实验一 生物材料的采集和制备课件

院系：生化环院任课老师：吴雨龙任课班级：09食品、行09食品食品专业食品毒理学实验本实验主要学习食品毒理学试验中有关动物试验的基本操作技术，重点掌握实验动物的选择、染毒途径、生物材料的采集和制备等方法。实验一生物材料的采集和制备实验一生物材料的采集和制备

实验目的：1

实验基本要求：2

实验前:1.预习实验内容并复习相关理论知识；2.进入实验室，必须穿实验服；3.检查实验器材。实验时:1.实验器材要妥善保管；

2.实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录题目目的原理材料：实验动物，器材，药品方法：用自己的语言简单扼要描述出来；结果：要求真实、清楚；讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；

实验报告的书写：3随机原则：使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。对照原则：组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照；自身前后对照重复原则：

实验设计的原则：4动物的选择

小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。

大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。

实验动物：5

豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。

家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查

狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。

实验动物：5小白鼠

右手提起鼠尾,左手拇指和食指捏住双耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤及尾部,便可将小鼠完全固定（见图2）。单手捉持，用拇指和食指抓住小鼠尾巴，用小指、无名指和手掌压住尾根部，再用腾出的拇指、食指及中指抓住鼠双耳及头部皮肤而固定（见图3）。

动物的捉拿及固定方法：7豚鼠

豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。家兔可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势（见图4-1，4-2）。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定（见图5-1，5-2）。

动物的捉拿及固定方法：7小白鼠腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度-45度角将针头从下腹部向头端视动物大小刺入1-2厘米。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。将注射针头回退少量距离，轻轻回抽注射器，如无明显回血、回液即注入药物（见图7，图8）。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3ml／l0g。

动物染毒的方法：8肌肉注射（i.m.）：小鼠因肌肉较少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多选后腿上部外侧，一处注射量不超过0.1mL。

动物染毒的方法：8皮下注射(s.c.)：动物皮下给药的部位主要在颈背部。固定动物后，轻轻提起皮肤，将注射针头刺入皮下。小幅度移动针头，如手指可感觉到皮肤随针头移动，表明针头可能刺入皮内。应调整角度和深度，重新插入针头。确认注射针头在皮下后，轻轻回抽，如无回血即可注入药物。用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可（见图9）。小白鼠静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50℃热水中浸泡半分钟或用白炽灯烘烤使血管扩张。左手拉尾端，选择两侧尾静脉中扩张最明显的，右手持注射器将针头刺入尾静脉。当针头进入静脉时有突破感，随后的推进阻力减小，同时可能有回血。如针头未进入静脉，则无突破感，进针的阻力无改变。推入药液（见图10）。

动物染毒的方法：8家兔灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入（见图11）。

动物染毒的方法：8家兔皮下、肌肉、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0ml/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。

静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉（兔耳外缘的血管为静脉，中央的血管为动脉，如图），用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入（见图12）。

动物染毒的方法：8

动物采血方法：91.大鼠与小鼠采血方法

断头采血：操作者左手握住动物，右手持剪刀，快速剪断头颈部，倒立动物将血液滴入容器。注意防止断毛落入容器中。心脏采血：动物先行麻醉且固定成仰卧位。胸部常规消毒，在手触心搏最明显处，右手持针穿刺入右心室采血，之后用干棉球压迫止血。如为一次性采血，也可以在麻醉下剖开胸腔暴露心脏，直接进针。

动物采血方法：92.家兔采血方法

耳缘静脉采血：家兔在兔盒中固定，轻弹耳部，拔掉一侧耳缘部细毛，轻轻以手指弹耳，使耳缘静脉充血，酒精消毒。左手压迫耳根，右手持针刺破静脉，收集血液，或直接用注射器进针耳缘，静脉采血。心脏采血：将兔以仰卧位固定在兔台上，在左侧胸3-4肋部剪毛，常规消毒。于第3-4肋部近胸骨左缘处，手触心搏最强部位进针，见血后采血。采血毕，迅速拔针，用酒精棉球压迫止血。（附表：动物安全采血量）

动物的处死方法：8（3）击打法适用于较小的动物，如家兔、大鼠和小鼠等。提起动物的尾部，用力敲击动物头部，或用要木锤打击头部，致使动物死亡。（4）断头法此法适用于蛙、蟾蜍、小鼠和大鼠。用剪刀将动物头部剪断，由于脊髓娄离且大量出血，动物很快死亡。

小白鼠是野生鼷鼠的变种，属于动物界，脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目，鼠种。我国目前饲养最广泛的是1946年从印度某研究所引入到云南昆明饲养的品种，又名昆明种。50年代由昆明引到北京生物制品研究所，以后输送到全国各地饲养。

豚鼠是啮齿目豚鼠科的通称，因肥笨且头部长的像猪得名。也叫荷兰猪。普通短毛的豚鼠是著名的实验动物，几乎都成为实验动物的代名词。

家兔属于哺乳纲、啮齿目、兔科、草食性哺乳动性。家兔耳大、血管清晰，便于注射和取血。

12345678912345图1两种动物毛发染色编号法图4-1家兔捉拿方法1图4-2家兔捉拿方法2图5-1家兔固定方法1图5-2家兔固定方法2图6小鼠灌胃方法×√图7小鼠腹腔注射错误方法图8小鼠腹腔注射正确方法图9皮下注射方法