实验二-普通显微镜的使用及细菌形态观察课件

实验二普通光学显微镜的使用和细菌形态观察一实验目的1、学习并掌握油镜的原理和使用方法。2、学习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。3、了解细菌的三种基本形态二、基本原理微生物是个体微小、结构简单、肉眼无法看到的微小生命体。因此，我们要借助显微镜来进行观察。显微镜的种类很多，但基本构造可分为两大部分：一是机械装置，二是光学系统1、机械装置由镜座、镜臂、镜筒与物镜转移器、载物台、移动器粗细调节器组成。2光学系统由目镜、物镜、聚光镜、反光镜、光圈组成。

现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。1.镜座；2.载物台；3.镜臂；4.棱镜套；5.镜筒；6.接目镜；7.转换器；8.接物镜；9.聚光器；10.虹彩光圈；11.光圈固定器；12.聚光器升降螺旋；13.反光镜；14.细调节器；15.粗调节器；16.标本夹显微镜的放大倍数和分辨率1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数2.显微镜的分辨率是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：D=λ/2n·sin(α/2)式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。：可见光的波长（平均0.55m)n:物镜和被检标本间介质的折射率。：镜口角（即入射角）。三、实验器材1、菌种

金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和四联球菌染色玻片标本等。2、溶液或试剂

香柏油、二甲苯3、仪器或其他用具

显微镜、擦镜纸。显微镜保养和使用中的注意事项：1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。（3）根据使用者的个人情况，调节双筒显微镜的目镜，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。（4）聚光器数值孔径值的调节

调节聚光器虹彩光圈值与物镜的数值孔径值相符或略低。有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径，而没有具体的光圈数刻度。使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一目镜，从镜筒中一边看视野，一边缩光圈，调节光圈的边缘与物镜边缘黑圈相切或略小于其边缘。因为各物镜的数值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应该进行这种调节。

在聚光器的数值孔径确定后，若需要改变光照强度，可通过升降聚光器或改变光源的亮度来实现，原则上不应再通过光圈的调节。当然，有关虹彩光圈、聚光器高度和照明光源强度的使用原则也不是固定不变的，只要能获得良好的观察效果，有时也可根据不同的具体情况灵活运用，不一定拘泥不变。（1）低倍镜观察

将染色标本玻片置于载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下方。下降10×物镜，使其接近标本，用粗调节器慢慢升起镜筒，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节器调节图像清晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部位，找到合适的目的物，仔细观察并记录观察到的结果。

在任何时候使用粗调节器聚焦物象时，必须养成先从侧面注视小心调节物镜靠近标本，然后用目镜观察，慢慢调节物镜离开标本进行准焦的习惯，以免因一时的误操作而损坏镜头及玻片。

（2）高倍镜观察

在低倍镜下找到合适的观察目标并将其至视野中心后，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物像清晰，利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结果。

在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物象将保持基本聚焦的状态，这种现象称为物镜的同焦（parfocal）。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

3、显微镜用毕后的处理（1）上升镜筒，取下载玻片。（2）用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

切忌用手或其他纸擦拭镜头，以免使镜头沾上污渍或产生划痕，影响观察。（3）用擦镜纸清洁其他物镜及目镜，用稠布清洁显微镜的金属部件。（4）将各部分还原，反光镜垂直于镜座，将物镜转成“

八”字形，再向下旋。同时把聚光镜降下，以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。4细菌基本形态的观察：

利用油镜，结合细菌三型等染色片观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。金黄色葡萄球菌基本形态的观察大肠杆菌炭疽芽胞杆菌1、革兰氏染色法的步骤；2、记录染色