DB45-T 2028-2019甘蔗组织培养污染控制操作规程-（高清可复制）

ICS65.020B34

DB45广西壮族自治区地方标准DB45/T2028—2019甘蔗组织培养污染控制操作规程Technicalregulationsforasepticoperationprocedureofsugarcanetissueculture2019-12-052019-12-30广西壮族自治区市场监督管理局发布DD4/021目次前言 II1范围 12术语和定义 13甘蔗组织培养消毒灭菌 14接种转管消毒灭菌 25培养室日常清洁和消毒管理 46污染培养容器清洗处理 47建立档案 4IIDD4/021II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区糖业生产办公室提出并宣贯监督。本标准由广西糖业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所。本标准主要起草人：李松、刘红坚、卢曼曼、刘俊仙、刘丽敏、张荣华、余坤兴、何毅波、刘欣、张伟珍。IIIIDD4/021DD4/021甘蔗组织培养污染控制操作规程1范围本标准规定了甘蔗组织培养污染控制的术语和定义、甘蔗组织培养消毒灭菌、接种转管消毒灭菌、培养室日常清洁和消毒管理、污染培养容器清洗、建立档案。本标准适用于甘蔗组织培养污染控制。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1内源性污染endogenouspollution外植体内部所带细菌或真菌等微生物所造成的污染。2.2外源性污染exogenouspollution外源性污染exogenouspollution人为操作不当以及环境因素所引起的污染。2.3接种vaccinate外植体经消毒灭菌处理后接入到有新鲜培养基的培养容器中的过程。2.4转管tubetranefer组织培养材料从原培养容器转移到有新鲜培养基的培养容器中的过程。3甘蔗组织培养消毒灭菌培养基灭菌培养基采用高压蒸汽灭菌器进行高温高压湿热灭菌。灭菌程序及安全操作技术按高压蒸汽灭菌容器操作说明进行。0.11MPa0.14MPa12120min～30min。5d～7d后，污染率≤5.0％。1接种室清洁、消毒操作使用前1～230min以上，同步开启臭氧发生器。30min后，工作人员进入接种室进行操作。操作结束后0.1％～0.2％1～21h～2h。工作人员的清洁和消毒进入接种室前，先用洗手液和自来水洗净双手，后更换专用鞋子、穿工作服、戴帽子和口罩。75％乙醇溶液擦拭所戴手套或双手。操作结束后，在缓冲间脱下专用工作服、帽子和口罩，放回原位；离开缓冲间换下专用鞋子。工作人员用品的清洁和消毒工作服、帽子、专用鞋子、口罩等，1d～2d11超净工作台的消毒30min，后开风机30min75％30min后关闭风机，再关紫外灯。接种转管工具的消毒灭菌1已灭菌的接种转管工具不得与未灭菌培养瓶或物品混放。3.6.175％250℃以上的专用电热灭30s175％3.6.3方法进行消毒灭菌。4接种转管消毒灭菌外植体的选取和预处理23d～5d，并在早上露水干后采集外植体。15cm～20cm12cm～3cm2～3751～2接种的消毒灭菌叶鞘幼嫩组织1～275％的乙醇溶液擦拭表面1剥去外层老叶鞘，每剥一层叶鞘更换一次灭过菌的刀片。内部幼嫩组织诱导培养产生胚性细胞团。4.2.1.45.0％～7.0％。腋芽75％的乙醇溶液擦拭表面120min～30min。75％10ss2～3用10～.0％的1mn5in3～5腋芽分化培养产生丛生小苗。4.2.2.55.0％～10.0％。茎尖38℃～4010d～20d，取健壮蔗芽苗，用自来水冲洗干净，从蔗段75％乙醇溶液擦拭表面27510s～30s1.0％～2.0％的次氯酸10min～15min2～3剥去蔗芽外层叶鞘，取茎尖组织。每剥一层叶鞘更换一次灭过菌的刀片或接种针。茎尖分化培养产生丛生小苗。4.2.3.54.0％～6.0％。转管转管前对污染或疑似污染的材料一律去除。75％的乙醇溶液擦拭培养容器表面1培养基、准备进行转管的材料及包扎灭菌好的其他物品，应在超净工作台内开启。在操作区内，每次不宜放入过多的待用培养基和材料。13.675％的乙醇溶液消毒双手和工作台面。4.3.83.0％～5.0％。35培养室日常清洁和消毒管理5.1湿度控制应用空调、空气抽湿机等对培养室的空气湿度控制在50.0％～60.0％。5.2日常消毒当天工作结束后用溴氧发生器进行溴氧消毒1h～2h。5.3除尘每周定期用除尘器对培养室的地板吸尘2～3次，以减少环境灰尘累积。5.4污染苗清理每天对组培材料进行观察，发现污染的应立即移出培养室。5.5培养架清洁每批次培养材料转接移开培养架应立即清除培养架上的灰尘及渗75％的乙醇行擦拭1次。6污染培养容器清洗处理6.1污染材料处理6.1污染材料处理从培养室移出的污染材料在培养容器盖未打开前，先进行高温灭菌，再进行清洗。6.2清洗地点选择应选在组培实验楼外且处于下风口的地方。6.3培养容器清洗打开经过灭菌处理的培养容器，倒出污染材料并集中处理，培养容器及盖子用2％洗衣粉液浸泡0.5h～1.0h，将污染物洗除干净，再用自来水冲洗2次。7建立档案记录好外植体转接完成时间、数量、品种、接种人、