霍乱弧菌课件

鞍山市疾病预防控制中心霍乱弧菌检验2012年5月3日邓晓丽一、概述霍乱是由O1血清群和O139血清群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病。主要的临床表现为剧烈的呕吐、腹泻严重脱水和酸中毒以至休克死亡。是以发病急、传播快、波及范围广、能引起大流行为特征的国际检疫传染病之一，也是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一。根据菌体（O）抗原的不同，目前将霍乱弧菌分出200个以上的O血清群，但仅发现O1群和O139群霍乱弧菌能引发霍乱。二、流行病学

1、传染源：霍乱是人类传染病。病人和带菌者是本病的传染源。2、传播途径：霍乱是经口感染的肠道传染病。常经水、食物、生活接触和苍蝇等传播。3、人群易感性：普遍易感。三、临床表现1、潜伏期：绝大多数为1~2日，可短至数小时或长达5~6日。2、前驱期：大多数病例起病急，无明显前驱期，仅少数患者起病较缓，于发病前1~2日可有头昏、疲倦、腹胀和轻度腹泻等前驱症状。3、泻吐期：起病突然，多以剧烈腹泻开始，继以呕吐，少数先吐后泻，多无腹痛，无里急后重。每日大便数次至数十次或更多。大便初为稀便，后即为水样便，以黄水样或清水样多见，少数为米泔样或洗肉水样。此期可持续数小时至2~3日不等。4、脱水虚脱期：神态不安，表情恐慌，眼窝深陷，唇舌极干，皮肤皱缩，体表温度下降，循环衰竭，电解质紊乱，代谢酸中毒5、反应期及恢复期四、病原学

1、形态与染色：霍乱弧菌呈弧形或逗点状，长1~3µm，宽0.3~0.6µm.自病人新分离的霍乱弧菌形态比较典型，人工培养基上培养稍久即失去弧形，变成杆状，若直接用病人米泔水样粪便做涂片镜检，常可见弧菌互相衔接，平行排列如“鱼群”样。霍乱弧菌革兰氏染色阴性，无芽孢，无荚膜。菌体单端有一根鞭毛，可达菌体4~5倍，运动极为活泼。在暗视野显微镜下观察，有如夜空中的流星。2、培养特性：营养要求简单，在普通培养基上生长良好，属兼性厌氧菌，生长温度为16~42℃，培养温度以37℃适宜。钠离子可刺激生长，但在＞8%NaCI环境中不生长，可繁殖的PH范围为6.0~9.2，适宜PH为7.2~7.4。为抑制其他细菌生长，用于初分离的选择和增菌培养基的PH为8.4~8.6，也可使用PH9.2的培养基。霍乱弧菌在碱性蛋白胨水中培养6~9小时即在液体表面大量繁殖，形成菌膜，液体呈均匀混浊。霍乱弧菌在庆大霉素琼脂上生长约2mm左右，菌落略带灰色、半透明、扁平或稍凸起，光滑湿润，培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中心厚儿周围透明，培养基含亚碲酸钾时菌落呈灰色，中心形成黑色金属碲沉淀；在营养琼脂上菌落较小透明如露滴状；在TCBS培养基上菌落较大，发酵蔗糖呈黄色为1.0~1.5mm。3、生化特性：霍乱弧菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐，霍乱红反应阳性，氧化发酵型试验（O/F）为发酵型，氧化酶阳性，粘丝试验阳性。4、血清学性状：O1群与O139群霍乱弧菌的鉴定是以霍乱“O”血清即O1群和O139群诊断血清的凝集性为主要依据。O1群霍乱弧菌依菌体抗原成分不同，分成小川、稻叶和彦岛3个血清型。五、实验室检验（一）标本的采集和送检1、病人标本的采集应在早期和未服用抗菌药物之前，标本必须新鲜，不能混有消毒液。采集病人的标本以“米泔水样”大便为主，采便方法可用棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭先用保存液或生理盐水湿润，由肛门插入直肠3~5cm处旋出采取，必须在棉拭上看到有粪便。一般水样便取1~3ml，成形便取指甲大小。某些情况下，病人的呕吐物、沾染粪便的衣物及尸体肠内容物亦可作为检材。病人的标本最好床边接种，不能床边接种的应立即送检。可将标本置于碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液或插入C-B二氏半固体中保存。8~10ml的保存液可加入1~3ml液体便或指甲大小成形便。2、水样的采集：以灭菌的500ml广口瓶取样。一般在可疑污染的河流、池塘岸边的1市尺深度以内的表层水采样。取样以后应尽快送检。不能在2~3小时内送检的，应在采水点将10倍浓缩的蛋白胨水加至水中。3、食品标本：可疑食品采取50~100g放在广口瓶或厚的塑料袋内，立即送检，检验室距离较远时应将标本放在冰瓶中运送。4、水生动物标本：选取活的或新鲜的水生动物送检。也可根据实际情况用无菌棉拭采取体表标本，如在一箱甲鱼中可采取数只甲鱼的体表作为一个标本送检。5、物体表面标本：可用无菌棉拭蘸以碱性胨水涂擦采样。（二）检查方法1、病人粪便标本：所有的大便标本都应经过增菌，尤其时恢复期病人、带菌者或用过抗菌药物的病人。急性期病人水样便标本在增菌的同时直涂选择性培养基培养。常用的强选择性琼脂：庆大霉素琼脂、四号琼脂和TCBS琼脂。弱选择性琼脂：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。霍乱弧菌在庆大霉素琼脂上生长快，36℃8~10小时可出现小菌落，16小时菌落直径达2mm。菌落略带灰色、半透明、扁平或稍凸起，光滑湿润。培养时间延长或室温放置后，菌落略带黄色，中心厚儿周围透明。霍乱弧菌在四号琼脂上菌落大，带灰黑色，半透明，光滑湿润，呈水滴样。碱性蛋白胨水36℃增菌6~8小时后取菌膜下表层分离。标本如为保存液或半固体保存可取1.0ml或将棉拭转种至碱性蛋白胨水中，并将棉拭内容物在胨水管壁上挤出。标本含菌量少时，为提高检出率可进行二次增菌再进行分离。2、水样标本：取450ml水样，先加1mol/L氢氧化钠调PH8.4~9.2，然后加10倍浓缩胨水50ml。为抑制杂菌可再加入1%亚碲酸钾0.25~0.5ml和1000单位/ml青霉素1ml。36℃培养过夜，取上层培养物，用选择性培养基分离，同时取上层培养物2到3滴接种到10ml碱性蛋白胨水中作二次增菌。3、食品标本：收到标本应立即检验。先在灭菌的容器中将固体脏器剪碎后接种碱性胨水。增菌量一般是检体的5~10倍。为防止食品在培养过程中变酸影响细菌生长，可将首次增菌的碱性胨水PH9.2，二次增菌用PH8.6。液体食品可按水样进行增菌分离。4、水生动物：选取活的活新鲜的标本。贝类可取壳内软组织剪碎后增菌，鱼类剪取腮部和肠内容物投入PH9.2的碱性胨水增菌后再作二次增菌分离。5、物体表面标本