植物显微技术-整体装片法课件

整体装片法

王名雪06级生物科学（1）班

2022/11/192植物制片技术植物制片技术是植物显微技术课的一个重要组成部分，在有关植物形态建成、植物杂交育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的研究和教学工作中，都需要应用显微制片技术，由于各种作物器官的性质差异以及研究目的的不同，就需要不同的制片方法

2022/11/193

切片法

涂片法

整体封片法

压片法

显

微

制

片

法2022/11/194整体装片法的适用范围及优点用于单细胞、微小生物体或分散的器官。例如丝状或叶状的藻类、菌类、蕨类的原叶体、孢子囊、纤小的苔藓植物，被子植物的表皮、花粉粒、幼胚等幼小的器官可以显示植物或植物器官的整体，能及时观察研究植物生活组织的结构方法及用具简单，不需切片机等机械设备，短时间即可完成2022/11/195

整体装片法的步骤：1、微小的生物如衣藻、水绵、青霉、变形虫和水螅等2、可以直接作为装片的材料植物的叶表皮、鳞茎表皮等；3、动物中如昆虫的翅、腿、口器等；4、人的口腔上皮细胞等一、取材：2022/11/197注意：

要注意固定目的物本身的结构性质，以便选用适合的固定液，如一般根、茎、叶的组织切片用FAA，根尖、花药压片材料用卡诺式固定液，花药胚囊用纳瓦申（Navashin‘s）液，茎尖（根尖）用铬酸-醋酸液。另外，固定时间的长短，要根据材料的特点而增减常用的固定液有以下几种：1、FAA固定液（福尔马林－冰醋酸－酒精）

2、FPA固定液

3、CanoysFluid（卡诺氏液）2022/11/198

又称万能固定液或称标准保全液适用范围：一般根、茎、叶、花药、子房的组织切片都可使用此固定液。固定时间：一般需固定24小时，并可在此液中作较长期的保存，但温度宜低（10℃左右）。配法：福尔马林（38%甲醛）5mL冰醋酸

5mL70%酒精

90mLFAA固定液（福尔马林－冰醋酸－酒精）2022/11/199（1）幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，以防止材料收缩。（2）制片时，材料不必洗涤，直接入70%酒精进行处理。（3）可加入5ml甘油（丙三醇），以防固定液蒸发和材料变硬。（4）此液兼有保存剂作用，故常采用。注意：2022/11/1910固定时用丙酸代替冰醋酸，三种成分的用量同FAA，制片效果有时较FAA好。FPA固定液2022/11/1911

适用范围：穿透力迅速，常用于细胞学如根尖、花药的压片及子房石蜡切片等。固定时间：根尖、花药可固定15分钟至30分钟，其他材料不超过24小时。材料固定后：用95%、85%酒精浸洗，每级约20分钟，然后转入70%酒精中保存备用。此外，还有铬酸－醋酸混合液、CRAF（纳瓦申）固定液、弗雷明民液（铬酸－醋酸－锇酸）、PFA（苦味酸－福尔马林－醋酸）固定液等。

CanoysFluid(卡诺氏液)2022/11/1912

在材料开始处理脱水前，需将组织块中含固定液冲洗掉，以便后续处理顺利进行。通常冲洗法如下：1.流水冲洗法

2.静水洗涤法

三、冲洗：2022/11/1913药瓶（塑料）的底部，焊上尼龙纱。冲洗前将材料倒入制成的滤器内，固定液漏下丢弃，加另一塑料盖，置广口瓶或培养缸内，以流水冲洗（自来水龙头上套一个连接头，也是用塑料眼药瓶剪去底部，再反装水龙头上，将医药用塑料小瓶，用烧红（酒精灯）了的解剖针，刺成无数小孔（孔的大小由材料的大小决定），或剪去眼眼药瓶细嘴的一端，连接一个橡皮管，后将橡皮管通入装材料的瓶中，让流水徐徐从瓶底向上冲洗材料）。

流水洗涤法：2022/11/1914如以酒精洗涤，或不能使用流水冲的材料（根尖、花药等）则用连续换洗来达到清洗目的，每次换液只需提起滤器，倾去旧液，换进新液。这种洗涤法的优点是：①不会损坏组织材料②省时间省药品，提高工效和经济效益。凡经水至各级酒精脱水至70%酒精级时，材料可保存备用。静水洗涤法：2022/11/1915四、染色：

爱氏苏木精是整体制片法最常用的染液，是有效的核染料。其配方和配制方法如下：配方：苏木精：2g纯酒精：100ml冰醋酸：10ml甘油：100ml蒸馏水：100ml钾明矾：2-3g

2022/11/1916先将苏木精溶于25ml酒精，再加甘油和醋酸，然后将其余75ml酒精加入，将钾明矾溶于水中，加热使其溶化，然后慢慢加入苏木精染液中，随加随搅拌，混合后，应放在有光和通风处3星期使其成熟，成熟后为深红色，即可使用。材料在染完色后呈蓝紫色配制方法：2022/11/1917

常用的脱水剂有乙醇（酒精）、二氧六环、正丁醇、叔丁醇、丙酮等药剂

目的：1、除去组织内的水分，并使其组织细胞变硬2、脱水后的组织再经透明剂（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能经加拿大树胶封藏，否则组织材料不透明，无法在显微镜下观察。

方法：脱水之前先用50%A洗去多余的染液（2-5分钟），然后按顺序依次用70%A、85%A、95%A、100%A、100%A对材料进行脱水处理。五、脱水：2022/11/1918

透明是制片过程中的基础工作，材料经各级酒精脱水以后，要经过常用的有机榕剂进行透明。只有当组织材料全为透明剂所占，并在显微镜下观察呈透明状态时，这种材料才符合制片要求，故透明是制片的重要环节，万不可忽视，凡未经透明的材料（不论在何步骤透明）都必须重新退回处理，直到材料透明再继续向下处理。常用透明剂种类：二甲苯、氯仿、苯、甲苯、丁香油、冬青油、香柏油等。六、透明：2022/11/1919氯仿透明的优点是：①组织材料在氯仿中浸存，收缩不显著②易挥发，如浸蜡时，使用的氯仿经包埋前的处理便于除去其缺点有：①渗入组织内力量较二甲苯弱、时间长②氯仿能使染料褪色，故染色后的切片处理不宜

用氯仿透明而用二甲苯。1/2无水酒精＋1/2二甲苯和纯二甲苯中透注意：一般选用二甲苯作为透明剂。材料在二甲苯中时间不宜过长，否则材料收缩变硬，变脆。方法：2022/11/1920七、封固：

注意：封片时树胶的量要适宜，不宜过多，溢出盖玻片四周，导致整个片子不干净，不宜太少，不能充