安捷伦液相色谱使用问题与解决方案

安捷伦液相色谱使用问题与解决方案AgilentLC问题与答案一．什么原因导致液相色谱仪压力过高？可能的原因：1.排气阀里面的PTFE滤蕊堵塞。2.压力上限设置太低。3.压力传感器堵塞。4.建议的措施：1.打开排气阀。如果压力依然很高，则更换排气阀内的PTFE滤芯。2.查看软件的压力上限设置并确保设置值适于分析。3.检查系统内的堵塞部位。（如下所述）要检查是否堵塞，请采用隔离系统的方法来排除故障：将安装的色谱柱、预色谱柱和预色谱柱过滤器摘开。①.如果压力恢复到正常值，则在色谱柱的位置安装ZDV接头。A如果压力正常，则色谱柱、预色谱柱或过滤器是产生问题的原因。请进行更换。B如果压力仍然很高，则在色谱柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入检测器或从其通出的管路）。②.如果取出色谱柱后压力依然很高，则检查从排气阀到自动进样器的管路。如果压力正常，则使用进样步骤命令将自动进样器的进样阀切换到旁路状态。A如果压力正常，则说明自动进样器堵塞。请检查针、针座、针座毛细管和转子密封垫。B如果压力依然很高，则检查从进样六通阀到色谱柱入口之间的管线.。二．改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。对于内径为4.6mm的色谱柱，10um的颗粒流动相线速度为0.75ml/min或5um的颗粒流动相线速度为1.5ml/min时，塔板数最多三．如何避免峰拖尾和峰分叉？与色谱柱相关的原因及处理方法1色谱柱污染;处理方法:清洗或更换色谱柱2色谱柱填料有问题;处理方法:反冲色谱柱或更换柱头过滤片3色谱柱中间出现间断;处理方法:更换色谱柱或填充空隙4保护柱失效;处理方法:更换保护柱5样品分布差;处理方法:改进色谱柱进口的设计6与色谱柱无关的原因：柱外体积大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲液浓度）改变。四．改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离有什么影响？如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。如果柱长加倍，则理论塔板数加倍。如果柱长加倍，则分析时间加倍。随着柱长增加，柱压也线性地增加。以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例：一个装填10um填料的长度为200mm的色谱柱可生成6000块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。将颗粒大小由10um减小到5um，柱长仍为200mm，则可生成12000块理论塔板。然而，这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。通常情况下不需要生成12000块塔板，因此柱长可减半至100mm，结果生成6000块塔板，同时分析时间也缩短一半；柱压仅比最初装填10um填料的长度为200mm的色谱柱高两倍五．如何选择液相色谱保护柱？保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在1:15至1:25之间。在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。尽量使保护柱与分析柱近似。在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。六．色谱图上出现鬼峰。如何消除？可能的原因有：1.上次进样遗留组分产生2.有污染3.有气泡4.色谱柱问题5.保护柱失效建议用户:1.做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱,。有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。2.洗脱原色谱柱中的原有污染。3.为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。4.更换色谱柱。5.更换保护柱。6.检查流动相纯度。7.检查样品中的其他成分.七．如何避免液相基线飘移？基线向上飘移表明系统中有污染。请冲洗色谱柱，净化样品，然后使用新溶剂。向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管保温隔热。向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。八．如何排除流动相/流动池中的气泡？避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池