细菌的生理重点

第二章细菌的生理细菌的生理活动包括摄取营养物质和合成各种所需物质，进行新陈代谢及生长繁殖。细菌具有独立的生命活动能力，处于适宜的环境条件下，可从外界环境中摄取营养物质，获得能量，具有代谢旺盛、繁殖迅速的特点。第一节细菌的理化性状I一、化学组成.与其他生物细胞相似，含有包括水、蛋白质、无机盐、糖类、脂类和核酸等多种化学成分。.水占75-90%，为主要成分。.去除水分后，主要为有机物，包括碳、氢、氮、氧、磷和硫。还有少量无机离子，包括钾、钠、铁、镁、钙、氯等，用以构成菌细胞的各种成分、维持酶的活性和跨膜化学梯度。.还含有一些原核细胞型微生物所特有的化学组成，如肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、二氨基庚二酸、吡啶二羧酸等二、物理性状.光学性质细菌为无色半透明小体，细菌悬液呈混浊状态。观察-染色法-相差显微镜。.表面积细菌体积微小，表面积相对较大，有利于细菌的内外物质交换。.带电现象细菌的固有成分50-80%是蛋白质，主要为兼性离子氨基酸组成。G+菌的等电点pH为2-3G-菌的等电点pH为4-5因此，在弱碱性或近中性环境中细菌均带负电荷，等电点越低带负电荷越多意义：细菌的带电现象与细菌的染色反应、凝集反应和抑菌杀菌作用有着密切关系。.半通透性意义：细菌为了利于内外物质交换，有利于营养物质的吸收和代谢产物的排出，其细胞壁和细胞膜都为半通透性.渗透压细菌体内由于含有高浓度的营养物质和无机盐，其渗透压极高。革兰阳性菌渗透压高达20-25个大气压，革兰阴性菌也有5-6个大气压。意义：细菌一般处于相对低渗的环境，有坚韧的细胞壁保护不致崩裂。细菌若处于高渗环境中，菌内水分逸出，胞质脱水浓缩，细菌就不能繁殖。一、细菌的营养物质.水：溶解营养物质，有利于营养物质的吸收与代谢。.碳源：主要来源于糖类，是合成菌体的糖类、脂类、蛋白质、核酸的成分，又是细菌的能量来源。.氮源：来源于氨基酸、蛋白质等，合成菌体成分。肺炎克雷伯菌可利用硝酸盐甚至氮气。.无机盐：常用元素（P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe、）和微量元素（钻、锌、锰、铜、钼）。作用：构成菌细胞的各种成分；维持酶活性；参与能量的贮存和转运；调节内外渗透压；与菌的生长繁殖与致病作用有关。.生长因子：自身不能合成的，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、喀啶等。特殊：流感嗜血杆菌-X因子、V因子等。二、细菌摄取营养物质的机制水和水溶性物质可通过具有半透膜性质的细胞壁和细胞膜进入细胞内，蛋白质、多糖等大分子营养物质需经细菌分泌的胞外酶的作用分解成小分子物质才能被吸收。.被动扩散方向：高浓度--低浓度动力：浓度梯度能量：不需要不需任何载体：简单扩散需要特异性载体蛋白：易化扩散，如甘油的转运.主动转运方向：低浓度--高浓度需要能量和载体（1）ABC转运：营养物质与特异性结合蛋白形成复合物后，引起后者构型改变，继而将营养物质转运给细胞膜上的ATP结合型载体，导致ATP水解，提供的能量打开膜孔，使营养物质进入细胞内。（2）离子偶联转运：质子动力或钠动力作为驱使营养物质跨膜转运的能量，载体是电化学离子梯度透性酶。常见于需氧菌。（3）基团转移：大肠埃希菌摄取葡萄糖（4）特异性转运：细菌分泌载体铁来摄取铁。三、细菌的营养类型.自养菌利用无机物的氧化（化能自养菌）或通过光合作用（光能自养菌）获得营养和能量。碳源：CO3、CO32-氮源：nh3、no2-、no3-.异养菌必须利用多种有机物（如蛋白质、糖类）为原料才能合成菌体成分。包括腐生菌和寄生菌所有的病原菌都是异养菌，大部分属于寄生菌。四、影响细菌生长的因素营养物质和适宜的环境.营养物质：碳源、氮源、水、无机离子.氢离子浓度（pH）嗜中性细菌：6.0-8.0嗜酸性细菌：低至3.0嗜碱性细菌：高达10.5多数病原菌7.2-7.6霍乱弧菌8.4-9.2结核杆菌6.5-6.8维持pH：质子泵、Na+/H+和K+/H+交换系统.温度：病原菌37℃嗜温菌：10-45℃最适20-40℃嗜热菌：25-95℃最适50-60℃嗜冷菌：-5-30℃最适10-20℃突然暴露于高温下，可暂时合成对热有抵抗力的热休克蛋白.气体（氧气、二氧化碳）专性需氧菌：结核分枝杆菌、铜绿假单胞菌微需氧菌：低氧压5-6%生长最好，大于10%对其有抑制作用。如空肠弯曲杆菌、幽门螺杆菌兼性厌氧菌：兼有需氧呼吸和无氧发酵功能，有氧和无氧均可生长，但有氧时生长较好。多数病原菌为兼性厌氧菌专性厌氧菌：缺乏呼吸酶，只能在低氧分压或无氧环境中进行发酵。在游离氧存在时，不但不能利用分子氧，且还将受其毒害，甚至死亡，如破伤风梭菌、脆弱拟杆菌特殊：人工培养需提供5-10%的CO2，如脑膜炎奈瑟菌、布鲁氏菌.渗透压一般培养基的盐浓度和渗透压即可，少数嗜盐菌需要高浓度30g/L（即3%）的NaCl环境中生长良好。五、细菌的生长繁殖（一）细菌个体的生长繁殖方式：以二分裂进行无性繁殖代时：一般为20-30min，但结核分枝杆菌（TB）代时长达18-20h（二）细菌群体的生长繁殖生长速度：以20min代时计算，一个菌细胞经7h可繁殖200万个，10h达10亿个，随着时间延长细菌群体将会庞大到难以想象的程度，但事实并非如此。生长曲线：培养时间-横坐标，活菌数的对数-纵坐标，分为四期。.迟缓期细菌进人新环境后有一个短暂适应阶段该期细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂繁殖合成积累充足的酶、能量及中间代谢产物；此期分裂迟缓，繁殖极少迟缓期因菌种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而长短不一，一般为1-4h.对数期又称指数期。细菌在该期生长迅速。活菌数以比较稳定的几何级数增长，生长曲线图上细菌数的对数呈直线上升，达顶峰状态。其细菌的形态、染色性、生理活性均较典型，对外界环境因素的作用敏感，因此，研究细菌的形态染色、生化反应、药物敏感试验等生物学性状，应选用该期的细菌。一般细菌对数期在培养后的第8-l8h.稳定期由于培养基中营养物质消耗、有害代谢产物积聚，该期细菌繁殖速度渐减，死亡数渐增，细菌增殖数与死亡数渐趋平衡细菌形态、染色性和生理性状常有改变。一些细菌的芽胞、外毒素和抗生素等代谢产物大多在稳定期产生。.衰亡期稳定期后细菌繁殖越来越慢，死亡菌数越来越多，活菌数越来越少。活菌数与培养时间成反比关系，该期细菌形态显著改变，出现衰退型或菌体自溶，难以辨认;生理代谢活动趋于停滞。因此陈旧培养的细菌难以鉴定。实际生产：在细菌培养过程中，不断地更新培养液及对需氧菌进行通气加氧，使细菌长时间处于生长旺盛的对数期，这种培养称为连续培养。细菌的新陈代谢是细菌细胞内分解代谢和合成代谢的总和。一、细菌的能量代谢.糖酵解5世）大部分细菌共有的基本代谢途径，1分子葡萄糖可生成2分子丙酮酸，产生2分子ATP和2分子NADH+H+。.戊糖磷酸途径由几糖生成戊糖的循环途径，为生物合成提供前体和还原能，获得 12分子NADH+H+。.需氧呼吸1分子葡萄糖在有氧条件下彻底氧化，生成CO2和H2O,并产生30mol或32molATP。过程：糖酵解-脱竣-三羧酸循环.厌氧呼吸1分子葡萄糖经厌氧糖酵解只能产生2分子ATP。二、细菌的代谢产物（一）分解代谢产物和细菌的生化反应各种细菌所具有的酶不完全相同，对营养物质的分解能力也不同，因而其代谢产物有别。鉴于此，可利用生物化学方法来鉴别不同细菌，成为细菌的生化反应试验。（糖）.糖酵解试验葡萄糖：分解--产酸、产气：大肠杆菌产酸、不产气：伤寒沙门菌乳糖：分解--产酸、产气：大肠杆菌不分解：伤寒沙门菌产酸：澳甲酚蓝指示剂由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5・2）。产气：倒置的德汉氏小管中有无气泡。.VP试验原理：细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性产物的能力。例如，产气肠杆菌（阳性，红色），大肠杆菌（阴性）.甲基红试验原理：某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖类先分解为丙酮酸，再将其分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH下降，可使甲基红指示剂由橘黄色（阴性）变为红色（阳性）。例如，大肠埃希菌（阳性），产气肠杆菌（阴性）（蛋白质）.吲哚试验原理：含有色氨酸酶的细菌可分解色氨酸，生产吲味，若加入吲噪试剂，则形成玫瑰吲噪，呈红色（阳性）。例如，大肠埃希氏菌、变形杆菌、霍乱弧菌等为阳性，而产气肠杆菌为阴性。.硫化氢试验原理：某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，与铅或铁离子生产黑色的硫化铅或硫化亚铁。例如，沙门菌、变形杆菌等为阳性。（其他）.枸檬酸盐利用试验原理：某些细菌能够利用铵盐作为唯一氮源，并利用枸椽酸盐作为唯一碳源，可在枸椽酸盐培养基上生长，分解枸椽酸盐，生成碳酸盐，并分解铵盐生成氨，使培养基变为碱性。例如，大肠杆菌（-），产气杆菌（+）.尿素酶试验原理：变形杆菌有尿素酶，可分解培养基中的尿素产生氨，使培养基变成碱性，以酚红指示剂检测呈红色，为阳性。吲哚（I）、甲基红（M）、VP（V）、枸橼酸盐利用（C）4种试验常用于鉴定肠道杆菌，合成IMiC试验。例如：大肠杆菌（++--）、产气杆菌（--++）（二）合成代谢产物及其医学上的意义.热原质概念：可引起人或动物发热反应的物质，多数G-菌的LPS。性质：耐高温，高压蒸汽灭菌不被破坏；需要250℃干烤、吸附剂或特殊石棉滤板、蒸馏法.毒素和侵袭性酶毒素：①内毒素G-菌LPS，菌体死亡崩解后游离出来。②外毒素多数G+菌和少数G-菌分泌产生释放到菌体外的蛋白质。侵袭性酶：损伤机体组织，促进细菌侵袭或扩散，如卵磷脂酶（产气荚膜梭菌）、透明质酸酶（链球菌）等。.色素水溶性：铜绿假单胞菌（绿色）脂溶性：金黄色葡萄球菌（黄色）.抗生素大多由放线菌和真菌产生，细菌产生的较少，只有多黏菌素、杆菌肽。.细菌素具有抗菌作用的蛋白质，仅对亲缘关系较近的细菌有抗菌作用。（作用范围狭窄），如大肠菌素。可用于细菌分型和流行病学调查。.维生素大肠埃希菌：B族维生素和维生素K

三、细菌的分泌系统（略）四、细菌的免疫系统限制修饰（RM）系统、流产（Abi）系统、毒素-抗毒素（TA）系统和CRISPR-Cas系统。一、培养细菌的方法.分离培养划线.纯培养 挑取单个菌落温度35-37℃，培养时间18-24h。二、培养基.分类①基础培养基（如肉汤、营养琼脂等）增菌培养基选择培养基+抑制剂（如SS增菌培养基选择培养基+抑制剂（如SS琼脂、含抗培养基）鉴别培养基厌氧培养基+指示剂（糖发酵管、三糖铁培养基、伊红-亚甲蓝培养基）（如庖肉培养基、硫乙醇酸盐肉汤，最后加凡士林或液体石蜡以隔绝空气）鉴别培养基厌氧培养基.物理性状①液体大量繁殖②固体15g/L琼脂粉细菌的分离与纯化（固体斜面、平板）③半固体3-5g/L琼脂粉观察细菌的动力和短期保存三、细菌在培养基中的生长情况.液体培养基①大多数呈均匀混浊状态②少数链状的细菌呈沉淀生长③专性需氧菌如结核分枝杆菌、枯草芽抱杆菌呈表面生长，形成菌膜.半固体培养基①有鞭毛细菌呈羽毛状或云雾状混浊生长②无鞭毛细菌沿穿刺线生长，呈明显的线状生长.固体培养基形成菌落①光滑型（S型菌落）②粗糙型（R型菌落）③黏液型（M型菌落）四、人工培养细菌的用途1.医学感染性疾病的病原学诊断细菌学的研究生物制品的制备.工农业生产①生产各种产品②酶制剂③废水和垃圾处理④制造菌肥和农药.基因工程表达重组DNA制备产品，如胰岛素、干扰素、乙型肝炎疫苗等、消毒灭菌的常用术语1.灭菌2.消毒3.防腐.清洁10.无菌和无菌操作二、物理消毒灭菌法.热力灭菌法①干热灭菌焚烧：最彻底烧灼：直接火焰干烤：171℃1h或160℃2h或121℃16h红外线：热效应②湿热灭菌巴氏消毒法：酒类、乳类，61.1-62.8℃30min或71.7℃15-30S煮沸消毒法：100℃5-10min，芽抱需要1-2h流动蒸汽消毒法：100℃15-30min，如蒸笼间歇蒸汽灭菌法：100℃15-30min，37℃过夜，重复3次。高压蒸汽灭菌法：121.3℃，15-30min，灭菌效果最好.辐射杀菌法①紫外线②电离辐射③微波.过滤除菌法①滤菌器：孔径＜0.22um②生物洁净技术：生物洁净室.干燥与低温抑菌法冷冻真空干燥法：在低温下真空抽去水分，用于保存菌种。三、化学消毒灭菌法.含氯消毒剂.过氧乙酸.过氧化氢.戊二醛.乙醇.碘酊.碘伏.苯扎澳铵.氯已定.高锰酸钾四、消毒灭菌的运用.医疗器械物品的消毒灭菌.室内空气消毒灭菌.手和皮肤的消毒.黏膜的消毒.病人排泄物与分泌物的消毒灭菌.病人污染物品的消毒.饮水的消毒.环境的消毒五、影响消毒灭菌效果的因素（略）一、细菌的分类原则与层次.表型分类以细节的形态与生理特征为依据.分析分类应用电泳、质谱、色谱等对菌体组分、代谢产物组成与图谱等特征进行分析.基因型分析细节的遗传物质，揭示细菌进化的信息，是最精确的分类方法。《伯杰氏系统细菌学手册》（1984年）和《伯杰氏鉴定细菌学手册》第9版（1994年）是国际上最具权威性的细菌分类系统专著。最新出版的《伯杰氏鉴定细菌学12手册》（2004年）将原核生