肝炎的分子诊断与临床应用课件

肝炎分子诊断项目开展介绍

---艾迪康市场部目录1、了解肝炎分子诊断2、分子诊断在HBV中的临床应用3、分子诊断在HCV中的临床应用4、ADICON已开展的肝炎分子诊断项目

我国乙肝病毒感染率概况什么是分子诊断

在临床上应用核酸（DNA/RNA)和分子生物学技术,在基因水平诊断和监控疾病情况和疗效，评估疾病的检测方法。分子技术在乙肝诊断与治疗中应用HBV分子诊断的临床应用高灵敏度HBVDNA定量HBV感染监测药物疗效检测感染早期检测HBV基因分型病情预后发展检测抗病毒药物效果预测P区耐药检测抗药性监测治疗药物选择S区变异确定隐觅性病毒变异判断疫苗效果判断肝炎预后C区启动子变异确定病毒变异类型判断治疗效果确定治疗方案高灵敏度乙肝DNA检测高精度病毒载量检测系统

（COBASAmpliPrep/CobasTaqMan）

高灵敏度乙肝DNA检测优势定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度，对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS系统是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x103copies／mL～1.0x108copies／mL，对于低于1.0x103copies／mL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏检的可能。而COBAS系统线性范围为20-1.7×108IU/mL，因此，COBAS系统更能准确反映血清HBVDNA含量。Cobas®高灵敏度乙肝：20IU/mL准确判断治疗起点/终点线性范围乙肝：20-1.7×108IU/mL极佳的重复性，结果可靠正确指导抗病毒治疗每批试剂均使用WHO标准品校准保证定量结果的准确性和可溯源性每个样本使用同源性内标定量避免结果不准确采用AmpErase酶减少交叉污染目前在国内唯一满足治疗指南和专家共识的HBVDNA和HCVRNA检测试剂CHB疾病管理:治疗目标HBsAg清除及血清学转换治疗终点ALT正常组织学改善HBVDNA降低/消失HBeAg血清学转换HBeAg消失cccDNA清除*Lok,A.S.Fet.al.“ChronicHepatitisB:Update2009.”HEPATOLOGY,Vol50,No.3,2009,pgs8-9HBV基因分型

根据HBV全基因核苷酸序列的差异，分为不同基因型:A.B.C.D.E.F.G.H共8个型不同的基因型具有不同地域分布我国主要是B\C型为主，偶有A型北方－C型HBV基因分型检测临床意义特征基因型B型C型感染性低高HbeAg阳性率低高HbeAg自然清除时间短长HBVDNA载量低高致病性轻重HCC发生率低（低年龄组高）高（高年龄组高）干扰素治疗完全应答率高低抗病毒治疗效果高低肝癌手术治疗预后好差癌栓栓塞治疗效果好差HBV变异的基础乙肝病毒:高变异性1/105

24h一万亿-十万亿拷贝*变异：一千万—一亿复制过程:DNA-RNA-DNAHBV逆转录酶:缺乏严格的校正机制变异:自然变异,免疫压力等等原本有效的药物

对发生耐药变异后的病毒束手无策变异前，药物有效抑制病毒变异后，药物对病毒束手无策乙肝病毒P区耐药P区耐药位点检测抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药原发无应答病毒学（部分）应答临床耐药抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药病毒的水平越低，耐药发生的几率越低初治患者耐药发生率拉米夫定,阿德福韦,恩替卡韦为基因型耐药发生率,替比夫定为因耐药发生的病毒学反弹发生率

拉米夫定M204I/VL180MV173L恩曲他滨V173LL180MM204I/V阿德福韦A181VN236T恩替卡韦T184A（G/I/S)M250V

特比夫定M204I/V常用抗病毒药物的耐药位点

常见变异的交叉耐药性敏感界于中间耐药抗病毒药物的选择和使用1.一种药物产生耐药时，需要用具有不同耐药位点药物代替2.为减少耐药情况，建议从治疗开始就使用具有两种不同耐药位点药物一起治疗3.由于抗病毒药物的耐药以及治疗的长期性，在治疗过程中应该定期检查，或是在发现药物治疗效果不佳时需排除产生耐药的可能耐药检测项目目前检测的变异位点：P区耐药位点11个 （169、173、180、181、184、194、202、204、233、236、250）专门检测LAM变异位点：180，181，204，173专门检测ADV变异位点：181，233，236艾迪康医学检验中心P区基因变异检验报告单样张

丙型肝炎病毒传播途径:主要血液/体液传播(似HBV)是引起输血后慢性肝炎和肝硬化主要原因无症状HCV携带者和慢性丙肝者多见感染HCV后，慢性化的比例高达50%以上免疫力不牢固黄病毒科丙型肝炎病毒属球形有包膜的RNA病毒，直径50nm病毒基因为单股正链RNA，链全长约10KbHCVRNA检测确定引起病毒性肝炎的直接原因通过病毒数量变化来监测治疗效果