基因分析课件

基因分析技术原理及其应用生物化学与分子生物学教研室DNAmRNAProtein基因分析分析对象分析内容大小/数量位置相互作用目的常用技术的原理依靠的仪器设备大致的操作过程技术的应用范围(一)琼脂糖凝胶电泳(agarosegelelectrophoresis)原理:带电粒子在电场中的泳动应用:分离0.2-50kb的DNA片段加样电泳结果脉冲场凝胶电泳（三）DNA测序(DNASequencing)原理:双脱氧终止法应用:分析DNA序列、SNP（四）DNA/RNA定量分析(DNA/RNAquantificationbyspectrophotometry)原理:在260nm处有吸收峰应用：[dsDNA]=50x(OD260-OD310)xdilutionfactorSpectrophotometer（五）SouthernBlot原理:标记物标记探针,杂交反应应用:目的DNA在基因组中的存在有关RNA的分析技术（七）RT-PCR原理：PCR反应应用:克隆，RNA定量（八）实时定量RT-PCR(RealTimePCR)

原理：荧光标记分子、PCR反应应用：RNA定量（九）NorthernBlot原理：核酸杂交应用:检测或定量分析特异RNA的表达及大小（十）DNAChip/microarray原理：核酸杂交应用：分析基因表达差异、数量芯片制备（十一）原位杂交/整体原位杂交（insituhybridization/

wholemountinsituhybridization）原理：核酸杂交应用：原位细胞mRNA表达的检测（十二）RNase保护分析（RNaseprotectionassay,RPA）原理：核酸杂交应用：分析转录本含量/剪切情况，位点有关Protein的分析技术（十三）蛋白质浓度测定:BCA原理：BCA与Cu+结合形成稳定的紫蓝色复合物,562nm处吸收应用：蛋白浓度测定（十四）氨基酸序列分析(proteinsequencing)原理：Edman降解法+HPLC应用：氨基酸序列分析（十五）聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)原理：分子量大小不同，用电泳法分离蛋白质应用:纯度分析、分子量测定、浓度测定、免疫印迹第一步、免疫沉淀蛋白的鉴定蛋白染色结果（十六）双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（Two-dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis,2D）原理：等电聚焦+SDS应用：分离鉴定蛋白，筛选表达差异蛋白双向电泳装置（十七）酶联免疫吸附分析(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)原理：抗原-抗体反应应用：检测目标抗原/抗体（十八）免疫沉淀法（immunoprecipitation）原理：抗原-抗体反应应用：鉴定特异蛋白质免疫共沉淀法(co-immunoprecipitation)原理：抗原-抗体反应应用：鉴定蛋白质相互作用染色质免疫沉淀技术（chromatinimmunoprecipitation，ChIP）

原理：抗原-抗体反应应用：研究DNA-蛋白质相互作用的理想方法（二十）western-blot原理：SDS+抗原-抗体结合应用：鉴定特异蛋白质（二十一）蛋白质芯片(proteinchip)原理：蛋白质分子间相互作用应用：检测蛋白表达量、差异、相互作用（二十二）免疫组织化学技术（Immunohistochemistry）原理：抗原-抗体结合应用：检测目标蛋白位置免疫组织化学染色（二十三）双杂交系统（two-hybridsystem）原理：转录因子结构特征应用：筛选相互作用分子双杂交结果（二十四）基因打靶技术（genetargeting）原理：同源重组应用：基因功能研究（二十五）RNA干扰（RNAinterference,RNAi）原理：双链RNA诱导同源mRNA降解过程

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