GMP质量体系胭脂红检验操作规程

胭脂红检验标准操作规程颁发部门：质量管理部编号：SOP-QC/F-074-00页数：1/6制定人审核人QA审阅批准人分发部门：检验室年月日年月日年月日年月日生效日期年月日引用标准：1994年版《中国强制性国家标准汇编》食品卷P396（GB4480-88）。规程：1[性状]本品为红色至深红色粉末。2鉴别2.10.1g溶于100ml水中，呈红色澄清溶液；样品微溶于乙醇，不溶于油脂，具有酸性染料的特性，能使动物纤维染色。2.2在100ml0.02M乙酸铵溶液中，含有0.001g样品的溶液，其最大吸收波长为508±2nm.2.3取样品水溶液做纸上层析，其主色点的Rf值，应与标准样品相同。纸上层析条件：展开剂：正丁醇：无水乙醇：氨水（1%）=6：2：3温度20~25℃试液浓度0.1g/100ml试液用量2μl展开剂前沿上升限度150mm3胭脂红含量的测定3.1三氯化钛0.1N标准溶液的配制：取三氯化钛溶液100ml和浓盐酸75ml，置于1000ml棕色容量瓶中，用新煮沸过并已冷却到室温的蒸馏水稀释至刻度，摇匀，立即倒入避光的下口瓶中，在二氧化碳气体保护下贮藏。3.2三氯化钛标准溶液的标定：称取硫酸亚铁铵3g，置于500ml锥形瓶中，在二氧化碳气流保护作用下，加入新煮沸并已冷却的水50ml使其溶解，再加入10N硫酸25ml，继续在液面下通入二氧化碳气流作保护，迅速准确加入0.1N重铬酸钾标准溶液40ml，然后用需标定的三氯化钛标准溶液滴定到接近计算量终点，立即加入20%硫氰酸铵溶液25ml，并继续用需标定的三氯化钛标准液滴定到红色转变为绿色，即为终点，整个滴定过程，均应在二氧广州东康药业有限公司题目胭脂红检验标准操作规程编号SOP-QC/F-074-00页数2/6化碳气流保护下操作，同时以40ml水代替重铬酸钾溶液以相同方法做一空白试验。计算三氯化钛当量浓度（N）按下式计算：V1×N1N=V2-V3式中：V1——重铬酸钾标准溶液体积，V2——滴定重铬酸钾标准溶液用去三氯化钛溶液的体积，V3——滴定空白用去三氯化钛溶液的体积，N1——重铬酸标准溶液的当量浓度。3.3测定方法：称取样品约4g（准确至0.0002g）溶于新煮沸并已冷却到室温的水中，移入500ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，吸取50ml，置于500ml锥形瓶中，加入柠檬酸三钠15g，水150ml，在液面下通入二氧化碳气流的同时加热至沸，并用三氯化钛标准溶液滴定到无色为终点。胭脂红百分含量（X1）按下式计算V×M×0.1511X1=×100m×50/500式中：V——滴定样品用去三氯化钛标准溶液的体积，mlM——三氯化钛标准溶液的克分子浓度；0.1511——相当于每毫升1M三氯化钛标准溶液的胭脂红的克数；m——样品重量，g二次平行测定结果之差不大于1%，取其算术平均值作为测定结果。4挥发物的测定仪器：称量瓶、烘箱4.1操作步骤：称取样品约2g（准确至0.001g）置于已恒重的φ30～40nm的称量瓶中，在135℃恒温烘箱中烘至恒重。4.2挥发物百分含量（X3）按下式计算广州东康药业有限公司题目胭脂红检验标准操作规程编号SOP-QC/F-074-00页数3/6m1-m2X2=×100m1式中：m1——样品未干燥前的重量，gm2——样品干燥至恒重后的重量，g二次平行测定结果之差不大于0.2%，其算术平均值作为测定结果。5水不溶物的测定仪器：烧杯、G4玻璃坩埚、烘箱操作步骤；称取样品约3g（准确至0.001g）置于500ml烧杯中，加入50~60℃水250ml使之溶解，用已在135℃烘至恒重的G4玻璃坩埚过滤，用热水充分洗涤到洗液无色，在135℃恒温烘箱中烘至恒重。水不溶物百分含量（X4）按下式计算m4X4=×100m3式中：m4——干燥后水不溶物重量，gm3——样品重量，g二次平行测定结果之差不大于0.05%,取其算术平均值作为测定结果.7异丙醚萃取物的测定试液：异丙醚、10%氢氧化钠溶液、0.5%氢氧化钠溶液、0.5%盐酸溶液仪器：分液漏斗、磨口锥形瓶、烘箱异丙醚的预处理:取异丙醚500ml,置于1000ml分液漏斗中,每次用2%氢氧化钠溶液50ml洗涤二次,每次用水50ml再洗涤三次。7.2异丙醚的检验：吸取0.1M硫酸亚铁溶液和0.1M硫氰酸铵溶液各25ml，置于250ml分液漏斗中，混和后如溶液呈红色，则小心地滴入0.1M三氯化钛溶液至红色恰好消失，然后加入已处理过的异丙醚10ml，剧烈摇动数分钟，混合液应无红色出现。7.3操作步骤：称取样品约2g（准确至0.01g）用水100ml溶解后，移入500ml分液漏斗中，加异丙醚40ml，摇动1min；静置分层，分出染料水层，置于另一分液漏斗中，留存的异丙醚，每次用水25ml洗涤二次，弃去洗液，将醚液通过脱脂棉，直接滤入已知重量的150ml磨口锥形瓶中，第一次分出的染料溶液加入10%氢氧化钠溶液2ml，用异丙醚40ml同上法进行第二次萃取，醚液用0.5%氢氧化钠溶液25ml洗涤一次，每次用水25ml再洗涤二次，广州东康药业有限公司题目胭脂红检验标准操作规程编号SOP-QC/F-074-00页数4/6弃去洗液，将醚液通过脱脂棉滤入同一锥形瓶中，第二次分出的染料水溶液，加入10%盐酸溶液5ml，用异丙醚液40ml进行第三次萃取，醚液用0.5%盐酸溶液25ml洗涤一次，再每次用水25ml再洗涤二次，合并三次醚液，在80～85℃水浴中蒸去异丙醚，然后将锥形瓶置于温度为80～85℃的烘箱中，烘至恒重。同时以100ml水代替染料溶液以相同方法做一空白试验。7.4异丙醚萃取物的百分含量（X5）按下式计算m6-m7X5=×100m5式中：m6——干燥后样品残渣重量，g；m7——干燥后空白残渣重量，g；m5-----样品重量，g；二次平行测定结果之差不大于0.05%，取算术平均值作为测定结果。8副染料的测定：试液：丙酮溶液、0.05N碳酸氢钠溶液仪器：烧杯、容量瓶、吹风机、滤纸、纳氏比色管、紫外分光光度计操作步骤：称取样品1g（准确至0.01g）置于烧杯中，加入适量水溶解后，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用微量进样器吸取100μl，很均匀地点在离滤纸底边25mm的一条基线上，成一直线，染料溶液在滤纸上的宽度不超过5mm，长度130mm，用吹风吹干，将滤纸放入标本缸展开，滤纸底边浸入展开剂液面下10mm，待展开剂前沿线上升至150mm或直到染料分离满意为止，取出，用吹风机以冷风吹干。同时用空白滤纸在相同条件展开（该空白滤纸必须和样品溶液展开用的滤纸，在同一张600mm×600mm的滤纸上相邻部位裁取）。将副染料和空白滤纸上与副染料相对应的部位的滤纸，按同样大小剪下，并剪成约5mm×15mm的细条，分别置于50ml的纳氏比色管中，各准确加入1：1丙酮溶液5ml，摇动3～5min后，再准确加入0.05M碳酸氢钠溶液20ml充分摇动，将萃取液分别在G3过滤漏斗中自然过滤，滤液必须澄清，无悬浮物，在各自副染料的最大吸收波长处，用5cm比色皿在分光光度计上测吸光度。以1：1丙酮溶液5ml和0.05M碳酸氢钠溶液20ml混合作参比液。广州东康药业有限公司题目胭脂红检验标准操作规程编号SOP-QC/F-074-00页数5/6副染料（1）的最大吸收波长为505nm，其20~25℃时的平均Rf值为0.60。副染料（2）的最大吸收波长为486nm，其20~25℃时的平均Rf值为0.40。副染料（3）的最大吸收波长为520nm，其20~25℃时的平均Rf值为0.16。副染料（4）的最大吸收波长为515nm，其20~25℃时的平均Rf值为0.04。副染料百分含量(X6)按下式计算：X6=10.3(A1-b1)+13.5(A2-b2)+11.5(A3-b3)+13.4(A4-b4)式中：10.3----副染料(1)折算成百分率的换算因数;13.5----副染料(2)折算成百分率的换算因数;11.5----副染料(3)折算成百分率的换算因数;13.4----副染料(4)折算成百分率的换算因数;A1-----副染料(1)的吸光度;A2-----副染料(2)的吸光度;A3-----副染料(3)的吸光度;A4-----副染料(4)的吸光度;b1-----副染料(1)对照空白的吸光度;b2-----副染料(2)对照空白的吸光度;b3-----副染料(3)对照空白的吸光度;b4-----副染料(4)对照空白的吸光度.9砷含量的测定试液：硝酸、硫酸、高氯酸、盐酸、20%碘化钾溶液、40%氯化亚锡溶液、乙酸铅棉花、溴化汞试纸仪器：烧瓶、锥形瓶、操作步骤：称取样品1g(准确到0.01g)置于250ml烧瓶中，加硝酸1.5ml和1：1硫酸5ml，用小火加热赶出二氧化氮气体，待溶液变成棕色，停止加热，放冷后加入硝酸-高氯酸混合液2ml，强火加热至溶液呈透明无色或微黄色，如仍不透明，放冷后再加入硝酸-高氯酸混合液1ml，继续加热至溶液澄清无色或微黄色并产生白烟，停止加热，放冷后加水5ml加热至沸，除去残余的硝酸-高氯酸(必要是可再加水煮沸一次)继续加热至发生白烟，广州东康药业有限公司题目胭脂红检验标准操作规程编号SOP-QC/F-074-00页数6/6保持10min，放冷后移入100ml锥形瓶中，用水30ml分次洗涤烧瓶，洗液一并倒入锥形瓶中，加盐酸4ml，20%碘化钾溶液4ml及40%氯化亚锡溶液5滴，摇匀，放置10min，加无砷金属锌粒2g，迅速将装有酸铅棉花及溴化汞试纸的玻璃管装上，在25~30℃暗处放置1h，溴化汞试纸所显颜色不得深于标准。同时以相同方法做一空白试验。标准管制备：将上述空白试液加入砷标准溶液1ml后，与样品管同时同样处理。10重金属的测定试液：20%乙酸溶液、1：2氨水、10%氰化钾溶液、无色硫化钠溶液、仪器：坩埚、高温电炉、纳氏比色管、操作步骤：称取样品2g（准确至0.01g），置于坩埚中，先在低温下炭化，然后在500～550℃灰化，放冷后，在灰分中加20%乙酸溶液5ml，搅拌使之溶解，加水10ml，稀释后用定性滤纸直接过滤在50ml纳氏比色管中，并用水15ml分次洗涤残渣，滤液用1：2氨水调节至pH8