基因工程的操作过程

学业分层测评当堂即时达标知识点一知识点二知识点三补充：1.原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.(以模板转录然后脱落)①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质。：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列，在该序列中，最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：补充：2.真核细胞的基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA

聚合酶结合位点等。非编码序列：包括非编码区和内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码1．下列关于基因结构的认识中，正确的是（）A．大豆基因中内含子是能够编码蛋白质的序列B．乳酸菌与酵母菌基因结构中都存在外显子和内含子C．大肠杆菌基因与RNA聚合酶结合位点位于编码区的下游D．水稻细胞基因的编码区中存在非编码序列2．（多选）原核细胞与真核细胞基因结构的共同特点是（）A．编码区都有能编码蛋白质的序列B．编码区都是连续的C．非编码区都能调控遗传信息的表达D．非编码区都有RNA聚合酶结合的位点DACD1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤有了目的基因，我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可进行遗传、表达和发挥作用载体进入受体细胞稳定表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。(一)、目的基因主要是______________________编码蛋白质的基因（二）、获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技术扩增3、人工合成如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的基因、具调控作用的因子等。1、从基基因文文库中中获取取目的的基因因（1）.基因文文库将含有有某种种生物物不同同基因因的许许多DNA片断，，导入入到受受体菌菌的群群体中中，各各个受受体菌菌分别别含有有这种种生物物的不不同基基因，，称为为基因因文库库。种类基因组组文库库：含有一一种生生物的的全部基因部分基基因文文库：：只包含含了一一种生生物的的部分基因，，如：cDNA文库提取某某种生生物的的全部DNA用适当当的限限制酶酶酶切切一定大大小的的DNA片段将DNA片段与与载体体连接接重组载载体基因组组文库库导入受受体菌菌中储储存（2）.基因文文库的的构建建方法法①基因组组文库库的构构建提取某某种生生物的的某器官官或特定发发育时时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载载体与载体体连接接cDNA文库反（逆逆）转转录酶酶DNA聚合酶酶导入受受体菌菌中储储存②cDNA文库库的的构构建建-----逆转转录录法法：：基因因组组DNA文库库cDNA文库库基因因组组DNA文库库与与cDNA文库库的的比比较较某生生物物体体内内全全部部DNA许多多DNA片段段受体体菌菌群群体体限制酶与运运载载体体连连接接导导入入基因因组组文文库库cDNA反转录受体体菌菌群群体体与运运载载体体连连接接导导入入部分分基基因因文文库库（cDNA文库库））基因因组组DNA文库库与与cDNA文库库的的比比较较某种生生物某某个时时期的的mRNA真核生生物的的基因因用逆逆转录录法得得到的的cDNA与原基基因相相同吗吗？有有哪些些差异异？原原核生生物基基因呢呢？思考？？编码区区非编码码区非编码码区DNA聚合酶酶剪接有有关的的酶RNA聚合酶酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA逆转录录酶转录剪接逆转录录复制启动子子终止子子基因因不含含非编编码码系系列列。即即不不含含非编编码码区区和内含含子子基因因组组DNA文库库与与cDNA文库库的的比比较较（3）构构建建基基因因文文库库的的目目的的怎样样从从基基因因文文库库中中得得到到我我们们所所需需的的目目的的基基因因呢呢?便于于在在不知知道道目目的的基基因因核核苷苷酸酸序序列列的情情况况下下，，获获得得所所需需的的目目的的基基因因。。(4）从从基基因因文文库库中中得得到到目目的的基基因因的的方方法法依据据：：目目的的基基因因的的有有关关信信息息。。如：：根根据据基基因因的的核核苷苷酸酸序序列列基因因的的功功能能基因因在在染染色色体体上上的的位位置置基因因的的转转录录产产物物mRNA基因翻翻译产产物蛋蛋白质质等特特性1、构建建基因因组DNA文库时时，首首先应应分离离细胞胞的A、染色色体DNAB、线粒粒体DNAC、总mRNAD、tRNA2、目的的基因因可从从基因因文库库中获获得，，下列列有关关基因因文库库的描描述正正确的的是A、某生生物的的全套套基因因就是是一个个基因因文库库B、将含有某某种生物不不同的许多多DNA片段，导入入某个生物物体内，，则这个生生物就是一一个基因文文库C、含有一种种生物所有有基因的基基因文库叫叫做基因组组文库D、含有一种种生物的一一部分基因因的基因文文库叫cDNA文库AC①概念：PCR全称为_______________，是一项在在生物____复制___________的核酸合成成技术③条件：_________________________、______________、___________、_______________________②原理：__________④方式：以_____方式扩增，，即____（n为扩增循环环的次数））⑤结果：多聚酶链式式反应体外特定DNA片段DNA复制已知基因的的核苷酸序序列（前提）四种脱氧核核苷酸一对引物物耐热的DNA聚合酶（（Taq酶）指数2n使目的基基因的片片段在短短时间内内成百万万倍地扩扩增2、利用PCR技术扩增增目的基基因⑥过程：a、DNA变性（90℃-95℃℃）：双链链DNA模板在热作用用下，_____断裂，形形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温温度降低，，引物物与DNA模板结合，，形成局部部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，，从引物处延伸，，合成与模板板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链具体过程：?1个DNA分子进行PCR扩增,循环4次，理论上至至少需要几个引物？2×（2n-1）(n为循环次数)（24-1）×2=30目的基因因的mRNA单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基基因)反转录合成1）反转录录法：以目的基基因转录录成的信信使RNA为模板，，反转录录成互补补的单链链DNA，然后在在酶的作作用下合合成双链链DNA，从而获获得所需需的基因因。蛋白质的氨基酸酸序列mRNA的核苷酸酸序列结构基因因的核苷酸酸序列目的基因推测推测化学合成成2）根据已已知的氨氨基酸序序列合成成DNA法：3、人工合合成的目目的基因因目的基因因首端RNA聚合酶mRNA终止子尾端转录鉴别目的基因因遗传表达目的基因因维持稳定定表达农杆菌转转化法裸子单子叶植植物显微注射射受精卵感受态细细胞重组表达达载体DNA分子遗传物质质相对较较少DNA分子杂交交分子抗原—抗体接种学业分层层测评（（二）点击图标标进入…9、静夜夜四无无邻，，荒居居旧业业贫。。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、雨中中黄叶叶树，，灯下下白头头人。。。06:00:4206:00:4206:0012/23/20226:00:42AM11、以我我独沈沈久，，愧君君相见见频。。。12月月-2206:00:4206:00Dec-2223-Dec-2212、故人江江海别，，几度隔隔山川。。。06:00:4206:00:4206:00Friday,December23,202213、乍见翻翻疑梦，，相悲各各问年。。。12月-2212月-2206:00:4206:00:42December23,202214、他乡生白发发，旧国见青青山。。23十二月月20226:00:42上午06:00:4212月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月226:00上上午12月-2206:00December23,202216、行动出成果果，工作出财财富。。2022/12/236:00:4206:00:4223December202217、做前，能能够环视四四周；做时时，你只能能或者最好好沿着以脚脚为起点的的射线向前前。。6:00:42上上午6:00上上午06:00:4212月-229、没没有有失失败败，，只只有有暂暂时时停停止止成成功功！！。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、很多事情努努力了未必有有结果，但是是不努力却什什么改变也没没有。。06:00:4206:00:4206:0012/23/20226:00:42AM11、成功就是日日复一日那一一点点小小努努力的积累。。。12月-2206:00:4206:00Dec-2223-Dec-2212、世间成事，，不求其绝对对圆满，留一一份不足，可可得无限完美美。。06:00:4206:00:4206:00Friday,December23,202213、不不知知香香积积寺寺，，数数里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2206:00:4206:00:42December23,202214、意意志志坚坚强强的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥块块一一样样任任意意揉揉捏捏。。23十十二二月月20226:00:42上上午午06:00:4212月月-2215、楚楚塞塞三三湘湘接接，，荆荆门门九九派派通通。。。。。十二二月月226:00上上午午12月月-2206:00December23,202216、少年十十五二十十时，步步行夺得得胡马骑骑。。2022/12/236:00:4306:00:4323December202217、空山新新雨后，，天气晚晚来秋。。。6:00:43上午6:00上上午06:00:4312月-229、杨柳散和风风，青山澹吾吾虑。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、阅读一切好好书如同和过过去最杰出的的人谈话。06:00:4306:00:4306:0012/23/20226:00:43AM11、越是是没有有本领领的就就越加加自命命不凡凡。12月月-2206:00:4306:00Dec-2223-Dec-2212、越是无