色菌；脂溢性皮炎中3/5为球形马 拉色菌；马拉色菌毛囊炎中全部为球形马拉色菌。提示球形马拉色菌与马拉色菌 毛囊炎密切相关。志谢法国巴斯德研究所Gueho教授为本研究提供标准菌株并指导；我科李薇 医师、法医系彭雪梅老师和病理科张杰老师对本文的支持四川省学术和技术带头人培养基金资助参考文献冉玉平，周光平，李薇，等从一例甲真菌病患者病甲

18、中分离出糠秕孢 子菌临床和实验研究报告.中华皮肤科杂志，1998，31： 276-279.李薇综述.糠秕马拉色菌的系统感染.国外医学皮肤性病学分册，1997, 23：263-265.van Belkum A, Boekhout T, Bosboom R.Monitoring spread of Malassezia infections in a neonatal intensive care unit by PCR- mediated genetic typing. J Clin Microbiol, 1994， 32:2528- 2532.Gueho E, Midgley G, Guillot J. The genus Malassezia with descr, + iption of four new species. Antonie Van Leeuwenhoek, 1996， 69:337 - 355.Guillot J, Gueho E, Lesourd M, et al. Identification of Malassezia speci