酸性木聚糖酶（ACX）活性检测试剂盒说明书-可见分光光度法UPLC-MS-4236

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页酸性木聚糖酶（ACX）活性检测试剂盒说明书UPLC-MS-423650T/24S

可见分光光度法试剂名称规格保存条件缓冲液液体75mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体4mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体5mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入12mL蒸馏水使用，2-8℃保存3个月。2、标准品：10mg木糖。临用前加入667μL缓冲液配成100μmol/mL的标准品溶液，2-8℃保存8周。(EC)β-（ACX）ACX3,5-540nm540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力Xylan

ACX

ReducingSugarReducingSugar+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。1mL一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）8000rpm，4℃15min1mg1mL100.1g1mL8000rpm，4℃15min10二、测定步骤130min540nm2、标准品稀释：取20μL100μmol/mL木糖标准液，加入980μL缓冲液，充分混匀，配制成2μmol/mL的木糖标准液备用，现用现配。（实验中每管需要200μL，为减小实验误差，故配制大体积。）3、样本测定：（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（μL）对照管测定管空白管标准管样本200200--2μmol/mL木糖标准品200缓冲液300300500300试剂一-200200200混匀，50℃水浴中反应30min，立即沸水浴中10min灭活。（注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系）试剂一200试剂二300300300300试剂三100100100100混匀，沸水浴中显色5min（注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系），冷却后尽快测定各管540nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。空白管和标准管只需做1-2次。三、ACX活性计算1、发酵液ACX活力计算：50℃，pH4.81μmolACX活力（U/mL）=C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷T=0.067×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；T：反应时间，30min。2、酶干粉ACX活力计算：50℃，pH4.81μmolACX活力（U/mg）=10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V提取÷W1÷T=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W110：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。3、组织中ACX活力计算：酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。ACX活力（U/mgprot）=10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V样本÷(V样本×Cpr)÷T=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷Cpr50℃，pH4.81μmolACX活力（U/g质量）=10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V提取÷W2÷T=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W210：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2μmol/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W2：样本质量，g；T：反应时间，30min；C