《诊断学》第二版第二十四章-临床常用免疫学检测课件

第二十四章临床常用免疫学检测第二十四章临床常用免疫学检测1临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测免疫系统免疫学方法临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测免疫系统免疫学方2第一节血清免疫球蛋白（Ig）检测定义：是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。第一节血清免疫球蛋白（Ig）检测定义：是由浆细胞合成分泌3血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同4血清免疫球蛋白分类血清免疫球蛋白分类5检测方法酶联免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法（CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊检测方法酶联免疫法（ELISA)6一、血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％-80％再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig一、血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％7一、血清免疫球蛋白G检测一、血清免疫球蛋白G检测8参考值7.0—16.6g/L参考值7.0—16.6g/L9临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、10临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联11二、免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。血清型IgA以单体形式存在分泌型IgA（SIgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成。二、免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIg12参考值血清IgA0.7～3.5g/L，IgA占10％-15％。SIgA唾液0.3g/L，泪液30~80g/L，初乳5.06g/L，粪便1.3g/L参考值血清IgA0.7～3.5g/L，IgA占10％13临床意义IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹和肾脏疾病等IgA降低见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，重链病，轻链病，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病临床意义IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节14三、免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig不能通过血管壁，不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体三、免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig15《诊断学》第二版第二十四章--临床常用免疫学检测课件16参考值参考值0.5～2.6g/L参考值参考值0.5～2.6g/L17临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高IgM降低见于IgG型重链病，IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症。临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节18四、免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，介导Ⅰ型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。四、免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总19参考值ELISA法为0.1～0.9mg/L参考值ELISA法为0.1～0.9mg/L20临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节21五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫22参考值蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。参考值蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。23临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。巨球蛋白血症：该病血液中存在大量单克隆IgM。重链病：出现Ig重链轻链病：出现单克隆游离轻链。临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：24临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。良性M蛋白血症：临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：25第二节血清补体检测补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应第二节血清补体检测补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统26补体的三条激活途径补体的三条激活途径27一、总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。一、总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞28++C一、溶细胞作用：靶细胞抗体抗原抗体

复合物C1--C9靶细胞溶解++C一、溶细胞作用：靶细胞抗体抗原抗体

复合物29Ca++C1rC1sC1q

C4C4ab细胞膜识别阶段Ca++C1rC1sC1qC4C4ab细胞膜识别阶段30C3转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2C2abC2bC4b2b为C3转化酶活化阶段C3转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC131C5转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2aC2bC3

C3abC4b2b3b是C5转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成活化阶段C5转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC132C3b

C2aC4bC5bC5a

C2aC4bC5bC5a33C5b

C6C7膜攻击阶段C5bC6C7膜攻击阶段34MAC形成并插入到细胞内C5b

C6C7C8

C9C9C9C9C9C9C9C9C9MAC形成并插入到细胞内C5bC6C7C8CCC35CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体50%溶血试验，即CH50试验。CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在36CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性肿瘤。减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性37二、补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。参考值：

成人血清C3：O．8～1．5g／L。二、补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系38临床意义增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。减低：见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。临床意义增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期39

第三节肿瘤标志物检测肿瘤标志物（TM）：在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。第三节肿瘤标志物检测肿瘤标志物（TM）：在肿瘤发生和40肿瘤标志物免疫分析现实的肿瘤标志物灵敏度有限；特异性有限；存在正常异常交错；存在不稳定性与临床表现存在差异理想的肿瘤标志物肿瘤患者血液中含量明显增高；与肿瘤组织的定位有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小分期有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关；假阴性率与假阳性率低。肿瘤标志物免疫分析现实的肿瘤标志物理想的肿瘤标志物41TM分类蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。糖脂类，如CA19-9和CA-50等酶类，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受体等其它肿瘤标志物，如核酸、多胺等。TM分类蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。42一、蛋白质类肿瘤标志物检测一、蛋白质类肿瘤标志物检测43（一）甲胎蛋白（AFP）测定在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成，出生后一年内降至正常水平。细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。（一）甲胎蛋白（AFP）测定在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合44参考值血清<25μg/L参考值血清<25μg/L45临床意义原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常>300μg/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高，但常300μg/L。生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。妊娠时AFP可升高，峰值低于400μg/L，若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。临床意义原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常>30046（二）癌胚抗原（CEA）早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力胎儿出生后血清CEA的含量极低参考值：血清<5μg/L（二）癌胚抗原（CEA）早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成C47临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消化系统肿瘤。血清CEA连续随访检测，可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。肠道憩室炎，直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。抽烟临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消48（三）前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白存在于前列腺管道的上皮细胞，前列腺癌时血清水平明显升高总PSA(t-PSA）中，80％结合形式，20％游离（f-PSA)参考值：t-PSA<4.0μg/L、f-PSA<0.8μg/L、f-PSA/t-PSA>0.25（三）前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白49临床意义前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明显升高前列腺炎、增生，轻度升高，t-PSA4.0-10.0μg/Lt-PSA4.0-10.0μg/L，f-PSA/t-PSA的比值对诊断更有价值，f-PSA/t-PSA﹤0.1时提示前列腺癌临床意义前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明显升高50二、糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变，形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用单克隆抗体技术检测这些抗原，结果诞生了糖蛋白类抗原。作为新一代的肿瘤标记物，远较酶和激素类标记物敏感、特异。二、糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导51（一）CA19-9为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，有六个糖基组成正常在胰腺导管、胆道、胃、肠、子宫内膜和涎腺上皮细胞中均有表达（一）CA19-9为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，有六个糖52CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强在各种腺癌特别是消化系统的恶性肿瘤如：71～93％胰腺癌、67％肝胆管癌、40～50％胃癌、30～50％肝癌、30％直肠癌和15％乳腺癌的CA19-9都有升高在急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆道结石和肝脏疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超过120kU/L，往往是呈“一过性”升高。CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强53CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最高，常被认为是针对胰腺癌的一种肿瘤标记物。早期胰腺癌CA19-9敏感性较低，T1期为60.7％、T2期为78.4％检测胰腺癌的治疗效果及术后复发情况

CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最54（二）CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及患者血清中（二）CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及55CA-125在卵巢诊断中的应用80～90％的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值，敏感度为78％、特异性95％、阳性预测价值82％、阴性预测价值91％。CA-125和CEA联合测定，计算两者比值，可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。CA-125在卵巢诊断中的应用80～90％的卵巢上皮癌中CA56（三）CA15-3分子量约为40000的糖蛋白是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白（三）CA15-3分子量约为40000的糖蛋白57临床意义CA15-3作为乳腺癌的主要标记物

23％的原发性乳腺癌和69％转移性乳腺癌可有CA15-3的升高乳腺癌的Ⅰ期和Ⅱ期，仅有10～20％的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期诊断临床意义CA15-3作为乳腺癌的主要标记物58临床意义主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。乳腺癌患者血清CA15-3浓度比原来水平升高预示病情进展、肿瘤复发、转移，其浓度升高比临床症状出现或影像学检查的发现时间早。对晚期病人，当CA15-3>100kU/L时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。临床意义主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。59第四节自身抗体检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.第四节自身抗体检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质60一、类风湿因子(RF)的检测RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是一种以变性IgG的作为靶抗原的自身抗体。RF主要为IgM型抗体,但也有IgG,IgAIgD、IgE型抗体。存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。一、类风湿因子(RF)的检测RF是变性IgG刺激机体产生的一61检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验：<1:10为阴性。酶连免疫吸附实验（ELISA）：阴性。速率散射比浊法：<30KIU/L检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验：<1:10为阴性。62临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%，平均为70%。RF的量或滴度与疾病的严重程度不平行，但与疾病的活动性有关。IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关，IgM型与IgA型的效价与骨质破坏有关。临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%，平均63临床意义RF的特异性不强，在其他结缔组织病也有一定的阳性率，如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥综合征、慢性活动性肝炎等患者等。不过RF的含量相对较低，且持续时间较短。临床意义RF的特异性不强，在其他结缔组织病也有一定的阳性率，64二、抗核抗体(ANA)检测经典ANA：是一类以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。广义ANA：整个细胞成分，包括细胞核和细胞浆。无器官与种属的特异性。主要是IgG.检测方法：间接免疫荧光法（IIF)二、抗核抗体(ANA)检测经典ANA：是一类以细胞核成分为靶65核仁型核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等核仁型核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等66均质型抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。多见于活动期SLE、药物性狼疮等。均质型抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形67边缘型是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白的形态学反应。高滴度周边型核荧光多见于SLE。边缘型是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白的形态学反应。高滴度周68颗粒型抗ENA抗体颗粒型抗ENA抗体69临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮（SLE）的ANA阳性率在90%以上，因此ANA对SLE的诊断具有较高的灵敏度。ANA滴度或量与SLE的活动性平行，因此ANA是判断SLE活动与否的指标之一。其它自身免疫病ANA也可阳性，如全身性硬皮病的阳性率为约为85~95%，类风湿关节炎约为20%。临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮（SLE）的ANA阳性率在970（二）可提取核抗原(ENA)抗体谱ENA又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原，是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原。ENA多肽抗体谱是针对核内ENA的一类自身抗体，约有10余种，主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗Sm抗体，其它还有抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Scl-70抗体、抗JO-1抗体等。不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。（二）可提取核抗原(ENA)抗体谱ENA又称盐水可溶性抗71检测方法免疫印迹技术（最常用）检测方法72临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病，如MCTD、SLE、系统性硬化病、皮肌炎等，以MCTD的阳性率最高，约为95-100%，且抗体的滴度亦高，故此抗体对MCTD有较高的诊断价值。抗JO-1抗体阳性对多发性肌炎与皮肌炎的诊断有一定的价值。临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病，如MCTD、SL73临床意义抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征，在SLE的非活动期亦可检出，是SLE的特异性标志抗体之一，阳性率约为30-40%，而其它疾病鲜见阳性。若联合检测抗ds-DNA和抗Sm抗体可提高SLE诊断的准确性。抗Rib抗体阳性主要见于SLE，为SLE的又一标志抗体临床意义抗Sm抗体主要见于SLE及其重叠综合征，在SLE的非74临床意义抗SS-A、抗SS-B抗体阳性多见于干燥综合征及合并SLE的干燥综合征，偶见MCTD，因此抗SS-A、抗SS-B抗体为干燥综合征的标志抗体。抗Scl-70抗体为进行性全身硬化的标志抗体。特异地出现于该病患者的血清中，阳性多伴有肺纤维化，局限性硬皮病该抗体常阴性。临床意义抗SS-A、抗SS-B抗体阳性多见于干燥综合征及合并75（三）抗DNA抗体抗双链DNA（ds-DNA）抗体；抗单链DNA（ss-DNA）抗体；抗Z-DNA抗体（三）抗DNA抗体抗双链DNA（ds-DNA）抗体；76检测方法与参考值

检测抗ds—DNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光测定。检测方法与参考值检测抗ds—DNA抗体最特异和最敏感的77临床意义抗ds—DNA抗体阳性见于活动期SLE，阳性率70％～90％。本试验特异性较高，但敏感性较低。抗ss—DNA抗体阳性见于SLE(阳性率70％～95％)，尤其是合并有狼疮性肾炎。还可见于一些重叠结缔组织病、药物诱导的狼疮和慢性活动行肝炎等，但不具特异性。

临床意义抗ds—DNA抗体阳性见于活动期SLE，阳性率7078第五节感染免疫检测第五节感染免疫检测79（一）抗链球菌溶血素“O”测定溶血素“O”是A族溶血性链球菌的具有溶血活性的蛋白质，具有抗原性抗链球菌溶血素“O”（Anti-streptolysin、ASO）是以链球菌溶血素“O”为靶抗原的抗体。（一）抗链球菌溶血素“O”测定溶血素“O”是A族溶血性链球菌80参考值乳胶凝集法＜500U免疫比浊法＜200U 参考值81临床意义阳性表示病人近期内有A群溶血性链球菌感染，常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等。临床意义阳性表示病人近期内有A群溶血性链球菌感染，常见于活动82(二)伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定伤寒沙门菌感染后，菌体“o”抗原和鞭毛“H”抗原可刺激人体产生相应抗体；副伤寒杆菌分甲、乙和丙三型各自的菌体抗原和鞭毛抗原也可产生相应的抗体。(二)伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定伤寒沙门菌感染后，菌体“o”83概念：用已知伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及甲型副伤寒、乙型、丙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液，与受检者血清作试管或微孔板凝集试验，测定有无相应抗体及其效价的试验。辅助诊断肠热症。参考值：直接凝集法：伤寒H<l：160；O<1：80；副伤寒甲、乙和丙<1：80。肥达试验概念：用已知伤寒沙门菌O抗原和H抗原，以及甲型副伤寒、乙型、84单份血清抗体效价O>1：80及H>1：160者有诊断意义；若动态观察，持续超过参考值或较原效价升高4倍以上更有价值。O、H均升高：提示伤寒可能性大，多数患者在病程第2周出现阳性。O不高、H升高，可能是预防接种或是非特异性回忆反应。O升高、H不高，则可能是感染早期或与伤寒沙门菌抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。

临床意义单份血清抗体效价O>1：80及H>1：160者有诊断意义；临85第六节其他免疫检测循环免疫复合物检验C反应蛋白检测第六节其他免疫检测循环免疫复合物检验86（二）C反应蛋白测定C-reactiveprotein、CRP）是一种急性时相反应蛋白由肝脏合成，能与肺炎双球菌C多糖结合能结合细菌、真菌及原虫体内的多糖具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用。（二）C反应蛋白测定C-reactiveprotein、C87参考值免疫比浊法:新生儿＜0.6mg/L

婴儿＜1.6mg/L

成人＜8.0mg/L参考值免疫比浊法:新生儿＜0.6mg/L88临床意义急性时相反应极灵敏的指标。CRP升高：见于化脓性感染、组织坏死(心肌梗死、严重创伤、大手术、烧伤等)、恶性肿瘤、结缔组织病、器官移植急性排斥等

细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断指标，细菌性感染CRP升高，病毒性感染CRP不升高。鉴别风湿热活动期和稳定期：前者CRP明显升高，而治疗好转后，CRP逐渐降至正常。鉴别器质性和功能性疾病：前者升高，后者不升高。临床意义急性时相反应极灵敏的指标。89第二十四章临床常用免疫学检测第二十四章临床常用免疫学检测90临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测免疫系统免疫学方法临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测免疫系统免疫学方91第一节血清免疫球蛋白（Ig）检测定义：是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。第一节血清免疫球蛋白（Ig）检测定义：是由浆细胞合成分泌92血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同93血清免疫球蛋白分类血清免疫球蛋白分类94检测方法酶联免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法（CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊检测方法酶联免疫法（ELISA)95一、血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％-80％再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig一、血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％96一、血清免疫球蛋白G检测一、血清免疫球蛋白G检测97参考值7.0—16.6g/L参考值7.0—16.6g/L98临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、99临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联100二、免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。血清型IgA以单体形式存在分泌型IgA（SIgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成。二、免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIg101参考值血清IgA0.7～3.5g/L，IgA占10％-15％。SIgA唾液0.3g/L，泪液30~80g/L，初乳5.06g/L，粪便1.3g/L参考值血清IgA0.7～3.5g/L，IgA占10％102临床意义IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹和肾脏疾病等IgA降低见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，重链病，轻链病，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病临床意义IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节103三、免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig不能通过血管壁，不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体三、免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig104《诊断学》第二版第二十四章--临床常用免疫学检测课件105参考值参考值0.5～2.6g/L参考值参考值0.5～2.6g/L106临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高IgM降低见于IgG型重链病，IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症。临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节107四、免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，介导Ⅰ型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。四、免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总108参考值ELISA法为0.1～0.9mg/L参考值ELISA法为0.1～0.9mg/L109临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节110五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。五、血清M蛋白检测M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫111参考值蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。参考值蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。112临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。巨球蛋白血症：该病血液中存在大量单克隆IgM。重链病：出现Ig重链轻链病：出现单克隆游离轻链。临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：113临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。良性M蛋白血症：临床意义检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：114第二节血清补体检测补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应第二节血清补体检测补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统115补体的三条激活途径补体的三条激活途径116一、总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。一、总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞117++C一、溶细胞作用：靶细胞抗体抗原抗体

复合物C1--C9靶细胞溶解++C一、溶细胞作用：靶细胞抗体抗原抗体

复合物118Ca++C1rC1sC1q

C4C4ab细胞膜识别阶段Ca++C1rC1sC1qC4C4ab细胞膜识别阶段119C3转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2C2abC2bC4b2b为C3转化酶活化阶段C3转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1120C5转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1q

C2aC2bC3

C3abC4b2b3b是C5转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成活化阶段C5转化酶的形成C4bMg++C4aCa++C1rC1sC1121C3b

C2aC4bC5bC5a

C2aC4bC5bC5a122C5b

C6C7膜攻击阶段C5bC6C7膜攻击阶段123MAC形成并插入到细胞内C5b

C6C7C8

C9C9C9C9C9C9C9C9C9MAC形成并插入到细胞内C5bC6C7C8CCC124CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体50%溶血试验，即CH50试验。CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在125CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性肿瘤。减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性126二、补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。参考值：

成人血清C3：O．8～1．5g／L。二、补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系127临床意义增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。减低：见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。临床意义增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期128

第三节肿瘤标志物检测肿瘤标志物（TM）：在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。第三节肿瘤标志物检测肿瘤标志物（TM）：在肿瘤发生和129肿瘤标志物免疫分析现实的肿瘤标志物灵敏度有限；特异性有限；存在正常异常交错；存在不稳定性与临床表现存在差异理想的肿瘤标志物肿瘤患者血液中含量明显增高；与肿瘤组织的定位有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的大小分期有关；肿瘤标志物的含量与肿瘤的生长、消退或转移、复发有关；假阴性率与假阳性率低。肿瘤标志物免疫分析现实的肿瘤标志物理想的肿瘤标志物130TM分类蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。糖脂类，如CA19-9和CA-50等酶类，如PAP、NSE和AFU等。激素，如HCG、雌激素受体等其它肿瘤标志物，如核酸、多胺等。TM分类蛋白质类，如AFP、CEA和PSA等。131一、蛋白质类肿瘤标志物检测一、蛋白质类肿瘤标志物检测132（一）甲胎蛋白（AFP）测定在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合成，出生后一年内降至正常水平。细胞恶变后又重新具有分泌AFP的能力。对诊断肝细胞癌及滋养细胞恶性肿瘤有重要的临床价值。（一）甲胎蛋白（AFP）测定在胎儿发育早期,由肝脏和卵黄囊合133参考值血清<25μg/L参考值血清<25μg/L134临床意义原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常>300μg/L。病毒性肝炎与肝硬化患者血清中AFP可增高，但常300μg/L。生殖器胚胎性肿瘤、胃癌、胰腺癌患者血清中AFP可升高。妊娠时AFP可升高，峰值低于400μg/L，若异常升高应考虑胎儿神经管缺损畸形。临床意义原发性肝癌患者血清中AFP的含量明显升高，常>300135（二）癌胚抗原（CEA）早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成CEA的能力胎儿出生后血清CEA的含量极低参考值：血清<5μg/L（二）癌胚抗原（CEA）早期胎儿的胃肠道及某些组织均有合成C136临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消化系统肿瘤。血清CEA连续随访检测，可用于恶性肿瘤治疗后的疗效观察及预后判断。病情好转时，CEA浓度下降，病情加重时可升高。肠道憩室炎，直肠息肉，结肠炎，肝硬化，肝炎和肺部疾病也有不同程度的升高。抽烟临床意义升高主要见于胰腺癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌等消137（三）前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白存在于前列腺管道的上皮细胞，前列腺癌时血清水平明显升高总PSA(t-PSA）中，80％结合形式，20％游离（f-PSA)参考值：t-PSA<4.0μg/L、f-PSA<0.8μg/L、f-PSA/t-PSA>0.25（三）前列腺特异性抗原（PSA)前列腺分泌的单链糖蛋白138临床意义前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明显升高前列腺炎、增生，轻度升高，t-PSA4.0-10.0μg/Lt-PSA4.0-10.0μg/L，f-PSA/t-PSA的比值对诊断更有价值，f-PSA/t-PSA﹤0.1时提示前列腺癌临床意义前列腺癌是60-90％患者血清t-PSA明显升高139二、糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导致细胞分泌性或细胞膜上的糖蛋白或糖脂中的糖基序列发生改变，形成了一种和正常糖蛋白不同的特殊抗原，可利用单克隆抗体技术检测这些抗原，结果诞生了糖蛋白类抗原。作为新一代的肿瘤标记物，远较酶和激素类标记物敏感、特异。二、糖脂类肿瘤标志物检测肿瘤细胞内糖基化过程发生变异，从而导140（一）CA19-9为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，有六个糖基组成正常在胰腺导管、胆道、胃、肠、子宫内膜和涎腺上皮细胞中均有表达（一）CA19-9为唾液酸化的Ⅰ型乳糖系岩藻五糖，有六个糖141CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强在各种腺癌特别是消化系统的恶性肿瘤如：71～93％胰腺癌、67％肝胆管癌、40～50％胃癌、30～50％肝癌、30％直肠癌和15％乳腺癌的CA19-9都有升高在急性胰腺炎、胆汁淤积性胆管炎、胆道结石和肝脏疾患中CA19-9也有可能升高，但很少超过120kU/L，往往是呈“一过性”升高。CA19-9的应用CA19-9的器官特异性不强142CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最高，常被认为是针对胰腺癌的一种肿瘤标记物。早期胰腺癌CA19-9敏感性较低，T1期为60.7％、T2期为78.4％检测胰腺癌的治疗效果及术后复发情况

CA19-9在胰腺癌中的应用CA19-9在胰腺癌中的阳性率最143（二）CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及患者血清中（二）CA125糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于上皮性卵巢组织及144CA-125在卵巢诊断中的应用80～90％的卵巢上皮癌中CA-125可明显升高子宫内膜癌、透明细胞癌、输卵管癌及未分化卵巢癌患者中CA-125含量也可明显升高粘液性卵巢癌患者的阳性率则较低CA-125在卵巢包块良恶性的鉴别上特别有价值，敏感度为78％、特异性95％、阳性预测价值82％、阴性预测价值91％。CA-125和CEA联合测定，计算两者比值，可提高卵巢癌检出的敏感性和特异性。CA-125在卵巢诊断中的应用80～90％的卵巢上皮癌中CA145（三）CA15-3分子量约为40000的糖蛋白是抗原决定簇、糖和多肽组成的糖蛋白（三）CA15-3分子量约为40000的糖蛋白146临床意义CA15-3作为乳腺癌的主要标记物

23％的原发性乳腺癌和69％转移性乳腺癌可有CA15-3的升高乳腺癌的Ⅰ期和Ⅱ期，仅有10～20％的病人有升高，所以不能用于乳腺癌的早期诊断临床意义CA15-3作为乳腺癌的主要标记物147临床意义主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。乳腺癌患者血清CA15-3浓度比原来水平升高预示病情进展、肿瘤复发、转移，其浓度升高比临床症状出现或影像学检查的发现时间早。对晚期病人，当CA15-3>100kU/L时，肯定有转移，敏感性高于CEA、TPA。临床意义主要用于乳腺癌病人的治疗监测和预后判断。148第四节自身抗体检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质不产生免疫应答或只产生极微弱的免疫应答自身免疫性疾病是指机体免疫功能紊乱时,针对自身组织抗原产生自身抗体或致敏淋巴细胞,并导致组织损伤而引起的疾病.如SLE、RA、MCTD等。自身免疫性疾病主要免疫学特征为血清或其它体液中出现高滴度的自身抗体和致敏淋巴细胞,因此通过对自身抗体的检测辅助自身免疫性疾病的诊断.第四节自身抗体检测正常情况下，机体免疫系统对自身抗原物质149一、类风湿因子(RF)的检测RF是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体，是一种以变性IgG的作为靶抗原的自身抗体。RF主要为IgM型抗体,但也有IgG,IgAIgD、IgE型抗体。存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液内。一、类风湿因子(RF)的检测RF是变性IgG刺激机体产生的一150检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验：<1:10为阴性。酶连免疫吸附实验（ELISA）：阴性。速率散射比浊法：<30KIU/L检测方法与参考值乳胶致敏凝集实验：<1:10为阴性。151临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%，平均为70%。RF的量或滴度与疾病的严重程度不平行，但与疾病的活动性有关。IgG型与患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状有关，IgM型与IgA型的效价与骨质破坏有关。临床意义类风湿性关节炎患者RF的阳性率为52%-92%，平均152临床意义RF的特异性不强，在其他结缔组织病也有一定的阳性率，如SLE、硬皮病和皮肌炎、干燥综合征、慢性活动性肝炎等患者等。不过RF的含量相对较低，且持续时间较短。临床意义RF的特异性不强，在其他结缔组织病也有一定的阳性率，153二、抗核抗体(ANA)检测经典ANA：是一类以细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。广义ANA：整个细胞成分，包括细胞核和细胞浆。无器官与种属的特异性。主要是IgG.检测方法：间接免疫荧光法（IIF)二、抗核抗体(ANA)检测经典ANA：是一类以细胞核成分为靶154核仁型核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等核仁型核仁型：抗核小体抗体，多见于硬皮病、皮肌炎及类分关等155均质型抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形态表现。多见于活动期SLE、药物性狼疮等。均质型抗DNP或抗组蛋白抗体，也可是多种自身抗体高度密集的形156边缘型是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白的形态学反应。高滴度周边型核荧光多见于SLE。边缘型是抗dsDNA或抗脱氧核糖核蛋白的形态学反应。高滴度周157颗粒型抗ENA抗体颗粒型抗ENA抗体158临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮（SLE）的ANA阳性率在90%以上，因此ANA对SLE的诊断具有较高的灵敏度。ANA滴度或量与SLE的活动性平行，因此ANA是判断SLE活动与否的指标之一。其它自身免疫病ANA也可阳性，如全身性硬皮病的阳性率为约为85~95%，类风湿关节炎约为20%。临床意义未经治疗的系统性红斑狼疮（SLE）的ANA阳性率在9159（二）可提取核抗原(ENA)抗体谱ENA又称盐水可溶性抗原或磷酸盐可浸出抗原，是指在盐水中或磷酸盐可溶解的核抗原。ENA多肽抗体谱是针对核内ENA的一类自身抗体，约有10余种，主要为抗核糖核蛋白(RNP)抗体和抗Sm抗体，其它还有抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Scl-70抗体、抗JO-1抗体等。不同的自身免疫病可产生不同的抗ENA抗体。通过检测抗ENA抗体的类型及其组合，可综合诊断自身免疫病的类型。（二）可提取核抗原(ENA)抗体谱ENA又称盐水可溶性抗160检测方法免疫印迹技术（最常用）检测方法161临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病，如MCTD、SLE、系统性硬化病、皮肌炎等，以MCTD的阳性率最高，约为95-100%，且抗体的滴度亦高，故此抗体对MCTD有较高的诊断价值。抗JO-1抗体阳性对多发性肌炎与皮肌炎的诊断有一定的价值。临床意义抗RNP抗体阳性见于多种风湿性疾病，如M