植物病原线虫的检验检测 (1)课件

植物中线虫的检验检测小组成员：张忠锦、杨登品、艾加灵、叶双琼、朱克玉植物寄生线虫概述植物病原线虫的生态植物病原线虫的形态与解剖植物中线虫的检验检测

一、植物寄生线虫概述线虫是一类低等的无脊椎动物．地球上约１０万种，但目前只记载约260属5700多种包括自由生活线虫（海洋、淡水和土壤中）危害植物的病原线虫。几乎所有的农作物都受到植物线虫的寄生。人类最早发现的是小麦粒线虫（1743年）松材线虫病及其媒介昆虫重要植物病害致病线虫粒线虫属；根结线虫属；异皮线虫属；滑忍线虫属；茎线虫属；剑线虫属；长针线虫属。危害方式：口针穿刺寄主，通过分泌有毒物质和吸收营养破坏寄主的细胞和组织，植物受到为害后，表现的症状与一般病害的症状相似植物线虫还能作为其他病原物的自然传播介体．据FAO保守估计，因为线虫为害，粮食和纤维作物损失约为12%；蔬菜、花生、烟草和某些果树，损失超过20%；近年来国内蔬菜根结线虫危害严重．

美国著名线虫学家JNSasser认为，全美每年因线虫病害造成的农产品损失为58亿美元，全世界超过1000亿美元；在我国，仅大豆孢囊线虫病，造成的年损失大1亿美元；各种蔬菜损失达到30亿美元；水稻因潜根线虫危害，造成7%~15％的产量损失，这类线虫广泛分布在我国水稻产区，但迄今在国内尚未引起注意；许多作物的根腐病或“烂根”，是生产中一个比较突出和复杂的问题，但人们很少去考虑线虫的因素，“作物的烂根，其中30％左右与线虫相关”。

二、植物病原线虫的生态水----线虫是一类水生动物，植物病原线虫仍然保持水生习性；除了休眠状态的幼虫、卵和胞囊，线虫都需要在适当的水中或土壤颗粒表面有水膜时才能正常活动和存活，或寄生在寄主植物的活细胞和组织内。

温度----不同线虫种类其发育最适温度不同、但一般在15—30℃之间均能发育。在40℃-50℃的热水中10分钟，即可杀死。在实验室，常用60℃-65℃，3-5分钟杀死线虫。线虫分布在从土表以下5cm到15cm土层，尤其是植物根际土壤中更多。线虫在土壤中的蠕动没有方向性。线虫在土壤中移动的范围很少超过30~100cm。线虫的传播途径：以被动传播为主，包括人为传播：种子苗木调运及包装物自然力传播：水流（灌溉水）及风、农具的携带等；昆虫（松墨天牛、棕榈象甲）D三、线虫虫体结构

体壁:角质层;下皮层;肌肉层；体腔；体腔液（血液）。内部结构----消化系统生殖系统神经系统排泄系统等体壁（角质层、下皮层、肌肉层）A．外表皮层B．内表皮层C．丝状层D．基质层E．边界层F．外纤维层G．中纤维层H．内纤维层I．基底膜

D排泄孔侧区侧带体腔----体腔液背面腹面肌肉侧区食道生殖腺消化系统口食道肠直肠肛门体部峡部食道腺生殖系统雌性生殖系统卵巢输卵管受精囊子宫阴道阴门后阴子宫囊神经系统----由数百个神经细胞组成:神经环是最显著的的结构;侧神经;亚腹神经;亚背神经;侧器神经.C四.进境木包装松材线虫的检疫方法

为了防止国外的松材线虫随木包装传入,近几年来,我们结合口岸木包装的检疫经验以及实验室分离检验鉴定松材线虫的实践,探索出了一套进境木包装松材线虫的检疫分离方法,该方法与目前文献中报道的一些松材线虫检验方法相比,具有检验样品量大,技术简单容易掌握,检验过程快速准确和检出率高等特点。现将该检疫方法介绍如下。2、松材样品的选取2.1多点取样,增加取样覆盖率

为了取样的代表性和发现松材线虫的机率,不能图省事,在一批货物中同一个点抽取足量的松材,而应多点取样,每点取2~4块长40cm的松材,增加取样的覆盖率。2.2选带有蓝变症状的松材

松材线虫危害过的木材往往附有引致松材发生蓝变的真菌,在现场检查时,需要挑取有浅显蓝变的松材做样品。对于蓝变的木材,如果蓝变过于严重且材质又较轻时,也不适宜作为样品,因为这些木材往往是砍伐过久,经过长时间的贮藏或运输的木材,松材线虫会因环境条件、温度、湿度、水分的变化,尤其是高温和失水而死亡,从这些样品中分离出来的线虫往往是在木板表面上生活的小杆线虫或其他滑刃类线虫。因此要选取材质内部有蓝变的木材做样品。2.4选水分含量高、有松脂香味的松材

松树被砍伐后,松材线虫依靠松材内的水分和养分继续存活一段时间,当松材内的水分和养分消耗完毕后,松材线虫也会自然死亡。松材的水分含量高,有松脂香味从一个侧面反映出这些松材被砍伐的时间相对较短,还有能保持线虫赖于存活的必要条件,因此选这样的松材做样品就可增加检出线虫的可能性。2.5选取边材和材质较厚的松材

松材线虫为害的部位主要在边材,很少有松材线虫在心材内(树木的中心部位材质)生活,在现场检疫中需要选取边材做样品,通常边材的年轮轮纹距离较疏,轮纹颜色淡褐色,木质密度相对疏松(不是很硬);而心材的年轮轮纹距离较密,颜色深褐色至黑褐色,木质很紧密(相对较硬),取边材做样品分离出线虫的可能性较大。材质较厚的松材可抵抗不良环境的影响,相应地延长线虫在松材内的存活时间,厚度少于1cm的松材,容易失水干枯,影响线虫的存活或容易受到外界高温的直接影响而死亡。因此,在现场检疫中应选取厚度115cm以上的木板或木方、垫木做样品。

过筛冲洗的筛内物,可通过漏斗法除去杂质,其方法是先在漏斗中铺上双层面巾纸,用止水夹夹住漏斗下方的胶管(也可用小试管直接套在胶管中),将分离液体倒进漏斗里,然后小心地从漏斗旁边把水加至漏斗1/2或2/3处(应避免水流冲破面巾纸),静置6h以上,让线虫通过纸巾游动到下方的胶管里,而杂质则隔离在纸巾上,需要检验线虫时,打开漏斗的止水夹,取出适量的液体放进培养皿中,移至解剖镜下检验,此时液体中的杂质已经隔掉,在解剖镜下就很容易找到线虫。采取同样方法,在没有线虫分离套筛的情况下,也可在塑料桶中浸泡了松材样品后,取出松材,将浸出液静置2h,然后慢慢倒掉上层液体,只留下桶底的液体,把此液体移至漏斗中按以上方法过滤,也可分离非常干净的线虫液体,便于在解剖镜下观察。4.线虫的保存4.1短期保存将分离出来的线虫液体用吸管吸到盘尼西林瓶中,封好盖子,放在冰箱冷藏的保鲜盒里保存,滑刃类线虫在此环境下可至少存活2个星期。4.2固定保存在线虫悬浮液内加沸水,使温度为56~58度,经数分钟后可将杀死,待悬浮液冷却后,加4%的福尔马林固定液固定线虫(在配置福尔马林固定液时,加几滴甘油混合,可使线虫不易变形),线虫在此固定液中可长时间保存,便于留用,随时取出观察。5.镜检

线虫的检验一般是先在解剖镜(立体镜)下检验,发现线虫后怀疑是松材线虫的