大肠杆菌染色体的制备_第1页
大肠杆菌染色体的制备_第2页
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文档简介

关于大肠杆菌染色体的制备第一页，共九页，2022年，8月28日一、实验目的1.掌握制备大肠杆菌染色体DNA的方法2.为PCR扩增目的基因的实验准备好模板

第二页，共九页，2022年，8月28日二、实验原理

大肠杆菌染色体DNA的制备首先收集对数生长期的细胞，然后用SDS破裂细胞，破细胞后，蛋白质经蛋白酶消化、酚：氯仿除去，最后用乙醇沉淀核酸，RNA经RNA酶消化除去，最终获得了染色体DNA。第三页，共九页，2022年，8月28日三、实验准备

1.菌株

大肠杆菌DH5α2.仪器

离心机

3.器皿

玻璃离心管（10mL）、移液管（10mL、5mL）、微量取样器、烧杯、玻璃棒、试管、三角瓶

第四页，共九页，2022年，8月28日

4.试剂

（1）LB完全肉汤培养液：1%胰蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%NaClpH7.4。

（2）SET溶液：20%蔗糖、50mmol/LTris—HCl（pH7.6）、50mmol/LEDTA。

（3）20%SDS

（4）酚：氯仿（5）乙醇（6）RNase溶液（7）蛋白酶K20mg/ml

第五页，共九页，2022年，8月28日四、实验步骤1.细胞收集已培养好的菌液收集于10mL的离心管中8000rpm离心5min去上清，留沉淀菌体

第六页，共九页，2022年，8月28日2.细胞裂解

沉淀菌体加入溶菌酶液（8mg溶菌酶/1mLSET）加1mL20%SDS，使细胞裂解

50μL20mg/mL蛋白酶，混匀5000rpm离心10min，弃沉淀

第七页，共九页，2022年，8月28日3.DNA分离取上清加等体积的酚：氯仿，混匀3500rpm离心10min

取上清加入2倍体积的乙醇沉淀核酸3500rpm离心10min弃上清加RNase溶液

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