鸡胚流感疫苗的制备课件

项目7

鸡胚流感疫苗的制备

解决的问题：我们为什么要制备鸡胚流感疫苗？我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？我们怎么制备鸡胚流感疫苗？我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格,可以应用于临床？还有什么其他相关知识需要拓展?项目7鸡胚流感疫苗的制备解决的问题：问题一我们为什么要制备鸡胚流感疫苗

？问题一项目7—鸡胚流感疫苗的制备接收到工作任务

你所在的工作组是生物制品公司的一个研发助理或生产一线员工，你们接到的任务就是在12月20日要研发或生产一种鸡胚流感疫苗，并需要协助质量管理部门,确保制备的疫苗是合格品,可应用于临床。项目7—鸡胚流感疫苗的制备接收到工作任务你所在的工项目背景甲型h1n1流感疫苗

[主要应用]专门用于预防甲型H1N1流感病毒（此前也曾被称为猪流感）的疫苗。

[主要操作]单批疫苗生产需经历病毒接

/view/779714.htm、病毒培养、病毒灭活、纯化、裂解、配比、分包装及批签发等步骤。

[主要剂型]

鼻腔喷雾剂、肌肉注射剂

项目7—鸡胚流感疫苗的制备项目背景甲型h1n1流感疫苗项目7—鸡胚流感疫苗的制备病毒性疫苗基本概念定义：用病毒制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应病毒能力的生物制品，称为病毒类疫苗。项目7—鸡胚流感疫苗的制备培养的组织来源和制造方法动物培养疫苗基因重组疫苗鸡胚培养疫苗细胞培养疫苗理化性质灭活与减毒活疫苗液体与冻干全病毒、裂解、亚单位

佐剂与无佐剂疫苗用途狂犬疫苗流行性感冒疫苗脊髓灰质炎疫苗乙肝疫苗病毒性疫苗基本概念定义：项目7—鸡胚流感疫苗的制备培养的问题二我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？问题二设备和材料菌种

培养基项目7—鸡胚流感疫苗的制备器具设备和材料菌种培养基项目7—鸡胚流感疫苗的制备器问题三我们怎么制备鸡胚流感疫苗

？问题三①鸡胚接收前处理打开孵化机设定温度37.8℃，湿度为70%。第一步鸡胚的接收②拆盘观察鸡胚是否干净，有无裂痕，把合格的摆放到空盘上，气室向上。③照检在照检灯下，将照蛋器罩压在鸡胚气室上，沿气室边缘画弧线。项目7—鸡胚流感疫苗的制备④消毒浸泡消毒槽内1-2min，捞出放在桌子上。再由消毒人员摆放到蛋车上，推入37.8℃的孵化器中。①鸡胚接收前处理第一步鸡胚的接收②拆盘③照检项目7—鸡胚①鸡胚的消毒将10日龄合格胚从孵化器中运到层流罩的入蛋口前，用除菌的0.1%新洁尔灭均匀喷洒消毒后，用5%碘酒消毒鸡蛋的接种点，接种点在划线上方0.1至0.2处。消毒后转入层流罩交给打孔人员。第二步鸡胚的接种②打孔用打孔器在每个鸡胚接种点处打一个小孔，以可以看清楚为准，打孔的顺序为由上到下，由左到右，打孔时力度要适中，如有打破将其放在事先准备好的空盘上。项目7—鸡胚流感疫苗的制备③接种将连续流注射器的针头垂直插向已打好的接种孔内（即鸡胚尿囊内）。①鸡胚的消毒第二步鸡胚的接种②打孔项目7—鸡胚流感疫苗的第二步鸡胚的接种项目7—鸡胚流感疫苗的制备

接种后将卵壳外的钻孔用石蜡封好，置于37.8℃孵化器内孵化。第二步鸡胚的接种项目7—鸡胚流感疫苗的制备接①处理立瓶安装时把5升立瓶口包装纸松开，打开管道灭菌袋，取出管道，一手拿管道，一手掀开5升立瓶包装纸，把管道放进立瓶中按紧塞子。第三步鸡胚液的收获②灭菌用0.1%新洁尔灭均匀喷洒鸡胚表面,再用75%酒精喷洒表面，由入蛋口交给层流罩内负责削壳人员。项目7—鸡胚流感疫苗的制备③削壳用大镊子上部三分之一处敲击鸡胚壳气室部位。沿气室边缘敲出一道长缝后，用镊子尖沿气室边缘剥开，注意不要将气室弄破，剥下的蛋壳让其掉入大平皿中。①处理立瓶第三步鸡胚液的收获②灭菌项目7—鸡胚流感疫苗的④收获第一步，连接管道：取一单根管道的进气口，一端连接真空泵，另一端连接空气过滤滤器，空气过滤滤器的另一端连接管道的进气口，用止血钳卡住出液口，打开收获头处的包装，开始收获。第三步鸡胚液的收获

第二步，收获：先握住小镊子插进尿囊腔中，松开小镊子把尿囊膜划开一个小口，把收获头插进去吸干尿囊液。项目7—鸡胚流感疫苗的制备

第三步，收获的顺序是由下到上、由左到右逐一收取，收到3.6L刻度后换取另一瓶，安装同上④收获第三步鸡胚液的收获第二步，收获：先握住小镊子插①物品处理将连有硅胶管道的传液盖、滤器、止血钳、西林瓶、西林瓶塞、蠕动泵、电子天平，所需灭活剂等放入层流罩内。第四步鸡胚收获液的灭活②灭活将连有硅胶管道的传液盖安装在盛灭活剂的桶上，盛1M柠檬酸三钠溶液的桶与蠕动泵连接，桶放在电子天平上。盛1：200福尔马林溶液的桶与计量泵连接，用量筒进行校准泵的速度调节为280ml左右/分钟。项目7—鸡胚流感疫苗的制备第五步无菌分装观看Flash①物品处理第四步鸡胚收获液的灭活②灭活项目7—鸡胚流感疫问题四我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格,可以应用于临床？问题四质量检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备疫苗的安全性疫苗的有效性质量检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备疫苗的安全性疫苗的有问题五还有什么其他相关知识需要拓展?问题五拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片项目7—鸡胚流感疫苗的制备鼠疫杆菌霍乱弧菌炭疽杆菌拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片项目7—鸡胚流感疫苗的制备拓展知识一、细菌性疫苗项目8—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程及环境区域划分质量控制要点生产管理要点其他疫苗举例项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目7—鸡胚流感疫苗的制备拓展知识一、细菌性疫苗项目8—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程（一）工艺流程及环境区域划分

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级返回包装项目7—鸡胚流感疫苗的制备（一）工艺流程及环境区域划分菌种筛选*种子批的建（二）质量控制要点------工序A

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序A：菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序A菌种筛选*种参照书上26页图3-1

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序B：项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B参照书上26页图3-1菌种筛选*种子批的建立和检工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。（2）种子批制度建立：（传代、扩增）（传代、扩增）原始种子批￫主代种子批￫工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。

（3）种子批检定：培养特性、血清学特征、毒力试验、免疫力试验、抗原性试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序C：微生物鉴别，包括菌型、纯度及其他特殊鉴别试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序C菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序D：微生物纯度检查，浓度检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序D菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序E：微生物纯度检查项目8—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序F：无菌试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序F菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序G：原液检查，包括镜检查杂菌、效价或活性测定、无菌试验、浓度测定、免疫力试验。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序G菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序H：原液保存在2-8℃。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序H菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序I：半成品及成品的坚定按有关标准进行

。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序I返回菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种（1）符合现行的《中华人民共和国药典》、《中国生物制品主要原辅材料质量标准》（2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。（3）对供应商要有审查请问：对原料药的供应商我们要审查什么？对提供直接接触药品的包装材料的供应商我们要审查什么？对提供包装材料印刷的供应商我们要审查什么？

项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点-----原料及辅料（1）符合现行的《中华人民共和国药典》、《中国生物制品主要应严格清洗，经高压灭菌方可使用。桌式高压灭菌锅全自动蒸汽高压灭菌锅

项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点-----生产用器具应严格清洗，经高压灭菌方可使用。项目7—鸡胚流感疫苗的制备问题:生产及检定用的动物应符合：

级？

答：清洁级问题：请回忆清洁级动物的定义和简写？项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点—生产及检定用动物问题:答：清洁级问题：请回忆清洁级动物的定义和简写？项目7（1）疫苗的菌株应具有典型的形态、培养和生化特性。（2）菌株的培养和接种要在专门的设备中进行，严格操作和防止污染。（3）冷干菌种在开启时，应作全面鉴定。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---制造疫苗的菌株（1）疫苗的菌株应具有典型的形态、培养和生化特性。项目7—鸡生产用的培养基应适合所培养细菌的生长，严禁在培养基中添加对人体有害的物质。项目8—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---生产用培养基项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---生产用培养基生产用的培养基应适合所培养细菌的生长，严禁在培养基中添加对人（1）收集的原液应作纯菌试验，合格后杀灭细菌，杀菌后通过试验检验是否有杂菌生长。试验如下：取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各一管，至37℃培养5天，如有活菌，可加倍量复试一次，如有杂菌生长应废弃。（2）无菌试验合格的合并原液添加防腐剂为：适量苯酚或其他防腐剂储存温度：2-8℃

储存时间：采集之日至用于疫苗稀释不得少于4个月。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点-----原液返回（1）收集的原液应作纯菌试验，合格后杀灭细菌，杀菌后通过试验1、简介：流行性脑脊髓膜炎：分为A、B、C三种流脑，A群流脑为我国主要致病菌群，B、C群流脑为欧美主要致病菌群。A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗 主要预防：A群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗1、简介：（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗2、历史：1944年Kabat开始用流脑多糖抗原进行志愿者试验。1969年Gotschlich提取流脑A群多糖抗原接种人群免疫力可达数年。1967年开始研究------197年我国制备出符合WHO的A群流脑多糖疫苗，一次注射反应轻微，免疫效果良好，流行病学效果达90%以上。（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗2、历史：（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗流脑疫苗生产用菌株启开菌种、扩大培养Co2罐培养18-20h转种于50000ml发酵罐，同期培养3-4h种入500000ml发酵罐、通气培养6-8h培养物用甲醛或加热杀菌，上清加入Cetavlom，离心去上清，收集沉淀复合物加等量2mol/LCaCl2，使多糖解离加25%乙醇，提取多糖抗原原液用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，收集沉淀多糖用冷酚提取2-3次，透析，再用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，进行多糖精制加入乳糖作保护剂，冷冻干燥，使每人份含多糖抗原30µg、乳糖2.5mg（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗返回（四）细菌疫苗举例—A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗（四）细菌疫苗拓展知识二、病毒性疫苗项目7—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程及环境区域划分质量控制要点生产管理要点其他疫苗举例拓展知识二、病毒性疫苗项目7—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级（一）工艺流程及环境区域划分项目7—鸡胚流感疫苗的制备返回原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序A：菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序A原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序B：项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B原代细胞的制工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。（2）种子批制度建立：（传代、扩增）（传代、扩增）原始种子批￫主代种子批￫工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。

（3）种子批检定：培养特性、鉴别试验、毒力试验、免疫力试验、病毒滴度、病毒外源因子检测、无菌试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序C：病毒鉴定、包括细胞病变、滴度及其他特殊鉴别试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序C原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序D：细胞的来源、历史明确，细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序D原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序E：细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序F：病毒纯度检查，病毒滴度测定、无菌试验。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序F原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序G：病毒原液检查，包括：病毒滴度测定、无菌试验。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序G原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序H：原液保存在-20℃。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E原代细胞的制

原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*

AB筛选细胞C

（灭活疫苗）

病毒原液病毒灭活病毒的收获过滤#

（减毒活疫苗）

GFE半成品配制#分装#I扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序I：半成品及成品的鉴定按有关标准进行。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序I返回原代细胞的制（1）符合现行的《中华人民共和国药典》、《中国生物制品主要原辅材料质量标准》（2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。（3）对供应商要有审查

项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---原料与辅料（1）符合现行的《中华人民共和国药典》、《中国生物制品主要生产及检定用的动物应符合：清洁级

小鼠、豚鼠、鸡胚等

项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---生产及检定用动物生产及检定用的动物应符合：清洁级项目7—鸡胚流感疫苗的制备细胞株：生产用的细胞株应在一定的代次之内，据有明显的该细胞生物学特性，无污染。毒种：生产用的毒种经过生物学鉴定应无外源因子污染。毒种的接种和培养应在专门的设备内进行，有些在国家认可的P2、P3病毒储存：冻干病毒保存在-20℃，液体病毒保存在-60℃以下。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---生产用细胞株和毒株细胞株：生产用的细胞株应在一定的代次之内，据有明显的该细胞生疫菌产品中的灭活剂和小牛血清含量应严格控制。如：流感疫苗，病毒灭活剂包括甲醛和一种汞

的衍生物制成的消毒剂，而汞对儿童和胎儿的神经系统会造成不可逆的损害，因此12岁以下儿童不能使用全病毒灭活疫苗。

项目7—鸡胚流感疫苗的制备（三）生产管理要点---生产用灭火剂返回疫菌产品中的灭活剂和小牛血清含量应严格控制。项目7—鸡胚流感主持人：田院士，刚才您谈到多肽它既有治疗作用，又有预防作用。其实谈到预防作用的话，可能很多的观众非常关注SARS疫苗的研制情况。我听说现在国内一些科研人员，正在通过灭活和基因重组两种方式研制相关的SARS疫苗，并听说国内在灭活疫苗方面取得了一些突破，你能不能给我们介绍一下情况。

赵铠：灭活疫苗研制，到目前为止我知道的这个SARS病毒已经能够在细胞上大量培养了，可以收获到很多病毒，这也是一个成绩。第二个，用一些化学药物已经证明可以把这个病毒杀死，不但杀死，而且保留了它的抗原性，可以产生抗体，这个已经通过实验证明了，比如说灭活的病毒在细胞上再培养，再给它传代，没有差错，获得病毒。同时把灭活的病毒已经注入了猴子，猴子没有引起SARS病症，同时产生了抗体，所以灭活疫苗研制现在到了这个阶段（四）细菌疫苗举例—SARS灭活疫苗主持人：田院士，刚才您谈到多肽它既有治疗作用，又有预防作用。主持人：何博士，请问你们在SARS疫苗研制的最新进展如何？

美国艾伦·戴蒙德艾滋病研究中心主任何大一：4月中旬以来，我们在SARS方面的工作不断取得进展，我们的主要工作就是推进疫苗的研制，有很多同事正在努力研制若干种疫苗，现在我们已经合成了一种蛋白质，它可以附着在SARS病毒的外面。而且我们已经开始在动物身上做试验了，此外我们还要研制出几种新的SARS疫苗。如你所知，我们合成了短肽，它是一种蛋白质因子，本身存在于SARS病毒的特定部位，如果你把这种短肽置入(病毒)样剂中，它就会对SARS病毒产生作用并抑制它的发展，当然目前短肽还处在试验阶段，我们正在设法将它转移到某种动物身上，比如猴子。我们知道猴子可以被SARS病毒感染，我们将与中国医学科学院合作，用短肽治疗感染SARS病毒的猴子，当然这是下一步的工作。

（四）细菌疫苗举例—SARS基因工程疫苗主持人：何博士，请问你们在SARS疫苗研制的最新进展如何？

项目7

鸡胚流感疫苗的制备

解决的问题：我们为什么要制备鸡胚流感疫苗？我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？我们怎么制备鸡胚流感疫苗？我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格,可以应用于临床？还有什么其他相关知识需要拓展?项目7鸡胚流感疫苗的制备解决的问题：问题一我们为什么要制备鸡胚流感疫苗

？问题一项目7—鸡胚流感疫苗的制备接收到工作任务

你所在的工作组是生物制品公司的一个研发助理或生产一线员工，你们接到的任务就是在12月20日要研发或生产一种鸡胚流感疫苗，并需要协助质量管理部门,确保制备的疫苗是合格品,可应用于临床。项目7—鸡胚流感疫苗的制备接收到工作任务你所在的工项目背景甲型h1n1流感疫苗

[主要应用]专门用于预防甲型H1N1流感病毒（此前也曾被称为猪流感）的疫苗。

[主要操作]单批疫苗生产需经历病毒接

/view/779714.htm、病毒培养、病毒灭活、纯化、裂解、配比、分包装及批签发等步骤。

[主要剂型]

鼻腔喷雾剂、肌肉注射剂

项目7—鸡胚流感疫苗的制备项目背景甲型h1n1流感疫苗项目7—鸡胚流感疫苗的制备病毒性疫苗基本概念定义：用病毒制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应病毒能力的生物制品，称为病毒类疫苗。项目7—鸡胚流感疫苗的制备培养的组织来源和制造方法动物培养疫苗基因重组疫苗鸡胚培养疫苗细胞培养疫苗理化性质灭活与减毒活疫苗液体与冻干全病毒、裂解、亚单位

佐剂与无佐剂疫苗用途狂犬疫苗流行性感冒疫苗脊髓灰质炎疫苗乙肝疫苗病毒性疫苗基本概念定义：项目7—鸡胚流感疫苗的制备培养的问题二我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？问题二设备和材料菌种

培养基项目7—鸡胚流感疫苗的制备器具设备和材料菌种培养基项目7—鸡胚流感疫苗的制备器问题三我们怎么制备鸡胚流感疫苗

？问题三①鸡胚接收前处理打开孵化机设定温度37.8℃，湿度为70%。第一步鸡胚的接收②拆盘观察鸡胚是否干净，有无裂痕，把合格的摆放到空盘上，气室向上。③照检在照检灯下，将照蛋器罩压在鸡胚气室上，沿气室边缘画弧线。项目7—鸡胚流感疫苗的制备④消毒浸泡消毒槽内1-2min，捞出放在桌子上。再由消毒人员摆放到蛋车上，推入37.8℃的孵化器中。①鸡胚接收前处理第一步鸡胚的接收②拆盘③照检项目7—鸡胚①鸡胚的消毒将10日龄合格胚从孵化器中运到层流罩的入蛋口前，用除菌的0.1%新洁尔灭均匀喷洒消毒后，用5%碘酒消毒鸡蛋的接种点，接种点在划线上方0.1至0.2处。消毒后转入层流罩交给打孔人员。第二步鸡胚的接种②打孔用打孔器在每个鸡胚接种点处打一个小孔，以可以看清楚为准，打孔的顺序为由上到下，由左到右，打孔时力度要适中，如有打破将其放在事先准备好的空盘上。项目7—鸡胚流感疫苗的制备③接种将连续流注射器的针头垂直插向已打好的接种孔内（即鸡胚尿囊内）。①鸡胚的消毒第二步鸡胚的接种②打孔项目7—鸡胚流感疫苗的第二步鸡胚的接种项目7—鸡胚流感疫苗的制备

接种后将卵壳外的钻孔用石蜡封好，置于37.8℃孵化器内孵化。第二步鸡胚的接种项目7—鸡胚流感疫苗的制备接①处理立瓶安装时把5升立瓶口包装纸松开，打开管道灭菌袋，取出管道，一手拿管道，一手掀开5升立瓶包装纸，把管道放进立瓶中按紧塞子。第三步鸡胚液的收获②灭菌用0.1%新洁尔灭均匀喷洒鸡胚表面,再用75%酒精喷洒表面，由入蛋口交给层流罩内负责削壳人员。项目7—鸡胚流感疫苗的制备③削壳用大镊子上部三分之一处敲击鸡胚壳气室部位。沿气室边缘敲出一道长缝后，用镊子尖沿气室边缘剥开，注意不要将气室弄破，剥下的蛋壳让其掉入大平皿中。①处理立瓶第三步鸡胚液的收获②灭菌项目7—鸡胚流感疫苗的④收获第一步，连接管道：取一单根管道的进气口，一端连接真空泵，另一端连接空气过滤滤器，空气过滤滤器的另一端连接管道的进气口，用止血钳卡住出液口，打开收获头处的包装，开始收获。第三步鸡胚液的收获

第二步，收获：先握住小镊子插进尿囊腔中，松开小镊子把尿囊膜划开一个小口，把收获头插进去吸干尿囊液。项目7—鸡胚流感疫苗的制备

第三步，收获的顺序是由下到上、由左到右逐一收取，收到3.6L刻度后换取另一瓶，安装同上④收获第三步鸡胚液的收获第二步，收获：先握住小镊子插①物品处理将连有硅胶管道的传液盖、滤器、止血钳、西林瓶、西林瓶塞、蠕动泵、电子天平，所需灭活剂等放入层流罩内。第四步鸡胚收获液的灭活②灭活将连有硅胶管道的传液盖安装在盛灭活剂的桶上，盛1M柠檬酸三钠溶液的桶与蠕动泵连接，桶放在电子天平上。盛1：200福尔马林溶液的桶与计量泵连接，用量筒进行校准泵的速度调节为280ml左右/分钟。项目7—鸡胚流感疫苗的制备第五步无菌分装观看Flash①物品处理第四步鸡胚收获液的灭活②灭活项目7—鸡胚流感疫问题四我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格,可以应用于临床？问题四质量检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备疫苗的安全性疫苗的有效性质量检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备疫苗的安全性疫苗的有问题五还有什么其他相关知识需要拓展?问题五拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片项目7—鸡胚流感疫苗的制备鼠疫杆菌霍乱弧菌炭疽杆菌拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片项目7—鸡胚流感疫苗的制备拓展知识一、细菌性疫苗项目8—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程及环境区域划分质量控制要点生产管理要点其他疫苗举例项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目8—鸡胚流感疫苗的制备项目7—鸡胚流感疫苗的制备拓展知识一、细菌性疫苗项目8—鸡胚流感疫苗的制备工艺流程（一）工艺流程及环境区域划分

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级返回包装项目7—鸡胚流感疫苗的制备（一）工艺流程及环境区域划分菌种筛选*种子批的建（二）质量控制要点------工序A

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序A：菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序A菌种筛选*种参照书上26页图3-1

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序B：项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B参照书上26页图3-1菌种筛选*种子批的建立和检工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。（2）种子批制度建立：（传代、扩增）（传代、扩增）原始种子批￫主代种子批￫工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。

（3）种子批检定：培养特性、血清学特征、毒力试验、免疫力试验、抗原性试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序B工序B:（1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序C：微生物鉴别，包括菌型、纯度及其他特殊鉴别试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序C菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

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100000级区#生物安全柜为局部100级工序D：微生物纯度检查，浓度检查项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序D菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

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100000级区#生物安全柜为局部100级工序E：微生物纯度检查项目8—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序E菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

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100000级区#生物安全柜为局部100级工序F：无菌试验项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序F菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生物安全柜为局部100级工序G：原液检查，包括镜检查杂菌、效价或活性测定、无菌试验、浓度测定、免疫力试验。项目7—鸡胚流感疫苗的制备（二）质量控制要点------工序G菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种

菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*

ABC原液合并杀菌原液收获*

GFE半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部100级

10000级区

100000级区#生