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文档简介
第三讲实验动物环境
设施控制科学部
电话:82805273怎样才能养好实验动物
作好动物实验?*从种子中心引种*拥有合格的饲养管理人员*执行标准操作规范(SOP)*实验动物种群饲养在合格的实验动物繁育、生产设施(普通环境、屏障环境、隔离环境)内。*使用合格的饲料*使用合格的实验动物(遗传学分类和按微生物控制分类)*合格的实验动物饲养在合格动物实验设施(普通环境、屏障环境、隔离环境)内。*科技人员要持证上岗*特殊实验需在特殊环境(感染、放射、转基因、GLP等)中进行操作,确保实验人员及周围环境不受伤害。实验动物物理因素温度湿度气流光照噪音笼具垫料饲养密度人为因素设设程制实验施备序度方法化学因素饲料饮水臭气杀虫剂消毒剂生物因素同种生物异种生物实验动物环境因素与指标控制一、实验动物设施概念实验动物生产设施(breedingfacilityforLaboratoryanimal)
用于实验动物生产的建筑和设备总合。2.
实验动物实验设施(experimentalfacilityforlaboratoryanimal)
以研究、试验、教学、生物制品、药品生产等为目的进行实验动物试验的建筑物和设备的总和。3.实验动物特殊实验设施(hazardexperimentfacilityforlaboratoryanimal)
二实验动物环境设施分类
按照“实验动物环境与设施”GB14925-2001规定,实验动物环境设施分为三级,控制程度从低到高,依次为普通环境(opencondition)、屏障环境(barriercondition)和隔离环境(Isolationcondition)。1.普通环境(opencondition):符合实验动物居住的基本要求,控制人员和物品、动物出入,不能完全控制传染因子,适用于饲育基础级实验动物。(conventionalanimal)。2.屏障环境(barriercondition):符合实验动物居住的要求,严格控制人员、物品和环境空气的进出。适用于饲育清洁实验动物(Cleananimal)及无特定病原体实验动物(SPFspecificpathogenfreeanimal),3.隔离环境(Isolationcondition):采用无菌隔离装置以保存无菌或无外来污染物。隔离装置内的空气、饲料、水、垫料和设备均为无菌,动物和物料的动态传递须经特殊的传递系统,该系统既能保证与环境的绝对隔离,又能满足转运动物时保持内环境一致。该环境设施适用于饲育无特定病原体(SPF)、悉生(Gnotobioticanimal)及无菌实验动物(germfree
animal)
。
普通环境设施屏障环境设施图三人员进出程序(登记处)向工作人员出示《北京市实验动物从业人员上岗证》。在登记处填写《动物实验室进出登记》表。如实填写进出时间及操作内容。填写《N95口罩使用记录表》,领取口罩。领取门禁卡。注意:实验人员第一次进入屏障系统必须在动物中心工作人员的带领、监督下进行,并且严格执行《实验人员隔离制度》。人员进出程序(过渡走廊)进入人员应在过渡走廊处进行手部消毒。如有涂抹香水应尽量洗去。洗后仍有香气者禁止入内.长发者应在此处把头发盘起。留长指甲者应在此处把指甲剪短。进入屏障之前将所带物品、药品进行有效消毒。注意:进入屏障系统不得散发、留指甲、喷香水等。嗜酒、吸烟者也不得进入。违反者将视为严重违纪。
人员进入正压屏障系统程序(一更)
在一更处脱去所穿拖鞋。刷卡进入二更。
人员进入正压屏障系统程序(二更)穿上二更专用拖鞋。戴乳胶手套。戴口罩。穿隔离服从衣架底部抽取隔离服小心打开牛皮纸避免撕破人员出正压屏障系统程序在一更脱去衣物用一只手套包裹着另一只手套脱掉。脱下的手套扔到指定的垃圾桶中。脱下的隔离服与牛皮纸一同放入一更的不锈钢桶中。最后摘下口罩。物品进入屏障系统高压消毒(推荐方法)物品经过121度,20分钟高压灭菌后传入。从缓冲间传出。适用物品:耐高温、耐高压物品。如动物笼具,手术器械等金属物品。物品进入屏障系统渡槽消毒物品从渡槽传入。在渡槽中浸泡30分钟。物品从缓冲间传出。适用物品:不怕湿、耐腐蚀物品。如SPF包装饲料,手术器械,桶、盆等塑料制品。物品进入屏障系统防紫外消毒适用物品:怕紫外照射的物品(如DNA等生物制剂)将物品用酒精擦拭后用高压灭菌的锡箔纸包裹。经传递仓紫外照射20分钟后传入。从缓冲间传出。物品进入屏障系统适用物品:相机、摄像机等拍摄物品。用无菌透明塑料袋密封包裹,经过传递仓20分钟紫外照射后方进入,但使用时不得摘去、弄破塑料袋。从缓冲间传出。注意:可以将镜头的头露在外边,但周围需要严格密封。物品进入屏障系统适用物品:显微镜、离心机等精密实验仪器。物品经过还氧乙烷或钴60处理,密封包装经过传递仓或渡槽传入。从缓冲间传出。本项设备使用需与外单位联系。因此需要提前预约。注意:如物品没有按规定进入,将视为严重违纪动物进入屏障系统本动物实验室仅接受清洁级或清洁级以上级别的啮齿类实验动物。动物送来后暂放隔离区检测。检测结果合格后动物方可传入屏障系统。不需要检测的动物,用新洁尔灭或酒精擦拭符合级别要求的包装箱,经传递仓紫外照射30分钟后传入。锐器盒使用方法锐器盒使用方法实验后垃圾分类放置
用过的离心管、针管、废纸
采血管针头
锐器盒使用中的错误操作
2005年4月30日由于供电局对医学部部配电室进行检修,医学部8:00至17:00停电,动物部为保证实验动物设施的正常运行,启动紧急预案,在医学部校舍维修中心全力支持下,特租来发电车进行发电。
突发停电事故,“紧急预案”的操作规程
动物房必须具备双路供电或备用电机,定期演练备用发电机和风机的启动,电源的切换和发电,确保每天24小时供电及送、排风不间断。通知各有关人员把关,在停电、停送、排风期间,任何人不得进出屏障区实验动物设施(繁育生产设施及动物实验设施)。
隔离环境设施在停电前、紧急发电后操作规程(1)停电前10分钟堵高效过滤盘的进风口、出风口。(2)紧急发电后,迅速启动送、排风,然后立即打开进风口、出风口。
4.
屏障环境设施在停电前、紧急发电后操作规程(1)停电前10分钟关闭进风口、出风口;密封缓冲间、传递窗、淋浴间外侧四周缝隙。(2)紧急发电后,迅速启动送、排风,然后立即打开进风口、出风口及各缝隙。工作人员操作高温高压灭菌器
药液渡槽传递窗(passbox)
屏障通道-淋浴室
屏障区内物品准备间
屏障区内物品储藏室
屏障区内饲育员更换笼具
屏障区内饲育员更换动物饮用水屏障区内育成动物观察1
屏障区内育成动物观察2
屏障区内育成动物观察3
工作人员每日工作完毕清洁工作(亚清洁走廊)
屏障区内日常维持消毒1
屏障区内日常维持消毒2
3.层流架(laminarairflowrack)
1.
原理与种类:层流架的原理与种类比较多,方式也不尽相同,但性能主要有两个:即正压型与负压型。正压型层流架主要用于清洁动物或SPF动物的饲养。这种类型的层流架一般都采用背面、顶部或以空气幕的方式将洁净的气体送到洁净区,使洁净区内保持正压。空气经初效、高效过滤器,把过滤的气体均匀地送入柜内各个洁净区。柜内动物代谢产生的污浊气体,由统一的排气管排到室外,还可以用内外压差,经层流架门的缝隙排到室外。一般用于饲养的层流架,排除的气体不进行任何处理。并且,还要防止未经过滤处理的气体流入洁净区。负压型层流架,主要用于感染动物的饲养。这种负压柜阻止了污染空气外流,防止工作人员污染。为了实验操作方便,柜内可以分为若干个小的区域,它们之间是完全隔离的,可防止动物之间的交叉污染。进入该柜的空气是从室内直接吸入并经过初效、高效过滤器过滤后,由送风机将洁净的空气送到层流架内。污染的气体通过背面的回风小孔进入回风管。然后再经过初效、高效过滤处理。超净工作台(cleanbench)层流柜(laminarairflowrack)
大鼠层流轲(4层)
尺寸:1350*700*1980mm
小鼠层流架
尺寸:1250*650*1950mm
净化工作台(单人)4.独立送风笼盒(IVC)该产品由电气主机箱、导风通道笼架和笼盒三部分组成。其中电气主机箱由送风系统、排风系统、电气控制系统和温湿度监视系统组成。室内空气经送风系统预过滤和高效过滤器进入导风通道笼架,通过即插即用连接装置送入到每个笼盒。从而为实验动物提供均匀的低流速洁净空气。动物排放的废气经笼架回风管道进入主机箱的排风系统,再进行二级过滤后排放到室外。笼盒直接排放废气,可增加通风效率,保持垫料干燥,减少笼具更换次数。有效地防止动物交叉感染,保障实验工作人员的健康安全。置于普通房间内配合超净工作台可用于SPF动物的培育、繁殖、保种和各类动物实验,尤其适用于饲养免疫缺陷动物和转基因动物。
IVC(IndividuallyVentilatedCages)IVC大鼠笼盒
规格:470×315×260(mmIVC小鼠笼盒规格:
310×205×180(mm))IVC大小鼠笼结构图
由笼盒、板式冲压网盖、饮水瓶及笼盒罩四部分组成。
隔离环境(Isolationcondition)
1.原理:隔离器必须具备五个条件(1)必须是严格对微生物密闭的容器,其内部空间和内容物能接受高压蒸气或化学药品灭菌处理。(2)隔离器的空间以及内容物可随时被观察。(3)隔离器内部应随时在视野下从外部进行工作,但不破坏内部的无菌环境。(4)必须装置一个有内外门的无菌通道,动物或食物以及其它物品可以从外部无菌地输送到隔离器内部去,而不破坏内部的无菌环境,送出时亦然。(5)必须装置一个无菌进出气系统,内部保持适度的高气压。塑料薄膜套盖,一端在隔离器内,有内盖,一端在外界,有外盖,两盖不能同时打开,此渡沧专为传入传出物品及动物用。2.隔离器的结构:隔离器是由隔离器体及其附属设备组成。
(1)隔离器:常用薄膜隔离器是用0.3~0.5mm厚的软透明塑料薄膜(无毒聚乙烯)制成,呈长方形箱状(45×50×115cm),安放在工作台上,一侧装有橡皮手套,饲养人员通过手套进行操作,不直接接触动物。(2)鼓风机:是隔离器的动力设备,将洁净空气通向隔离器,同时维持隔离器内的换气次数,气流速度及正压,空气通过排气阀排出。(3)灭菌渡舱:装在隔离器的一侧,呈桶状,直径30cm,长度30cm其两端具有(4)灭菌桶:移入物品多时,可放在灭菌桶内,直径30cm,长度60~70cm,桶壁有通气小孔,并放有多层空气滤材,内设有漏道,放一层金属搁板,便于取放物品,桶口封以能耐高压的薄膜。(5)连接袖:是由和隔离器同等质量的塑料薄膜制成,桶状,长30~60cm,直径30cm,袖壁有通气小孔,是隔离器与灭菌桶,或两隔离器间连接的通道,传递动物或物品用。(6)灭菌渡槽:是一条塑料薄膜桶,一端附于隔离器上(或灭菌渡沧),一端浸于隔离器外的药液灭菌槽,多用于剖腹取胎。隔离器(Isolator)
SSII型不锈钢手术隔离器
隔离器(Isolator)手术隔离器(operatingIsolator)隔离器操作隔离环境附件1—传递桶(passbarrel)
不锈钢水池
100×60×80
不锈钢传递桶
隔离环境附件2——对接架(connectrack)隔离环境附件4——灭菌箱
(disinfectbox)
三实验动物饲养常用的
辅助设施(assistedfacility
)
这是指在动物房舍设施内使用于动物饲养的器具和材料,主要包括笼具、笼架、饮水装置、运输笼和垫料等。这些器具和物品与动物直接接触,产生的影响最直接,务必予以重视。
1.饮水设备和灭菌设备
普通实验动物饮水应符合GB5749的要求
。
屏障和隔离环境内饲养的实验动物饮用水须经灭菌处理。大型的实验动物设施,往往装设无菌水生产设备,用过滤系统和紫外线照射,来清除细菌、真菌和病毒。实验动物的饮水一般无需作蒸溜、离子交换或反渗透等处理,有助于动物对微量元素的利用。
2.笼具(cage)和笼架(rack)
笼具要求能对动物提供足够的活动空间,通风和采光良好;坚固耐用,里面的动物不会逃逸,外面的动物不会闯进;操作方便,适合于消毒、清洗和储运;成本低廉,经济实用。现在国内已有多家厂商,生产各种式样和质量档次的笼具。笼架是承托笼具的支架,使笼具的放置合理,有些还设有动物粪便自动冲洗和自动饮水器。要注意笼具和笼架的匹配,方便移动和清洗消毒。
各类动物所需居所最小空间
兔笼
新型SPF兔笼RBS-53型/3×2笼大小鼠通用平板架新型不锈钢平板架大鼠笼鼠盒SS4/485×350×200mmR5/545×395×200mmSS3/485×350×240mmH1/370×270×170mm
大鼠笼大鼠笼大鼠笼不锈钢猴笼不锈钢羊笼不锈钢蚊笼不锈钢猫笼豚鼠笼豚鼠笼工作车1工作车2小鼠固定器:20g30g
大鼠固定器:250g350g
代谢笼(metaboliccage)不锈钢热源工作台不锈钢狗解剖台电子天平不锈钢灌胃针头不锈钢兔解剖台不锈钢狗解剖台3.动物运输
(transportofanimal)
动物运输应符合安全和微生物控制等级要求,不同品种、品系和等级的动物不得混合装运。
动物运输应配置专用车辆,专人负责,定期消毒、保洁,车辆应装有空调设备。
运输笼具(carryingcage)须经消毒、灭菌后方可回收使用。运输笼具(carryingcage)
高等级啮齿类实验动物运输笼
运输笼具(carryingcage)高等级啮齿类实验动物运输笼
4.垫料(bedding)
垫料应选用吸湿性好、尘埃少、无异味、无毒性、无油脂的材料。垫料须经消毒、灭菌后方可使用。
第二节环境因素对实验动物的影响
◎实验动物外环境。是指实验动物设施或动物实验设施以外的周边环境。如气候或其他自然因素、邻近的民居或厂矿单位、交通和水电资源等。◎实验动物内环境。指实验动物设施或动物实验设施内部的环境。内环境又细分为大环境和小环境。前者是指实验动物的饲养间或实验间的整体环境状况;后者是指在动物笼具内,包围着每个动物个体的环境状况,如,温度、湿度,气流速度,氨及其他气体的浓度,光照,噪音等等。
一实验动物设施选址1.实验动物繁育、生产及实验场所应避开自然疫源地。2.宜选在环境空气质量及自然环境条件较好的区域。3.宜远离铁路、码头、飞机场、交通要道以及散发大量粉尘和有害气体的工厂、贮仓、堆场等有严重空气污染、振动或噪声干扰的区域。4.实验动物繁育、生产、实验设施应与生活区保持大于50m的距离。二实验动物环境设施建筑要求
1.建筑物门、窗应有良好的密封性。2.走廊宽度不应少于1.5m,门宽度不少于1.0m。3.动物繁育、生产及实验室通风空调系统保持正压操作,应合理组织气流布置送排风口的位置,避免死角,避免断流,避免短路。4.各类环境控制设备应定期维修保养。5.动物繁育、生产、实验室的电力负荷等级,应根据工艺要求确定。应备有应急电源。6.室内的配电设备,应选择不易积尘的设备,并应暗装。电气管线应暗敷,由非洁净区进入洁净区的电气管线管口,应采取可靠的密封措施。三实验动物环境设施建筑卫生要求
动物繁育、生产、实验场所所有围护结构材料均应无毒、无放射性。2.
内墙表面应光滑平整,阴阳角均为圆弧形,易于清洗、消毒。墙面应采用不易脱落、耐腐蚀、无反光、耐冲击的材料。地面应防滑、耐磨无渗漏。天花板应耐水、耐腐蚀。
四实验动物环境设施
技术指标要求
1
实验动物繁育、生产设施环境指标应符合表1所列要求。2动物实验设施环境指标应符合表2所列要求。表1实验动生产间的环境指标
项目小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境屏障环境温度,℃20~2616~2820~2616~28日温差,℃≤-4444相对湿度,%40~70换气次数,次/h10~2020~508~1010~2020~5010~20气流速度,m/s0.1~0.2压强梯度,Pa-20~50100~150-20~50100~15020~50落下菌数,个/皿≤3无检出303无检出3续表1实验动物繁育、生产设施环境指标
项目小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境屏障环境氨浓度,mg/m3≤14噪声,DB≤
60照度工作照度(Lx)≥动物照度20015~20100~2005~10昼夜明暗交替时间,h12/12或10/14空气洁净度,100001001000010010000级动物实验间的环境指标(静态)项目小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境隔离环境温度,℃20~2616~2618~2216~26日温差,℃≤4444相对湿度,%40~70换气次数,次/h10~2020~508~1010~2020~5020~50气流速度,m/s0.1~0.2压强梯度,Pa-20~50100~150-20~50100~150100~150落下菌数,个/皿≤3无检出303无检出无检出续表2动物实验设施环境指标(静态)项目小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠犬、猴、猫、兔、小型猪鸡
屏障环境隔离环境普通环境屏障环境隔离环境隔离环境氨浓度,mg/m3≤14噪声,DB≤
60照度工作照度(Lx)≥
动物照度20015~20100~2005~10昼夜明暗交替时间,h12/12或10/14空气洁净度100001001000010010000级注:表中氨浓度指标为动态指标。1)一般采用全新风,保证动物室有足够的新鲜空气。如果先期去除了粉尘颗粒物和有毒有害气体,不排除使用循环空气的可能,但再循环空气仅限于同一单元,新鲜空气不得少于50%,并保证供风的温、湿度参数。2)单走廊设施必须保证饲育室、实验室压强最高。3)此处动物实验设备系指动物饲养和实验时,保障动物所处的局部环境应达到本环境指标的设备。3)豚鼠、地鼠普通环境温度指标:18~29℃五、工艺对设施区域设置的要求
1区域布局1.1前区的设置:包括办公室、维修室、库房、饲料室、一般走廊。1.2饲育区的设置1.2.1繁育、生产区:包括隔离检疫室、缓冲间、育种室、扩大群饲育室、生产群饲育室、待发室、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊。1.2.2动物实验区:包括缓冲间、实验饲育间、清洁物品贮藏室、清洁走廊、污物走廊。1.2.3辅助区:包括仓库、洗刷间、废弃物品存放处理间(设备)、密闭式实验动物尸体冷藏存放间(设备)、机械设备室、淋浴间、工作人员休息室。2其他设施设备2.1屏障环境和隔离环境均应在压强变化相交处设有缓冲设置。2.2动物实验区的设施应与饲养繁育系统分开设置。2.3有关放射性实验操作应参照GB4792实施。2.4带烈性传染性、致癌、使用剧毒物质的动物实验,均应在负压隔离设施或有严格防护的设备内操作。此类设施(设备)须具有特殊的传递系统,确保在动态传递过程中与外界环境的绝对隔离,排出气体和废物须经无害化处理。应体现“人、动物、环境”
的三保护原则。3设施与设备3.1在实验环境中设置设备时,其设备性能和指标,均须与环境设施指标要求相一致(表1、表2)。3.2不同实验要求的正压、负压设备,必须达到环境设施的指标,方能取得相应的证书。六、废弃物及动物尸体处理
废弃物应作无害化处理并应达到GB8978的要求。
动物尸体应立即焚烧处理,其排放物应达到医院污物焚烧排放规定要求。
1七实验动物环境对实验动物
及动物实验的影响实验动物环境条件对动物的健康和质量以及对动物实验结果有直接的影响,清洁级以上的实验动物,环境条件要求严格,环境指标要求恒定,动物质量有保证。动物实验结果会出现一致性、可靠性和可重复性,也使同类型的实验数据具有可比较的意义。影响实验动物的环境因素很多,这里主要阐述实验动物饲养室内的环境因素对实验动物的影响,例如温度、湿度、气流和速度、噪声、光照度、空气中的微生物和颗粒物等。(一)温度(Temperature)
环境温度缓慢地变化,在一定范围内机体可以自行调节而适应。但气温变化过大或过急对动物的健康将产生不良影响。温度对实验动物的影响表现在生殖、泌乳、机体抵抗力、形态、新陈代谢、实验反应性等方面。温度对生殖的影响一般哺乳类实验动物,当温度过低时,常导致性周期的推迟,而当温度超过30℃时,雄性动物出现睾丸萎缩或形成精子的能力下降;雌性动物出现性周期的紊乱,泌乳能力降低或拒绝哺乳等。如金黄地鼠,当温度低于18℃时,可发生吃仔现象;13℃时,可引起幼鼠死亡;临近4℃时,经短时间即可进入冬眠。
温度对机体抵抗力的影响温度过高或过低都能导致机体抵抗力降低,而患病。大鼠在31℃、鸡在35℃高温应激作用下,出现需氧菌(葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、棒状杆菌属)菌群的增加,鸡还出现厌氧菌的消化道链球菌、梭状芽胞杆菌属增加的现象。将BALB/c小鼠从22℃环境移到12℃环境内,其白细胞数发生变化,与免疫反应有关的血液及脾脏中B和T细胞的比率亦出现明显变动,免疫功能的异常与疾病发生关系很大。温度对动物形态方面的影响
低温环境下繁殖饲养的小鼠其尾长明显缩短;大鼠在10℃繁殖时其尾长比在30℃条件下约短2cm;喜玛拉雅兔在20℃时,耳、尾、鼻和四肢尖端长白毛,10℃时则长黑毛。温度对动物实验的影响
环境温度不同常使同种动物实验出现不同结果:如不同温度下饲养的小鼠对药物的半数致死量LD50可产生显著差异。环境温度还对药物的急性毒性试验,致癌、致畸、致突变试验,微生物感染试验和免疫试验等动物实验结果产生影响。温度对动物行为和生理机能的影响
温度可使动物的姿式、摄食量、饮水量、母性行为、心跳、呼吸、新陈代谢等出现相应改变。在4℃以下,单饲小鼠摄食量比同样温度下5只一组群饲小鼠高30%。寒冷环境,动物出现立毛寒颤,蜷缩成团。炎热天气,动物饮水量增加,地鼠呈“大”字型睡眠,狗张口伸舌,呼吸加快,喘气明显。小鼠发生流涎现象。(二)湿度(Humidity)
湿度是指大气中的水分含量。按每立方米空气中实际含水量(克)表示时称为绝对湿度;空气中实有含水量占同等温度下饱和含水量的百分比值则称为相对湿度。实验动物相对湿度国标要求在40~70%之间。空气相对湿度对动物机体热调节有密切关系。高温、高湿的环境对动物的热调节极为不利,同时相对湿度过高,微生物易于繁殖,饲料和垫料易霉变,动物室空气中的细菌数与氨浓度也明显增加,容易引起动物的呼吸系统疾病。湿度过低,可导致尘土飞扬,对动物健康不利。在温度为27℃,湿度在40%以下时,大鼠可发生尾部的环状坏死症(ringtail)。有的报道认为在笼中加入垫料或在饲料中添加一定量的脂肪可以防止此病发生。在低湿的环境下,大鼠和小鼠的摄食量、饮水量都略有增加。有时还发生乳母咬仔现象,仔鼠发育不良,体重增长停滞。
(三)气流、速度及换气次数
(Aircurrent、speedandventilation)
1.人类一般可感觉的气流速度为0.2-0.25m/s,而实验动物的气流以0.1-0.2m/s为最佳。在饲养室内保持一定的气流和速度,不仅可使温度、湿度及化学物质组成保持一致,而且有利于将污浊气体排出室外。2.气流和速度与动物体热的扩散有很大关系。气流、速度、温度、湿度均不是各自以单一的因素对动物产生影响,而是在互相关联状态下影响动物。当室内气温较高时,气流有利于对流散热,对动物有良好作用。当室温较低时,气流使动物的散热量增加,加剧寒冷的影响。由于大多数实验动物体型较小,体重与体表面积的比值较大,因此对气流和风速更加敏感。气流速度过小,空气流通不良,动物缺氧,室内臭气充斥,散热困难,造成不舒适感,甚至发生疾病和窒息。气流速度过大,动物体表散热量大,动物摄食量增加。3.适当的换气次数可以为动物提供充足的新鲜空气。但换气次数过多,则会让动物大量消耗体能以弥补因空气快速流动引起的热量损失。中国药品生物制品检定所在我国较早地开展了屏障内饲养高级实验动物的探索。开始时,由于设计人员只考虑洁净度的要求,而使换气次数>100次/小时。动物虽未受到感染,但幼仔不能存活或发育不良。孙靖与钟品仁两位教授经仔细研究后找到了问题的症结,在把换气次数降到35次/小时左右时,试验结果立即好转。国家标准规定:屏障环境换气次数在10-20次/小时,隔离环境20~50次/小时。4.病原微生物随空气流动而四处散播。动物设施内各区域的静压状况决定了空气流动方向。在屏障系统中,因静压不同,空气流动方向是从清洁区向污染区流动,动物室内处于正压高于室外;而在污染或放射性实验室,为了不让室内微生物或放射性物质扩散出去,室内处于负压,低于室外。
(四)噪声(noise)
1.噪声一般是指频率高、声压大,带有冲击性或具有复杂波形,给人或动物带来心理或生理不利影响的声音。一般标准要求控制在60分贝以下。2.噪声的来源主要有施工噪声、交通噪声、动物房空调及通风设备产生的噪声和动物自身产生的噪声等。3.噪声可对实验动物产生许多影响:噪声可妨碍受精卵着床,使动物繁殖率下降;突然的噪声可引起豚鼠流产,噪声过强或持续不断诱使母鼠咬死仔鼠或吃掉幼仔;噪声使动物兴奋和控制失去平衡及部分神经细胞受损,实验小鼠在持续性噪声的环境中可产生烦躁不安和食欲减退,DBA小鼠可发生听源性痉挛;噪声可使小鼠的血糖、肾上腺素、心跳数、呼吸数和血压明显增加。有人试验发现,在给小鼠抽血化验血糖时,在电钻打孔发出的强噪声下,前后采血,其血糖值有明显差异。
(五)照明(Illumination)
可见光线对动物机体有多种功能。但照度过强或过暗,时间过长或过短,对实验动物都不利。1.大鼠在2000lx,照射几小时就出现视网膜障碍,连续暴露2天尚有恢复的可能,如果暴露8天以上就不能恢复,即使在60lx照度下,连续照射13周,大鼠也会出现视网膜的退行性变化。国标规定大小鼠的动物照度15~20lx。2.波长和灯光颜色可影响小鼠的自发行为,在蓝、绿、白色光下最低,而在红色与黑暗中最大。大鼠的阴道开口以蓝色照明比红色照明要早3天。3.照明时间,以12小时照明、12小时黑暗大鼠的发情实验可呈现最稳定的4日性周期。如以16小时照明,8小时黑暗则呈现5日性周期或更长。若以22小时照明,2小时黑暗,则性周期长短不一,极不规律,或连续发情或不能繁殖。(六)空气中的微生物、粉尘和有害气体
(biologicalpurification)
饲养室空气中飘浮着颗粒物和有害气体、微生物多附着在颗粒物上,它们对动物机体可造成不同程度的危害,也可能干扰动物实验。实验动物室内空气除受附近地区大气污染的影响外,实验动物本身也产生许多污染物,动物的粪尿及垫料如不及时更换清除,将发酵分解产生恶臭气味。在饲养室内进行消毒、灭虫或对动物作实验处理过程所使用的药物或化学品都有可能造成饲养室内空气污染,还有饲料、垫料及动物毛和皮屑也可污染饲养环境而对实验动物产生影响。屏障环境要求空气洁净度达到10000级,隔离环境达到100级。1.有害气体动物室中的有害气体,主要指对人产生不愉快气味或可能破坏生活环境的恶臭物质。它们包括氨气、甲基硫醇、硫化氢等,氨气是这些污染物中浓度最高的一种,各种动物室中均可测出。甲基硫醇和硫化氢在狗、猴和猫的饲养室能检测到。为判明饲养室污染状况,常以氨作为监测指标。氨气作为一种刺激气体,它既是粪便的直接产物,也是粪便在细菌作用下的间接产物。它的产生与实验动物饲养密度成正比,与笼内垫料更换次数成反比关系。当其浓度增高时,可刺激动物眼结膜、鼻腔粘膜和呼吸道粘膜而引起流泪、咳嗽,严重者甚至产生急性肺水肿而致动物死亡。在200±50ppm氨环境下,饲养4天的大鼠,其气管粘膜可出现急性炎症病变,饲养8天可出现气管粘膜纤毛消失,浸出液增加和管壁变厚等现象。2.粉尘动物饲养室空气中粉尘的来源主要有两个途径,其一为室外空气未经过滤处理直接带入,其二是动物体表被毛、皮屑、饲料和垫料等材料的碎屑往往可以被气流携带或动物活动扬起而在空气中悬浮形成粉尘颗粒物。这些颗粒物可引起实验动物或饲养人员的变态反应或哮喘病。颗粒物除本身对动物产生不良反应外,还是各种病原微生物的载体。3.微生物空气中的微生物主要是指致病性和非致病性微生物。实验动物设施中主要通过测定细菌和真菌来反映微生物学的清洁度指标。动物设施中细菌的产生及数量多少与动物放置密度、笼具构造、垫料使用情况以及与空调机有关的温、湿度、换气次数等有很大关系。空气中致病性微生物多数通过附着在颗粒物上与粉尘粒子一起对实验动物产生危害。
第三节实验动物环境监测
和设施的维护
(一)环境检测的项目新建或改建的实验动物设施竣工启用前,须向所属的实验动物管理部门申请进行环境设施的检测,检测合格方能投入使用。实验动物设施是连续运行的,各种环境因素一直处在变动之中,也需要经常性的监测和维护。对实验动物设施的环境条件,国家有标准化的规定,检测项目包括温度、相对湿度、气流速度、梯度压差、空气洁净度、空气落菌数、氨浓度、噪声、照度和换气量等。
空气落菌数,是检测空气生物洁净度的指标,用血琼培养基,置于被检房舍的空间,暴露30分钟后,计算培养基上的落菌数尘埃粒子测定,是空气洁净级别的指标,10-20平米的房间布点3-5个,用专用仪器测定,数据作统计分析。温度、湿度测定,包括日温差、温湿度的均匀性等。气流速度测定,使动物处在合理的风速区域。换气次数,测定送风口或出风口的风速,然后参照风口面积和房间容积计算。(二)实验动物设施的维护1.
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