兰大《药物分析》离线作业答案

《药物分析》命题作业:题目：高效液相色谱法在药物分析中的应用查、含量测定中的应用与发展。以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法简称是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速一、分类高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类：（一）吸附色谱法（adsorptionchromatography）性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。（二）液-液分配色谱法（liquid-liquidchromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不（K)（简称键合相色谱法可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC谱法。按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。正相色谱法（normalphasechromatography)K反相色谱法流动相极性大于固定相极性的分配色谱法称为反相分配色谱法，简称为反相色谱法。反组分因K（三）离子交换色谱法(ionexchangechromatography)离子对交换色谱法是以离子交换剂为固定相的色谱方法不同而被分离。柱填料含有极性可离子化的基团，如羧酸、磺酸或季铵离子，在合适的PH样品中不同的组分因离子交换平衡常数的不同而分离定PH分在流动相中的溶解度。流动相的PH值影响离子交换剂的交换容量。对弱酸或弱碱性的被PHPH值必须使待分离组分处于离解状态，才能被分离。离子交换色谱法用于分离在测定条件下呈离解状态的组分（四）空间排斥色谱法（stericexclusionchromatography）（五）亲和色谱法（lighperformanceaffinitychromatography）亲和色谱法是利用或模拟生物分子之间的专一性作用亲和色谱的固定相是将配基连接于适宜的载体上而制成的X与配基L形成X-L复合配基的亲和力，使复合物离解，从而将被纯化的物质洗脱下来。HPAC可用于生物活性物质的分离、纯化和测定，还可以用来研究生物体内分子间的相互作用及其机理等。（六）手性色谱法（chiralchromatography）а-甲基多巴是-（）体；又如氯霉素（含有二个手性碳原子，只有-（）异构体有效．而L-（+）异构体完全无效。沙利度胺（反应停）的两个对映体对小鼠镇静作用的效价相近，手性固定相、手性作用（比如固定相Dalgliesh认为至少要π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用等。l常用的手性固定相有以下几种。Pirkle型手性固定相PicklePirkle主持研制的，主要有碱性（斥电子基）手性固定相和酸性（吸电子基）手性固定相。在分离的过程中，化合物与固定相之间发生πDNBPG-CSP5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸键合到氨丙基硅胶上蛋白质类手性因定相蛋白质是由手性亚基团氨基酸组成的大分子物质和人血a1-酸性糖蛋白ChiralAGP，Resolvosil，EnantioPac等。脱系统是磷酸盐缓冲溶液7，离子强度为～，有机改性剂不得超过。用蛋白质类手性固定相拆分酸性和碱性倾倒物对映体时N，N-二甲基辛胺，叔丁胺氢溴酸盐和辛酸，以获得理想的分离结果。多糖类手性固定相是一类环形寡聚糖，α、β、γ三类，8吡喃葡萄糖组成，将CD分别通过硅烷链连接在硅胶表面就构成环70.8nm。用环糊精手性固定相进行分离β-环糊精手性固定相已经成功地分离了二茂铁等金属有机络(4）冠醚（Grownether）类手性固定相18-冠-6的衍生物，健合在聚苯乙炜骨架或硅胶上，形成冠醚手性固定相。用冠醚手性固定相分在冠醚上引人双萘基，双萘基可以形成“手性墙氨基化合物，特别是氨基酸对映体在冠醚手性固定相上可以得到很好的分离。手性流动相拆分法手性流动相拆分法是将手性试剂添加到流动相中价格便宜。配体交换型手性添加剂配体交换型手性添加剂由手性配基和含二价金属离子的盐组成C18L-2-哌啶酸的浓度。环糊精添加剂越强，随流动相出柱越快，保留时间越短。手性离于对添加剂二、高效液相色谱仪统等组成。（一）输液泵（二）进样器6个口，故称为六通进样阀。转子通过扳手调节，可以分别处于“装样”和“进样”两个位置。图中a为进样阀处于“装样”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，样的样品带入色谱柱进行分析。六通进样阀具有使用方便，进样量准确等优点。样品环有10µl20µl50µl等不同容积，可以选配。样品环不仅可以用来贮液，也可用来测量样品溶液的体积。将样品环装满后，进样，进样量即为样品环的容积（三）色谱柱2～5mm。（octadecylsilylsilicagel，ODS）为非极性化学健合相，此外还有辛烷（四）检测器样品经色谱柱分离后进入检侧器进行检测），蒸发光散射检测器质谱联用则是用质谱作为高效液相色谱的检测器。紫外检测器普通紫外检测器紫外检测器是高效液相色谱中应用最广的一种检测器。用一定波长的单色光照射流通测分对光的吸收符合Iambert-beer定律，因此色谱峰的面积和组分的量成正比关系。紫外检测器紫外组分可测定紫外吸收光谱，但在组分到达检测器时需停流，再扫描。2080年代出现的一种光学多通道检测器成对组分的紫外扫描。使用512个光二极管，在190～800nm范围内扫描，则平均1.2nmPDAD谱-色谱图。吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量。应用三维图谱还可以对峰的较色谱峰不同位置紫外光谱图的一致性，可以进行色谱峰的纯度检查。荧光检测器荧光检测器是利用组分发出的荧光进行检测的方法蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器是在90收，不能用紫外检测的组分，如糖类、脂肪酸、甘油三酯及甾体等。ELSD的检测可分为三个步骤。(1)雾化在雾化器中，洗脱液通过1个针孔与氮气（也可以用空气）雾状液滴。(2）流动相蒸发液滴通过加热的漂移管时，流动相被蒸发，样品组分形成气溶胶，进人检测室。(3）检测在检测室内，用激光来照射气溶胶，产生散射，测定散射光强，记录散射光强度随时间的变化关系，就得到了色谱图。气溶胶受固定光强的激光照射后，待测组分的质量(m）和散射光强度(I)有以下的关系：I=KmblgI=blgm+lgK式中K和b为与蒸发室温度和流动相性质有关的常数组分的质量的对数成线性关系。ELSDHM的检测器是很重要的补充。但ELSD谱条件，若流动相含有难以挥发的缓冲剂时，就不能用ELSD进行检测。液相色谱一质谱联用液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）HPLCHPLC的高分离效能和质谱的高灵敏度、高专-S的关键是接口，目前应用较多的接口有以下几种。（1）粒子束（PB）接口HPLC（氦气被抽电子轰击离子源）或（化学离子源，因而可以得到经典的质谱图，并可以使用图谱库检索，对未知样品的分析非常有用，但不适用于对热不稳定的化合物的分析。(2）热喷雾接口（TSP)TSP适(1ml/min～2ml/min）以及极性较大的测定组分的分析。(3)大气压离子化（API）接口大气压离子化接口是指离子化在常压下进行的接口，API是目前LS-MS中应用最广的接口。API有电喷雾(ESP)、离子喷雾(ISP)和大气压化学电离(APCI)三种操作模式。（五）数据记录处理和计算机控制系统HPLCHPLC三、在药物分析中的应用高效液相色谱法分离效能高，应用范围广，灵敏度高，仪器已较成熟、普及，在新药的研究开发，药品检验，生物样品的分析中应用十分广泛。（一）色谱系统适用性试验要作色谱系统适用性试验，色谱系统适用性试验的内容有：1.色谱柱的理论板数量出测定组分或内标物质峰的保留时间R和半高峰宽，按下式计算色谱往的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2如果测得理论板数低于各品种项下的规定求。色谱柱的理论板数主要取决于半高峰宽2分离度（R)分离度用来表示相邻两峰分离的程度。分离度（R）的计算公式为：2(tR2―tR1)R=W1+W2除另外有规定外，分离度应大于1.5。当分离度大于1.5时，相邻两峰达到了完全分离。重复性取各品种项下的对照品溶液5(RSD)2.0%和120%的对照品32.0%。拖尾因子检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定，拖尾因子计算公式为W0.05hT=2d1除另有规定外，T应在0.95～1.05之间。（二）在药物分析中的应用在鉴别中的应用在HPLC及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。在杂质检查中的应用HPLC示例一：黄体酮中有关物质的检查黄体酮在合成过程中可产生20β-羟基-黄体酮、20a–羟基-黄体酮等有关物质，中国药典采用高效液相色谱法进行检查。色谱条件为：用水，检查方法lmg/ml的溶液，作为供试品溶液；精0.02mg/ml10ul1个，其面积3/41.5%。供试品溶液和对照溶液的色谱图如下越多地采用了高效液相色谱法示例二：复方对乙酰氨基酚片的含量测定量标准采用容量法分别测定三种药物的含量。USP（24）甲醇冰醋酸（69:28:3）,UV275nm2.0ml/min。内标溶液的制备：制备苯甲酸的甲醇溶液，每lml约含苯甲酸6mg。(95:5)0.25mg/ml0.25jmg/mlj为阿司匹林和对乙酰氨基酚标示量的比值，咖啡因的浓度为l。(j')。标准溶液的制备：精密量取标准贮备液20ml和内标溶液3m1，置50ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀。其中对乙酰氨基酚的浓度为 0.1mg/ml，阿司匹林的浓度为0.1jmg/ml，咖啡因的浓度为0.1j'mg/ml。20片复方对乙酰氨基酚片，精密称定，充分研细，精密称取适量（约相当于g对乙酰氨基酚，置l量瓶中，加混合溶剂1，振摇0分钟，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml3m1，置50ml量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度。l0µl含量（mg）=2500C（Ru/Rs）式中C（lu和s分别为供试品溶液和标准溶液为稀释倍数。手性分离示例三：蛋氨酸对映异构体的分离CROWNPAKCR(+)手性柱；流动相为5的4溶液℃；紫200m检测。蛋氨酸对映体的色谱图见图。1.D-蛋氨酸2.L-蛋氨酸．PHHCl04水溶液作流动相，数十种氨基酸的对映体均可得到完全分离。在药浓检侧中的应用示例四：对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度检测分析对乙酰氨基酚是临床上使用极其广泛的解热镇痛药。由于患者状态的多样性以及对酰规检测。色谱条件：采用-8柱，柱温5℃；流动相为水，流速为；二极管阵列检测器，检测波长。血浆样品制备取静脉血～，置含肝素抗凝剂的离心管中，离心分离（，上清液为待测血浆。取上述血浆1ml，加饱和硫酸锌溶液1ml，沉淀蛋白后，加入乙醚5ml漩混合，