甲氨蝶呤课件

甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)汇报人：李宏斌

汇报内容1.甲氨蝶呤理化性质2.甲氨蝶呤的细胞毒作用3.实验设计

甲氨蝶呤理化性质

分子式：C20H22N8O5

分子量：454.44

性质：熔点195°C。水溶性Insoluble.<0.1g/100mLat19°C性状：橙黄色结晶粉末。溶解情况：微溶于水。几乎不溶于乙醚、乙醇、氯仿。

用途：抗叶酸制剂，为基本抗肿瘤药物。系联合化疗方案中常用的周期特异性药物。用于急性白血病，绒毛膜上皮癌等。

制备或来源：由6-溴甲基喋呤与对甲氨基苯甲酰麸氨酸缩合而得。

[1].[5].甲氨蝶呤主要作用[1]1MTX的细胞毒（抑制肿瘤）作用2MTX通过腺苷诱导免疫抑制作用3MTX抑制免疫炎症细胞增生及诱导凋亡4MTX影响细胞因子及其拮抗剂5抑制中性粒细胞的趋化作用6MTX对环氧化酶及脂氧化酶的作用7MTX对蛋白水解酶及其抑制物的作用MTX的细胞毒作用

1.叶酸[5].叶酸（folicacid;pteroyl-glutamicacid）也称蝶酰谷氨酸，是维生素B复合体之一，相当于蝶酰谷氨酸（pteroylglutamicacid，PGA），是米切尔（H．K．Mitchell，1941）从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。

2.叶酸的作用[5].叶酸的活化形式四氢叶酸是体内一碳单位转移酶的辅酶，分子中N5,N10是一碳单位的结合位点，一碳单位在体内参加嘌呤，胸腺嘧啶核苷酸等多种物质的合成。叶酸缺少时，核酸的合成受到抑制。二氢叶酸合成酶

蝶酸-L-谷氨酸羧基肽酶二氢叶酸还原酶小肠粘膜上皮细胞叶酸（蝶酰多谷氨酸）蝶酰单谷氨酸四氢叶酸二氢叶酸

3.活化过程[5].

MTX是二氢叶酸还原酶的抑制剂(为叶酸的拮抗剂，和二氢叶酸还原酶的亲和力比二氢叶酸强1000倍）。阻止二氢叶酸还原为活化的四氢叶酸，使胸腺嘧啶核苷酸和嘌呤核苷酸的合成原料耗竭，抑制DNA和RNA的合成，从而抑制细胞的增生和复制，起到细胞毒作用。

[1].[4].实验设计一、问题的提出1.甲氨蝶呤对于体外培养的细胞是否有明显的细胞毒抑制作用.2.作用细胞的有效浓度.二、实验过程1.甲氨蝶呤溶解查阅文献，参考相关实验确定溶解药物的方案。由于文献所用甲氨蝶呤多为甲氨蝶呤的注射液,且实验多为动物实验。可以直接用注射水溶解（或生理盐水），对于原药的溶解，国家药典说明可以溶于盐酸，但低PH不于细胞培养，查阅相关公司产品，并经过试验，确定原药可以溶解于DMSO。2.浓度设计母液配制：称取4.5mgMTX溶于1ml100%DMSO,稀释至10ml.即MTX浓度为1mmol/L,DMSO浓度为10%。稀释：将母液分别稀释至药物浓度为10μmol/L1μmol/L0.1μmol/L，对应DMSO浓度为0.1%0，0.01%,0.001%.为了排除DMSO本身对细胞的作用，另设置一对照为空白对照。空白对照

重复1重复2重复3重复4溶解相应药物所需DMSO浓度溶解相应药物所需DMSO浓度溶解相应药物所需DMSO浓度空白对照

空白对照

3.细胞观察铺板上药细胞分别于24h36h48h72h光镜观察细胞形态数量等。

参考文献[1].周惠琼，昊东海.甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎作用机制的研究进展.中国药物与临床，2004，7（4）[2]于晓明，张维冰，张丽华，张玉奎.用氨甲蝶呤偶联琼脂糖亲和吸附法从人肝脏cDNA噬菌体展示文库中筛选氨甲蝶呤相互作用蛋白。中国生物工程杂志，2007,27(10):70～74[3]AkimitsuMaeda,ShuichiTsuruoka,KentarouUshijima,YoshikatsuKanai,HitoshiEndou,KazuyukiSaito,EtsukoMiyamoto,AkioFujimura.Druginteractionbetweencelecoxibandmethotrexateinorganicaniontransporter3–transfectedrenalcellsandinratsinvivo.EuropeanJournalofPharmacology640(2010)168–171[4]JosephR.Bertino,MD,Professor,InterimDirector.Cancerresearch:fromfolateantagonismtomoleculartar