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文档简介

4%多聚甲醛的配制:0.1MPBS配制80gNaCl2gKCl14.4gNa2HPO4KH2PO4溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034x105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4°C冰箱中，在放置磁力搅拌棒的容器中，将4克多聚甲醛（EM级）溶解于100mlPBS,加入数滴NaOH,在通风厨中60C加热（打开瓶盖）使溶解,冷却至室温,用HCl调节溶液的pH值至,使用前新鲜配制.4%多聚甲醛固定液：用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定（动物器官经该液灌注后，然后取材，再用该液浸泡2-24小时）也常选该固定液固定。试剂：多聚甲醛40gmol/LPH500ml混合后加热至60C，搅拌并滴加1NNaOH至清亮为止，冷却后加PBS至总量1000ml。注固定时间24小时。我们实验室一直沿用的4％多聚甲醛固定液（用于固定鼠或者兔的脑组织标本）的配方是：多聚甲醛（粉末状）：40g磷酸二氢钠：2.965g磷酸氢二钠：29g蒸馏水：1000ml然后一块放到三角烧瓶中，在磁力搅拌器上加热（60C）振荡24小时。原来一直用的挺好，配出来也很清亮。但是这几次也是用同样的方法配出来后，在加热时是清亮的，但是瓶底有不少不溶的杂质。等不再加热，室温后，溶液就混浊了。再加热到60度又清亮了。再冷却到室温后又混浊了。不知道为啥请高手指点一二，不胜感激4%多聚甲醛固定液里头的陪法有点小技巧:多聚甲醛是教易溶于碱性条件下的，先加多聚甲醛和氢二钠，直接在通风情况下加热溶解，一般15到20分钟就可以，大概放置20分钟后再加二氢钠，溶解后，调PH直到左右即可，最后别忘记放DEPC.其实武汉博士德就有4%多聚甲醛固定液卖的，我们以前都是自己配，一是麻烦，二是要用到DEPC,有毒而且易挥发，还带香味,闻到后喉龙就不舒服•后来就直接找他们买了，方便便宜，省事，最主要的,他们专业点,东西好用!你要考虑以下几过因素:1•蒸馏水洁净.2•三角烧瓶洁净.3•试剂没问题.多聚甲醛就是很难溶解，你把它放在37度温箱里若干天再去看它会有惊喜。以前用过磁力搅拌棒转一上午都不行，放在一边过几天再看就溶解了。如果要求中性多聚甲醛就用pbs或者用磷酸氢二钠+二氢钠，如果不要求中性用水就可以啦我要做免疫组化实验。用ABC法，DAB显色。组织的固定液，查外文资料用的都是4%多聚甲醛/0.1MPBS。但是实验室的老师说，是用0.01M的PBS配制，不知道是不是一样的？还有就是冲洗液，我查的英文资料都是用0.1MPBS。但是实验室老师说是0.01MPBS。不知道大家对这个又没有经验。固定用0.1MPBS，冲洗用0.01MPBSpbs0.1M的PBSNacl8.5克30.8克2.8克双蒸水定容至1000ml0.1MPBS缓冲液的配制：Nacl:4gKcl:0.1g:1.445gKH2PO4l:0.1g用500ml去离子水溶解，%NaCO3

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