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DNA重组技术的基本工具武陟一中谢则华烟草

中国卫生部通报：2004年７月，狂犬病列法定报告传染病死亡数之首。发病死亡率近100%

能产生狂犬病抗体蛋白的转基因每100kg猪或牛的胰腺中仅可提取4~5g。1979年，美国将人的胰岛素基因重组到大肠杆菌内，实现了细菌生产胰岛素，大大降低了生产成本，提高了胰岛素的供应量。治疗糖尿病特效药——据WTO调查：2005年全世界约有糖尿病患者1.8亿人，我国约6000万。胰岛素基因工程的产物定向基因改造设想

设想一能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？能否让细菌“吐出”蚕丝？设想二能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？设想三基因工程的概念DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的新生物类型和产品剪切→拼接→导入→表达

转基因技术实现了一种生物的某些性状在另一种生物中表达。普通棉花抗虫棉问题探讨：苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。

想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌毒蛋白关键步骤：一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来二：抗虫基因与载体DNA、棉花DNA“缝合”三：抗虫基因进入棉花细胞上述关键步骤需要哪些工具？一：“分子手术刀”——限制性核酸内切酶二：“分子缝合针”——DNA连接酶三：“分子运输车”——基因进入受体细胞的

载体一、限制性性核酸内切切酶——““分子手术术刀”1主要来源：：原核生物2种类与命名名：现在已经从约约300种微微生物中分离离出了约4000种限制制性内切酶(限制酶)。。粘质沙雷氏杆杆菌（Serratiamarcesens）SmaⅠ大肠杆菌（EscherichiacoliR）EcoRⅠ3作用特点：识别特定核苷酸序序列,切断磷酸二酯键具有特异性。一种限制酶只能识别一种种特定的核苷酸序列，，并且能在特特定的切点上上切割DNA分子T磷酸二酯键1234512345AGoback限制酶的识别别序列：Goback限制酶所识别别的序列，无无论是6个碱碱基还是4个个碱基，都可可以找到一条条中心轴线（如图），中中轴线两侧的的双链DNA上的碱基是是反向、对称、、重复排列的。想一想限制酶酶所识别的序序列有什么特特点？5.作用结果：产生黏性末端端或平末端SmaⅠ平末端平平末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端GobackEcoRⅠ黏性末端黏性末端Goback重复演示二、“分子缝缝合针”———DNA连接酶①作用:把切下来的DNA片段拼拼接成新的DNA，即将将脱氧核糖和磷磷酸连接起来.②作用原理：：催化磷酸二酯酯键形成可把黏性末端端之间的缝隙“缝合””起来，E·coliDNA连连接酶或或T4DNA连接酶酶即恢复被限制酶酶切开的两个个核苷酸之间间的磷酸二酯酯键T4DNA连接酶酶还可把平末端之间的的缝隙“缝合合”起来，但效率率较低T4DNA连接酶酶常用的载体：：质粒能复制并带着着插入的目的的基因一起复复制有切割位点有标记基因的的存在，可用用含氨苄青霉霉素的培养

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