2分钟学会UVP的凝胶电泳分析软件

2分钟学会UVP的凝胶电泳分析软件(labwork及gel-pro)如果你购买了UVP的凝胶电泳拍摄及分析系统，上面就会带一个labwork分析软件。打开这个软件你就可以发现其界面非常熟悉，原来这就是MediaCybernetics公司利用Imageproplus程序的内核专门应用于分析凝胶电泳图片的软件。上面还有许多Imageproplus的功能呢。分析电泳图片还是很简单的，两分钟就能学会，只要在那个1D-Gel工具条从上往下一个一个点开来设置一下就OK。打开一个图片后，先要把图片上的电泳条带摆得横平竖直，加样孔处于图片上方。这一步只要点第一个菜单rotate然后用鼠标转图片就是。第二步是指定泳道。点Lanes.利用弹出的菜单可以删掉或添加泳道，用鼠标可以拖动泳道位置，还可以在泳道上下边拖来延长或缩短泳道长度。泳道宽度设置时，先勾上Uniformlaneswidth,后在最上面的laneswidthh把数值加大或

减小一些。让选择泳道宽度框全部覆盖住条带。设置完了泳道，再设置条带。占bands菜单，在darkbandsbrightbackgroundbrightbanddardbackgroun之间选一个，（DNA凝胶是白带黑背景，蛋白质凝胶是黑带白背景）minbandheight设一个稍大的值，（别太小，否则自动找到一大堆条带还得一个个删。）点一下findband就自动找到一些明显的条带了，用add和deleteband按纽加上未找到的条带，删掉误识别的条带。这个操作也很简单，点addband按纽，出来一个新对话框，不理它，可以在电泳照片上认为该有条带的地方点一下，就强迫加上了一个条带。还可以在lanefrofi窿口的曲线上准确找到峰顶位置点一下加上条带。加完后点OK回到band窗口。注意每个条带也有一个计算范围，可在曲线上拖它的上下边界。这个边界的选择要仔细。一方面尽量让各条带的范围一致，另一方面则是选择条带光密度峰的山脚处作为边界。这两者很难同时满足。经常得牺牲一方面。

设置完泳道与条带，下一条是设置背景。前面还有个加样孔位置要设置，因为我们已经把加样孔放到上方了，就不必设置它了。背景的较正方法有许多选择，但只有一个实用。就是joiningvalleys.上一帖图中峰下面有一根斜线，那就是背景扣除的界限。下面的面积被扣除。只计算背景线上方的区域作为条带定量的依据。最麻烦的是设置marker参数。点marker菜单，弹出设置窗口，上面是指定marker泳道位置的按纽。系统默认第一泳道为marker。但我们经常把marker放到另的泳道上去。这块胶上有两个marker，分别在第一与第十三泳道上，设定方法是：点reset清除掉窗口，再点select/unsel...按纽。在第一与第十二泳道上分别点一下，窗口中会出现lane1和lane13字样，说明这两个泳道被指定为marker.

下一步要指定Marker中各条带的分子量。点new按纽，出来一个新的窗口，最上面要起个名字(test。)在下面的数字窗口中输入第一个分子量数字(2000)。点一下旁边的勾。再点add按纽。可见第一个分子量数据已经显示到窗口里了。重复2、3输入全部的分子量数值。点OK回到上一个窗口，可以看见marker的分子量已经输入。

iPlJ1ETUfLJiiuiIII-EuzkarranrdQLlQCUjFNiL瑚心 iPlJ1ETUfLJiiuiIII-EuzkarranrdQLlQCUjFNiL瑚心 •n»«JB ■:磺U fgJ'JUZ—%3li:;幼心ii|£日买AC^Bl4耽口。d仲y卷M住引迎!邀M照伊丈朝胜还没完呢。点一下autolo（按纽，这里要注意，如果是六个marker条带，则marker泳道里一定得有正好不多不少六个选定的条带。否则就乱套了。有时候电泳跑得歪，两个marker的对应条带并不在同一水平面上，这时要作校正。把上面那个automaticslantcorrect选项给勾上。

对于泳道条带跑得歪，又作了两个marker时，可以用slant进一步校正。点slant按纽调出窗口。点addslantline按纽，出来一个新对话框。在两个marker的相同分子量条带上各点一下，回来点nextM.W.按纽，再去找下一对等分子量marker条带，或者点OK结束。回到上一个窗口还是点OK。

好啦。可以看到结果了。点result结果窗口就出来了。在show菜单要选showboth，这样每个泳道有两列数据，分别显示分子量与测定值。测定值则要显示IOD（积分光密度）。这个最不会出错。选其他的都有可能出一些计算错误的。各条带量的比较，就是比较它们之间的IOD数值。图象分析方法属于半定量分析。误差很大的。虽然软件也带有强度校正的功能，但实际上用起来麻烦还不准确。一般不用它。还是各条带之间互相比较IOD更实用一些。IOD数值都比较大，所以会显示成3.5e6的格式，这是3.5乘10的6次方的意思。这张图片没有Marker，当然就只剩下IOD数值了。分析结果也可以送到Excel里去。在文件--DDEtoExcel