Ras协同mTORSREBP1―c上调miR―182―96―183在肝癌中表达

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表达

【大纲】目的：商议Ras癌基因引诱的miR-182-96-183高表达体系。方法：采用H-ras12V转基因小鼠肝癌及癌旁组织，miRNA高通量测序检测miR-182-96-183基因表达水平。Westernblot检测调控miR-182-96-183表达的相关信号通路

活化状态及其上游转录因子蛋白表达水平。结果：miRNA高

通量测序结果表示：与PT对照，T中m1R-182-96-183mRNA

表达显然高升（P<0.01）。Westernblot检测结果表示：与PT

对照，T中ERK、mTOR活化水平显然高升，SREBP-lc蛋白水平显然高升。结论：Ras癌基因可能经过活化mTOR通路激

活SREBP-1c上浮miR-182-96-183的表达水平。

【要点词】肝癌；miR-182-96-183：Ras：mTOR：SREBP-1c

Ras信号通路激活在肝癌中宽泛存在[1]。miRNAs可经过

控制其靶基因的翻译在癌症的发展过程中扮演重要角色[2]，

同时有研究表示miR-182-96-183家族在多种原发性肿瘤中发

挥要点作用[3]。我们先期进行的miRNA高通量测序发现

miR-182-96-183在肝癌组织中显然表达，但其在Ras引诱的

肝癌中高表达体系尚不清楚。本研究利用H-ras12V转基因肝

癌小鼠模型[4]初步商议了miR-182-96-183在肝癌中的表达调控体系。

资料与方法

SPF级H-ras12V转基因小鼠，雄性，9月龄，体重30～40g，大连医科大学SPF实验动物中心。生产同意证SCXK（辽）

2016-0003，使用同意证SYXK（辽）2016-0006。

抗体p-ERK、p-mTOR、SREBP-1c购自CellSignal公司。

BG-blotMINI垂直转印仪等。

分别采用转基因小鼠肝癌和癌旁组织，迅速液氮冷冻保

存。

组织样本送至晶能生物公司进行IlluminamiRNA测序。

详尽方法拜会文件。

45μg蛋白10%SDS分别并转膜，封闭，一抗孵育

过夜。二抗孵育1h，显影，实验重复三次。

采用SPSS17.0统计解析。计量资料以x土s表示，

Shapiro-Wilk法检验数据吻合正态分布，依照Levene方差齐

性检验，两组间差异比较采用t检验。检验水平α=0.05。

2结果

miR-182-96-183表

达水平

高通量miRNA表达测序解析如表1，H-ras12V转基因小鼠肝癌旁组织miR-96、miR-183表达值为0，在肝癌组织中表达量显然增高（P<0.01），miR-182在肝癌?M织中表达量

显然高于癌旁组织（P<0.01）。

2.2ERK、mTOR、SREBP-1c表达水平检测

如图1所示，与癌旁组织对照，肝癌组织中p-ERK、

p-mTOR、SREBP-1c蛋白表达显然高升。

谈论

miRNA是一类长度约为22nt的非编码单链小分子RNA，

参加转录后基因表达调控[6]。有研究表示，肿瘤的发生陪同

miRNAs特异性表达[2]。为了研究Ras癌基因引诱肝癌发生

过程中miRNAs的表达变化，采用高通量测序对H-ras12V转

基因小鼠肝组织miRNAs表达水平进行检测。结果发现，与

癌旁组织对照，肝癌组织中miR-182-96-183显然高升（表1）。

miR-182-96-183是由同一染色体转录经初体、前体剪切

修饰生成的3个成熟体miRNA[3]，可控制下游靶基因的翻译发挥要点作用。大量研究表示，miR-182-96-183的高表达在

肝硬化、肝癌中发挥要点作用[6]，有研究发现，

PI3K/AKT/mTOR可引诱转录因子SREBP可直接调控

miR-182-96-183的转录[7]。实验结果表示，在肝癌中mTOR

活化水平显然增高，转录因子SREBP-1c表达显然增高（图2）。由此推测：Ras引诱的肝癌发生中可能经过PI3K/AKT/mTOR引诱SREBP-1c促进miR-182-96-183的表达。

综上所述，Ras癌基因可共同mTOR/SREBP-1c上浮

miR-182-96-183表达。但其确实分子体系有待被进一步证明。

（通讯作者：赵娟）

参照文件

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