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第三章胞生物学的研究方学习目的与要第一节微镜技一、学显微镜三、米显微一、学显微镜技普通光学显微荧光显微相差显微暗视野显微共聚焦激光扫描显微（一）普通光学显微镜-分辨率极限是分辨率与放大组织切片的（二)荧光显微镜-呈现强反差的彩荧光和荧光的染色，因此也称为荧光荧光显微镜的原理和应特点物镜投射于样品上；应用 （三）相差显微镜-常用于活细胞观培养中的肝癌细（五）-提供晰度彩色三维图工作原激光共聚焦显微镜图成骨肉瘤细胞中npm子显微镜（Electron透射电子显微镜（transmissionelectron扫描电子显微镜（ScanningelectronmicroscopeSEM（一）透射电子显微镜（400-（约（0.01-1.33x10-1.33x10-透射电子显微镜标本过 金属投影与复应用：蛋白、核酸大分子、颗粒及细胞壁观样品

膜结构——金属投影法应用：观察细胞膜性结构的构叶绿体内膜冰冻断裂复型，显示内膜上大量膜蛋样品：冷冻组织（液态氦-269度）——冰刀切割——真空升华膜及细胞结构——金属复型应用：观察细胞构纳米尺度：1nm——扫描隧道显微原子力显微扫描隧道显微镜（Scanningtunneling原子力显微镜（atomicforce原子力显微技术的优缺用来物宏观分子，甚至活的生物组织第二节胞的分离和培不同类型细胞的分细胞的分离方法（一）差速离心或密度梯度离根据细胞的大小和细胞密度不同进行分（二）流式细胞技（三）免疫磁珠二、细胞培细胞培养技术（cellculture）就是在体（一）细胞培养条（二）细胞培养基本设（三）原代培养与传代培（四）细胞（五）细胞融胚胎干细胞新和多向分化的特性。制因子，抑制ES细胞分化一、细胞组分的分级离溶酶体和微体，以及各种大分子基本。高速离心机：转速为（一）差速离心（differential体与过氧化物酶体、内质网与高基体、最后为白体。（二）密度梯度离心（densitygradientPH（三）密度梯度离心--二、层析法分离蛋白（一）层析法原（二）柱层析的分三、蛋白质电（一）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-还原剂：巯基乙醇、二硫苏糖SDS多肽链带上负电分离原理按照分子量的不同分离多肽（二）等电聚焦电泳(isoelectric（三）第四节细胞化学和细胞内分子示踪技一、酶细胞化学技二、免疫细胞化学技PHB（红色,CY5）和P53（绿色,FITC）蛋白在MG-63细胞中的分（二）胶体金标记抗体显示PHB（三）四、活细胞内分子示（二）绿色荧光蛋MG-

融合蛋白GFP-NPM在EC9706细胞中（A）经姜黄素诱导凋亡后发生了显著的定位变（B），以及在MG-63细胞中的定位（C）和HMBA诱导分化后细胞中在定位变化（D）（三）荧光能量转第五节细胞功能组学研究技一、的基本研究技术四、生物技术五、蛋白质组学研究技一、的基本研究技PHB蛋白质在原核细胞中的表---GST- 的RT- 表达的PHB经质谱鉴定后确认为GST-PHB的融合蛋白

GST-PHB大量表(以

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