土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒-微量法UPLC-MS-4023

电话：400-998-2324邮箱：service_uplc_ms@163.com网址：本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司第第页土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。货号：UPLC-MS-4023规格：100T/48S

微量法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。试剂名称规格保存条件试剂一液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体10mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入5mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂2-8℃保存两周。210mg1mL10mg/mL葡萄糖标准液备用，2-8℃存两周。产品说明：S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。S-NI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与NI活性成正比。3,5-DinitrosalicylicSoil

ReducingSugar 3-Amino-5-NitrosalicylicAcid(540nm)2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品：可见分光光度计///96操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50目筛。二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至540nm，分光光度计蒸馏水调零。2、标准液的稀释：将10mg/mL葡萄糖标准液用试剂一稀释至0.4、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04mg/mL的葡萄糖标准溶液备用。3、标准液稀释表序号稀释前浓度（mg/mL）标准液体积（µL）试剂一体积（µL）稀释后浓度（mg/mL）110509500.520.5160400.430.5120800.340.5801200.250.5401600.160.5321680.0870.5241760.0680.5161840.04备注：实验中每个标准管需160µL标准溶液。4、加样表：试剂名称测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.020.02--试剂一（μL）-160-160试剂二（μL）160标准液（μL）--160-甲苯（μL）4444混匀，于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应1h后，煮沸10min左右（盖紧，以防止水分散失），流水或冰浴冷却后充分混匀（以保证浓度不变），10000rpm，常温离心10min，取上清待测。上清液（μL）140140140140试剂三（μL）6060606010min左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm处蒸馏水调零，记录各管AA测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A1-2次。三、S-NI活性计算1、标准曲线的绘制：根据葡萄糖标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。2、S-NI活性计算单位定义：37℃每g土壤每天产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。S-NI（U/g土样