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文档简介

布鲁氏菌李天森内容布鲁氏菌概述1布鲁氏菌研究方法2本室对布鲁氏菌的防护3布鲁氏菌缺失株构建4布鲁氏菌病是人畜共患的慢性传染病，也是中华人民共和国传染病防疫法规定的乙类传染病。 布鲁氏菌概述布病危害信号通路疫苗检测布鲁氏菌胞内生存疫苗基因缺失疫苗致弱疫苗检测试管凝集虎红平板 试纸条PCR抑制剂WB信号通路本室防护构建自杀载体1.确定基因例如：牛种布鲁氏菌2308株omp10基因首先到ncbi（/）查找牛种布鲁氏菌2308株全基因组序列和目的基因omp10的基因序列。Omp10基因384bpOmp10基因上臂Omp10基因下臂取1000bp左右取1000bp左右533553上臂上游上臂下游下臂上游下臂下游3518bp卡那抗性替换2.设计引物上臂上游与下臂下游加酶切位点。4.1卡那抗性替换 需要将融合片段连接到pUC19k载体。 得到pUC19k-omp10(同源臂)-kana载体4.2无痕缺失 将融合片段连接到pMD19-T载体，酶切之后连接到pGEM-7Zf+载体，同时将SacB基因连接到pGEM-7Zf+-omp10载体，作为负筛选标记。 得到pGEM-7Zf+-omp10(同源臂)-SacB载体 5.电转化 将构建成功的载体电转进入布鲁氏菌感受态中。 6.同源重组筛选pGEM载体上下臂融合片段SacB基因pUC19K载体上臂下臂Kana基因上臂下臂目的片段上臂下臂上

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