实验一蛋白质的等电点测定和沉淀反应2022优秀文档

实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反响一、目的1.了解蛋白质的两性解离性质2.学习测定蛋白质等电点的一种方法3.加深对蛋白质胶体溶液稳定要素的认识4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实意图义二、原理蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在以下平衡：等电点:当溶液的pH到达一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极挪动，也不向阳极挪动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。四、操作步骤〔一〕酪蛋白等电点的测定

〔1〕取同样规格的试管4支，参与各试剂，然后混匀。此时4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。〔2〕各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。察看其混浊度。静置10分钟后，再察看其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。

〔二〕蛋白质的沉淀及变性

1、蛋白质的盐析蛋白质的盐析:无机盐〔硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等〕的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白那么在饱和硫酸铵溶液中才干析出。盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。于试管中参与蛋白质溶液5mL，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟那么析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，察看能否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。

2、重金属离子沉淀蛋白质重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。

取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中参与少量的水，沉淀能否溶解？为什么？

3、某些有机酸沉淀蛋白质取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再参与1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，察看沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中参与少量水，察看沉淀能否溶解。取1支试管，参与2mL蛋白质溶液，再参与2mL95%乙醇。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。〔二〕蛋白质的沉淀及变性

1、蛋白质的盐析取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再参与1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，察看沉淀的生成。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中参与少量的水，沉淀能否溶解？为什么？1、什么是蛋白质的等电点？重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。1mol／L醋酸溶液中和。以表格方式总结实验结果，包括察看到的景象，分析评价实验结果。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。2、重金属离子沉淀蛋白质〔一〕酪蛋白等电点的测定

〔1〕取同样规格的试管4支，参与各试剂，然后混匀。〔2〕各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。了解蛋白质的两性解离性质1mol/L盐酸溶液数滴，察看沉淀的再溶解4、有机溶剂沉淀蛋白质取1支试管，参与2mL蛋白质溶液，再参与2mL95%乙醇。察看沉淀的生成〔假设沉淀不明显，加点NaCl，混匀。

5、乙醇引起的变性与沉淀取3支试管，编号。依下表顺序参与试剂1.向各管内加水4ml，在2，3管内各加一滴甲基红2.第二管中用0.1mol／L醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸钠溶液中和，察看各管的颜色变化和沉淀生成3.每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，察看沉淀的再溶解3、某些有机酸沉淀蛋白质〔2〕各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，加一管，摇匀一管。重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，参与蛋白质溶液2mL，再参与1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，察看沉淀的生成。加深对蛋白质胶体溶液稳定要素的认识2、重金属离子沉淀蛋白质取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。5、乙醇引起的变性与沉淀以表格方式总结实验结果，包括察看到的景象，分析评价实验结果。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，察看沉淀的再溶解。05mol/L碳酸钠溶液中和，察看各管的颜色变化和沉淀生成了解蛋白质的两性解离性质1、什么是蛋白质的等电点？倒出少量混浊沉淀，加少量水，察看能否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。五、本卷须知

等电点测定的实验要求各种试剂的浓度