药敏实验(1)课件

微生物学实验二病原生物学教研室实验二录像：细菌的耐药性质粒试验观察上次实验结果、进行分析操作：紫外线杀菌实验（普通平板1块/3人）抗生素敏感试验（普通平板1块/3人）化脓性球菌分离鉴定（一）——接种血平板材料：抗生素纸片（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素1套/6人）大肠杆菌斜面培养物（1支/6人）脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌各1支/6人）空气中细菌的检查菌落计数的方法据推算，每100cm²培养基在空气中暴露5分钟，其表面接受自然沉降的细菌数约相当于10升空气中所含的细菌量。每块平板的菌落数=4块平板的菌落总数/4100cm²面积培养基上的菌落数=（每块平板的菌落数/πr²）x100每m³空气中活菌数=（100cm²培养基上菌落平均数/30）x1000正常人体皮肤及随身物品的细菌检查结果：通常除用碘液消毒的手指外，其余手指或杂物接触的培养基表面都有数量不等的菌落长出。观察菌落直径大小，形状，透明度，硬度，表面，边缘，颜色（色素），菌落与培养基的关系等。细菌的分离接种1）观察细菌在固体琼脂平板培养基上的生长状态：观察平板上可有不同的菌落长出。菌落直径大小，形状（圆形或不规则），透明度（半透明、不透明或透明），硬度（粘稠或易碎），表面（光泽、粗糙、平滑、凸起、凹下、干燥、湿润等），边缘（整齐、不整齐），颜色（色素），菌落与培养基的关系（粘连、溶血与否）。2）观察细菌在半固体琼脂培养基上的生长状态：注意在穿刺线上细菌生长的状态，清晰（无动力）或向四周扩散（有动力）。3）观察细菌在肉汤培养基上的生长状态：有无菌膜、菌膜厚度，混浊度，有无沉淀、沉淀的性质是絮状、粘液状或颗粒状。物理消毒灭菌法：热力灭菌法湿热灭菌法：巴氏消毒法、煮沸法、流动蒸气消毒法、间歇蒸气灭菌法、高压蒸气灭菌法干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤电磁波辐射杀菌法紫外线电离辐射滤过除菌法超声波杀菌干燥紫外线杀菌原理:

波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265～266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体,因而改变DNA的分子构型，干扰DNA的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。注意:1穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水蒸气均能阻挡。

2适用于病房、无菌室、手术室、实验室空气、地面等的消毒。

3有效距离2米左右（紫外灯的安装）。

4紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。操作：取普通平板，1块/3人取大肠杆菌斜面培养物在平板上密集划线用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中将平板放到紫外线下照射30分钟照射后放37℃孵箱培养观察结果注意操作中始终保持无菌操作

细菌遗传变异的物质基础是染色体内的DNA和染色体外的质粒DNA及转位因子等。染色体内的DNA凭借其构成的特定基因来传递遗传物质；而染色体外的遗传物质——质粒DNA和转位因子等，对细菌的遗传与变异也起着重要的作用。质粒是环状闭合的双链DNA，经人工抽提后可变成线状或开环状。质粒基因可编码很多重要的生物学性状，其中，耐药性R质粒可以通过细菌间的接合传递某些信息，使细菌对抗菌药物或某些重金属盐类产生耐药性。质粒可以自我复制，也可自行丢失或消除。细菌的变异现象有：1、形态结构的变异：如细菌的L型变异、H-O变异（失去鞭毛的变异）、肺炎球菌经体外多代培养后失去荚膜现象等，此类变异是可逆的。2、菌落变异：肠道杆菌的S-R变异，即菌落由光滑型变为粗糙型。3、毒力变异：如卡介苗，乃是将有毒的牛分枝杆菌在含有甘油、马铃薯培养基上，经13年，连续传代230次，而获得的毒力减弱但仍保持免疫原性的变异株。4、耐药性变异：指的是原来对某种药物敏感的菌株，由于多种原因，例如细菌基因的改变、诱导酶的形成或者是耐药性质粒的传递等，而对同种药物发生变异，形成耐药菌株，甚至变成赖药菌株。二、抗生素敏感试验

随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增加（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来了不少的困难。为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌的同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各种抗生素的敏感性。药敏试验的常用方法：纸片法操作：贴纸片结果分析：

如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形成，敏感度越高抑菌圈直径越大：

>20mm：极度敏感抑菌圈直径

15~20mm：中度敏感