罗氏试剂盒说明书 Toxo IgG- 04717465001-en-t

1、弓形体IgG抗体检测试剂盒IgG antibodies Toxoplasma gondii04717465001V7弓形体IgG抗体检测试剂盒弓形体IgG抗体 Elecsys 和 cobas e 分析仪 6/6 2010-01, V 7 中文2010-01, V 7 中文 5/6 Elecsys 和 cobas e 分析仪REF04618815 190 100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601中文注意：弓形体IgG抗体的高低与所采用的检测方法密切相关。因此检测报告应注明所采用的方法。用两种方法

2、测出的含量不能相互直接比较，以免出错。因此实验室向临床医师报告的结果应包括“以下结果采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法。不能与其它制造商提供的测定结果互换。”主要用途用免疫学方法定量测定人血清或血浆中弓形体IgG抗体含量。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。临床应用弓形体病一种由原生动物类寄生虫弓形体引起的常见感染性疾病。主要通过摄入被猫身上脱落的成熟囊合子污染的食物或水或者摄入没有做熟的含组织囊体的肉类。1健康个体中初次急性感染的症状非常轻微或者甚至没有症状，之后的潜伏感染通常可持续一生。不过由于免疫抑制导致潜在的弓形体感染被激活常伴随脑膜脑

3、炎。2，3由于这种寄生虫可透过胎盘，妊娠期间如果母体初次感染弓形体，可能导致胎儿的严重损害。大部分先天性感染该寄生虫的婴儿不会在出生时表现出临床症状，但可能在之后出现诸如精神活动迟滞、脉络膜视网膜炎和失聪等严重并发症。4胎儿感染率随孕龄的增长而增加。不过早期母体感染时出现严重临床表现的风险更高。4，5，6妊娠期间急性感染的早期药物治疗可预防先天性损害或减轻临床表现。4，5，6诊断弓形体感染的最常见的方法是检测抗弓形体特异性IgG和IgM抗体。弓形体IgG抗体的检测结果被用于评估是否存在弓形体感染的血清学状态，如果结果阳性可提示急性或潜伏感染。检出弓形体IgM抗体可提示急性、近期或复活的弓形体感

4、染。检测妊娠妇女的血样，如果系列样本中血清阳转或抗体滴度（IgG和/或IgM）明显升高则诊断急性获得性弓形体感染。4，6检测原理双抗体夹心法，总检测时间：18分钟第一次孵育：10l标本、生物素化的重组弓形体特异性抗原和钌（Ru）a标记的弓形体特异性重组抗原形成抗原抗体夹心复合物。第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠微粒。复合物与磁珠通过生物素和链霉素的作用结合。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。仪器自动通过2点校正的定标曲线计算得到检测结果。a)Tris(2,

5、2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1 生物素化的弓形体抗原（灰盖），1瓶，9mL；生物素化的弓形体特异性抗原（重组大肠杆菌）400g/L，氨基丁三醇缓冲液50mmol/L，pH值7.5；防腐剂。R2 Ru(bpy)32+标记的弓形体抗原，1瓶，9mL；钌标记的弓形体特异性抗原（重组大肠杆菌）400g/L；氨基丁三醇缓冲液50mmol/L，pH值7.5；防腐剂。Cal1 阴性定标液1（白盖），2瓶，每瓶1.0mL

6、：人血清，针对弓形体IgG抗体没有反应；防腐剂。Cal2 阳性定标液2（黑盖），2瓶，每瓶1.0mL：人血清中的弓形体IgG抗体近似为100IU/mL；缓冲液；防腐剂。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。所有人源性材料应被视为具有潜在感染性。两种定标液（Cal1、Cal2）：采用献血者血液制备，所有个体都经过测试并且HbsAg、抗HIV和抗HCV阴性。含弓形体IgG抗体的血清（Cal2）经无菌过滤。所用的测试方法均通过FDA的审核，或经欧洲指令98/79/EC附录，列表A的批准。

7、但是，任何检测方法都不能绝对确认排除潜在的感染危险，因此应该按照检测病人标本的处理要求一样使用本产品。一旦发生暴露，应遵循负责医疗机构的指示。7、8不可使用过期试剂。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒为瓶装即用型，适用于该系统。Elecsys 2010和cobas e 411分析仪：定标液Cal1和Cal2只能在2025在定标期间放置在仪器上。使用后，尽可能快的关闭试剂瓶并储存在28条件下。请确保开启的带拉环盖上MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪：除非需要在分析仪上使用总量定标液定标，将分装即用型定标液转移至带拉环盖的空试剂瓶

8、（定标液组小瓶）中。将供应信息标签粘贴在这些额外的试剂瓶上。将这些分装定标液储存在28每份分装定标液仅执行一个定标步骤。可通过各试剂条形码读入正确操作所需的全部信息。储存及稳定性存放于28请垂直摆放Elecsys弓形体IgG抗体试剂盒（M、R1、R2），确保使用前仪器通过自动搅拌能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用M、R1、R2开封试剂，2812周放置分析仪MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 2010和cobas e2周或如果交替在冰箱和分析仪上可储存12周（长达84小时）Cal1、Cal2开封试剂，288周放置分析仪Elecsys 2010

9、 和 cobas e 411上，2025最多5小时在MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601上一次性使用请垂直摆放定标品！请确保开启的带拉环盖上没有定标液。样本的采集和准备仅以下罗列的足量样本通过检测要求。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂、K3-EDTA和枸橼酸钠抗凝的血浆都适用。标准：阳性样本的平均回收率在血清值的80-120%以内。稳定性：2-8保存3周，25保存3天，-20保存样本可冰冻6次。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行

10、检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀的样本和冰冻样本检测前必须先作离心处理。可使用低压冻干的样本、热灭活样本以及添加叠氮化合物（高达0.1）的样本和质控品。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(20-25由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。需要的物品（未提供）REF04618823190，PreciControl弓形体IgG抗体，规格81，分别为PreciControl弓形体IgG抗体1和2REF11732277122，Diluent Universal，216ml样本稀释液，或者REF03183

11、971122，Diluent Universal，236ml样本稀释液REF11776576322，CalSet Vials，256空的带拉环盖小空瓶实验室基础设备Elecsys 2010、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：REF11662988122，ProCell，6380 mL，系统缓冲液REF11662970122，CleanCell，6380mL，测量池洗液 REF11930346122，Elecsys SysWash，1500mL，附加洗液REF11933159001，SysClean适

12、配器REF11706802001，Elecsys 2010分析杯，6060反应管REF11706799001，Elecsys 2010分析吸头，30120移液管吸头MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料：REF04880340190，ProCell M，22L系统缓冲液REF04880293190，CleanCell M，22L测量池洗液REF03023141001，PC/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell MREF03005712190，ProbeWash M，1270mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗

13、试剂针REF12102137001，反应杯/吸头组合装84反应杯/吸头组合装48盒，废物袋 REF03023150001，WasteLiner，废物袋 REF03027651001，系统清洁适配器M所有分析仪需要：REF11298500316，Elecsys SysClean，5100mL系统清洗液 检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elec

14、sys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（将定标液Cal1和Cal2放在分析仪的样本区。只在定标期间开启。有关定标的所有必要信息都编码在试剂瓶条形码标签上并被自动读入。定标后，将Cal1和Cal2储存在28下或丢弃（MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪）定标溯源性：该检测方法可溯源至来自英国NIBSC的弓形体抗体血清的世界卫生组织第三参考标准制品。每套Elecsys弓形体IgG抗体试剂的条码标签上均含有其批特异的定标信息。使用Elecsys 弓形体IgG抗体Cal1和Cal2可调整预设置的定标曲线。定校频率：

15、新批号Elecsys弓形体IgG抗体Cal1、Cal2和新鲜试剂必须进行定标（新试剂盒注册后在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）根据需要：如失控。有关规章要求可增加定标频率。质控可使用Elecsys PreciControl弓形体IgG抗体。质控1和2至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。如有必要，请重复检测相关样本。质控需遵循适用的政府规章和当地指引。计算

16、仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度，单位是IU/mL 。结果解释使用Elecsys弓形体IgG抗体测定法可按如下解释（考虑到根据国家或当地指引或建议筛查孕妇弓形体感染的相应算法）：1弓形体IgG抗体试验被作为筛查试验的第一关无活性：1IU/mL不确定：13IU/mL有活性：3IU/mL在Elecsys弓形体IgG抗体测定法中浓度1IU/mL的样本被视为无活性。3IU/mL的结果被认定为弓形体IgG抗体阳性并提示急性或潜伏感染。对于浓度3IU/mL的样本应执行弓形体IgM试验以排除早期弓形体感染。浓度3IU/mL至30IU/mL的样本且IgM试验结果为阴性：应收集第二份样本（例如3周内），如果

17、弓形体IgG抗体滴度明显升高可排除早期弓形体感染。浓度在1IU/mL和3IU/mL之间的样本被视为不确定。应对这样的样本进行复测。如果结果还是不确定，应收集第二份样本（例如3周内）。2对所有样本执行弓形体IgG抗体和弓形体IgM抗体试验，并进行平行对比。无活性：1IU/mL不确定：130IU/mL有活性：30IU/mL在Elecsys弓形体IgG抗体测定法中浓度1IU/mL的样本被视为无活性。对于浓度3IU/mL的样本应执行弓形体IgM试验以排除早期弓形体感染。浓度在1IU/mL至30IU/mL的样本被视为不确定。应对样本执行复测。如果结果仍为不确定，那么应收集第二份样本（例如3周内）。如果持

18、续检出浓度在1IU/mL和30IU/mL之间，应考虑为不确定结果，应执行血清学随访。浓度3IU/mL的样本被认定为弓形体IgG抗体阳性并提示急性或潜伏感染。如果第二份样本（例如3周内）检出弓形体IgG抗体滴度（仍在1IU/mL和30IU/mL之间）明显高于第一份样本，再加上阳性弓形体特异性IgM抗体结果则可支持急性期弓形体感染。注意：请注意：一个不确定结果或低水平阳性结果可能提示早期急性弓形体感染（未检出弓形体IgM抗体也可见于这种情况）。由于使用的测定法和试剂不同，不同制造商测定法得出的给定样本中弓形体IgG抗体的结果可能不同。因此实验室向临床医师报告的结果应包括“以下结果采用Elecsys

19、弓形体IgG抗体测定法。不能与其它制造商提供的测定结果互换。”干扰因素阴性试验结果不能完全排出急性弓形体感染的可能性。急性感染早期可能检测不到弓形体IgG抗体。单个样本中IgG抗体的检出不足以鉴别急性感染和潜伏感染（与IgG抗体滴度无关）。为了监测弓形体特异性IgG抗体滴度，建议采用平行试验测试系列样本。如果治疗开始的足够早，抗体可能尚未生成。IgG和IgM浓度可能保持在低水平，并共存多年。Elecsys弓形体IgG抗体结果应结合患者病史，临床检查和其他诸如弓形体特异性IgM抗体、弓形体亲和力指数等实验室结果来综合评估检测结果。应谨慎判断HIV病人、接受免疫抑制治疗的病人或患有其它可导致免疫抑

20、制的疾病的病人的检测结果。没有检测来自新生儿、脐血、移植前病人的标本或除血清和血浆之外的其它体液，例如尿液、唾液或洋水。本测定法不受黄疸（胆红素684mol/L或40mg/dL）、溶血（血红蛋白1.24mmol/L或2g/dL）、脂血（脂肪乳剂2000mg/dL）和生物素5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。浓度高达6210IU/ml的类风湿因子对检测无影响。体外对18种常用药物外加螺旋霉素、磺胺嘧啶、叶酸和乙胺嘧啶进行试验，未发现会影响检测结果。少数病例中极高浓度的免疫组分抗体、链霉素抗体或钌抗体会影响检测结果。通过合适的试验设计可最大程度地减少这些效应。作为诊断指标，必须结合

21、患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。检测限及范围检测范围0.13650IU/mL（根据检测下限和厂商制定的定标曲线的最大值定义）。低于检测限的值将报告为650IU/mL（或20倍稀释的样本高达13000U/mL）。检测下限检测限检测限：0.13IU/mL最低检出限指区别于零浓度的分析物最低检测浓度。最低检出限是比阴性定标液的结果高出2倍标准差的值（厂商制定的定标液，标准品12SD，可重复性研究，n=21）。稀释高于检测范围的标本可用通用稀释液（Elecsys Diluent Universal）稀释。建议1:20稀释（MODULAR ANALYTICS E170，Elecsys

22、 2010 和cobas e分析仪可以自动稀释，也可以手工稀释）。稀释样本的弓形体IgG抗体必须高于 3IU/mL。如用手工稀释，结果应乘稀释倍数。分析仪稀释后，MODULAR ANALYTICS E170,Elecsys 2010和cobas e软件在计算样本浓度时会自动将稀释考虑在内。还可使用弓形体IgG抗体阴性的人血清执行手工稀释。请注意：弓形体IgG抗体具有异质性，可能会频繁观察到非线性稀释行为。稀释来自同一个体的系列样本时可观察到检测范围内相似的稀释行为。检测了配对系列样本（n12）。在一组含30份浓度在检测范围内的样本中，没有Elecsys弓形体IgG抗体值超出这一范围（未考虑稀释

23、因子时）。期望值弓形体IgG抗体的感染率取决于研究人群的所在地区和年龄。采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法检测了996份来自法国（研究中心1）和1001份来自德国（研究中心2）的常规临床样本。采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法分别检出231份（23.2，法国）和376份（37.6，德国）阳性或不确定结果的样本。下表中给出这些值的分布情况。各实验室应按照自身的病人总数检查期望值的可转移性，如有必要可根据自身情况设定参考范围。特殊的性能指标试剂在各分析仪上的性能试验数据如下。各实验室得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人血清样本和质控品检测精密度（可重复性n21，

24、中间精密度n10）；MODULAR ANALYTICS E170分析仪上的中间精密度按照CLSI（临床和实验室标准研究所）的改良协议（EP5-A）执行：每天6次，共10天(n=60)。下面是获得的结果。b）可重复性批内精密度c）HS人血清d）PCPreciControl分析灵敏度232份可能存在交叉反应性的样本采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法和对照弓形体IgG抗体测定法进行测试，这些样本包括：含HBV抗体、HCV抗体、HIV抗体*、CMV抗体、EBV抗体、HSV抗体、VZV抗体*、Parvo B19抗体、风疹病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、疟原虫抗体*、阿米巴虫抗体、衣原体抗体和淋球菌抗体含

25、自身抗体（AMA、ANA）接种过乙肝疫苗和流感疫苗Elecsys弓形体IgG抗体测定法和对照方法的总体一致率达97.8（221/226）。127份样本一致检出阴性结果，94份样本一致检出阳性结果。6份样本采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法或对照试验得出不确定结果。*疟原虫抗体：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法检出3份不一致阳性结果，采用直接凝集法测试这些样本仍得出阳性结果。*VZV抗体：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法得出1个不一致的阳性结果；HIV：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法得出1个不一致的阴性结果。方法学比较在4个不同的临床中心采用Elecsys弓形体I

26、gG抗体测定法检测了总数2225份新鲜和冰冻样本，这些样本还经过市面上有售的弓形体IgG抗体测定法分析。对所有得出不一致结果的样本进行复测。对于复测仍得出不一致结果的所有样本，在研究中心2使用第二种市面上有售的弓形体IgG抗体测定法并在研究中心3、4和5使用直接凝集法或弓形体IgG抗体特异性免疫荧光测定法进行检测。最后计算相对灵敏度和特异度时排除了23份采用任一测定法得出不确定结果的样本。处理后的相对灵敏度和特异度临床中心2：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法初次检出不一致阳性结果的50份样本中，有49份经第二种市面上有售的弓形体IgG抗体试验得出阳性结果。临床中心3：采用Elecsys

27、弓形体IgG抗体测定法初次检出不一致阳性结果的8份样本中，有5份经直接凝集法试验得出阳性结果。临床中心4：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法初次检出不一致阳性结果的1份样本经直接凝集法试验得出阳性结果。临床中心5：采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法初次检出不一致阳性结果的3份样本中，有1份样本经免疫荧光IgG试验得出阳性结果。血清阳转面板在两个研究中，采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法和两种不同的市面上有售的弓形体IgG抗体测定法检测妊娠筛查期间获取的血清阳转样本。在第一个研究中心，在含85个样本的24个血清阳转面板中采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法检出63份阳性或不

28、确定结果。有55份样本采用对照试验检出阳性或不确定结果。在第二个研究中心，在含92份样本的29个血清阳转面板中，采用Elecsys弓形体IgG抗体测定法检出61份阳性或不确定结果，而对照试验检出45份阳性或不确定结果。参考文献1. Montoya JG, Liesenfeld O. Toxoplasmosis. Lancet 2004;363:1965-1976.2. Luft BJ, Remington JS. Toxoplasmic encephalitis in AIDS. Clin Infect Dis 1992;15:211-222.3. Khalifa KES, Roth A, Roth B, Arasteh KN, Janitschke K. Value of PCR for Evaluationg Occurrence of Parasitemia in Immunocompromised Patients with Cerebral and Extr