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第三章:氨基酸、肽类、蛋白质化学一、填充题1组成蛋白质氨基酸的结构通式是()。2具有紫外吸收能力的氨基酸有()、()和(),其中以()的吸收最强。3脯氨酸是()氨基酸,与苛三酮反应生成()色物质。4()和()是相对分子质量小且不含硫的氨基酸,在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。5范斯莱克(VanSlyke)法测定氨基氮主要利用()与()作用生成()。6实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应,然后用碱来滴定()上放出的()。7赖氨酸带三个解离基团,它们的pK分别为2.18,8.95及10.53。赖氨酸的等电点为()。8肽链的N末端可以用()法、()法、()法和()法测定,而()法和()法是测定C末端氨基酸TOC\o"1-5"\h\z最常用的方法。)。9蛋白质分子的a-螺旋结构,每圈螺旋包含()个氨基酸残基,螺距为()nm,每个氨基酸残基沿轴上升高度为()nm。天然蛋白质分子中的a-螺旋大多属于()手螺旋。二、是非题1某化合物和苛三酮反应呈蓝紫色,因而可以断定它是氨基酸或是蛋白质。()2亮氨酸疏水性比缴氨酸强。()3氨基酸在水溶液或在晶体状态时都以两性离子形式存在。()4合成的多聚谷氨酸在pH7时,其丫-竣基电离为-COO-,由于静电相斥,分子较松散,在pH4时并不电离,容易形成螺旋结构。()5溶液的pH可以影响氨基酸的pI值。()6组氨酸是人体的一种半必需氨基酸。()7蛋白质分子中个别氨基酸的取代未必会引起蛋白质活性的改变。()8二硫键和蛋白质的三级结构密切有关,因此没有二硫键的蛋白质就没有三级结构。()9凝胶过滤法可用于测定蛋白质的分子量,分子量小的蛋白质先流出柱,分子量大的后流出柱。()10蛋白质在小于等电点的pH溶液中,向阳极移动,而在大于等电点的pH溶液中,将向阴极移动。()三、选择题1下列哪种氨基酸溶液不能引起偏振光的旋转()A丙氨酸B甘氨酸C亮氨酸D丝氨酸2下列氨基酸在生理pH范围内缓冲能量最大的是()AGlyBHisCCysDAspTOC\o"1-5"\h\z3分子中含有两个不对称碳原子的氨基酸是()AProBTyrCThrDArg4氨基酸不具有的化学反应是()A双缩月尿反应B苛三酮反应CDNFB反应DPITC反应5用纸层析分离丙氨酸、亮氨酸和赖氨酸的混合物,则它们之间Rf的关系应为()AAla>Leu>LysBLys>Ala>LeuCLeu>Ala>LysDLeu>Lys>Ala7下列哪种氨基酸有米伦(Millon)反应()ATrpBTyrCPheDArg8Pauly试剂是将对氨基苯磺酸的重氮化合物喷洒到滤纸上,定性检测蛋白质的试剂,在蛋白质的地方显橘红色。它的生色反应是发生在蛋白质内的()A色氨酸的口引味环B半胱氨酸的疏基C组氨酸的a氨基D酪氨酸的酚羟基9在组蛋白的组氨酸侧链上进行()以调节其生物功能。A磷酸化B糖基化C乙酰化D羟基化11如果要测定一个小肽的氨基酸顺序,下列试剂中选择一个你认为最合适的()A苛三酮BCNBrC胰蛋白酶D异硫鼠酸苯酯13蛋白质可与碱共热水解,虽然这个过程会破坏一些氨基酸,但它却被常用来定量蛋白质的()ASerBCysCThrDTrp14在pH7的水溶液里,在典型的球状蛋白分子中,处于分子的内部的氨基酸残基经常是()AGluBPheCThrDAsnTOC\o"1-5"\h\z16胰蛋白酶专一水解多肽键中()A碱性残基N端B酸性残基N端C碱性残基C端D酸性残基C端17竣肽酶C专门水解C端倒数第二位是哪个氨基酸形成的肽链()AArgBLysCCysDPro18下列蛋白质中,()不是糖蛋白A免疫球蛋白B溶菌酶C转铁蛋白D胶原蛋白19血红蛋白的氧合曲线向右移动是由于()AO2分压的减少BCO2分压的减少CCQ分压的增加DpH值的增加20SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量是根据各种蛋白质()A在一定pH值下所带净电荷的不同B分子大小不同C分子极性不同D溶解度不同四、问答及计算题1试命名下列氨基酸(均存在于蛋白质中)(1)用强酸或强碱处理能转变成存在于蛋白质中的另一种氨基酸。(2)空气中即可氧化为存在于蛋白质中的另一种氨基酸。(3)能在279nm强烈吸收紫外光,易为强酸所破坏。(4)在pH*pH8内有缓冲能力。
(5)与苗三酮反应生成一种黄色产物。(6)其水溶液无旋光性。2分析下列4个肽的混合物,在Dowex-1(一种阴离子交换树脂)的离子交换柱上以从pH10-1.0连续变化的缓冲系统作洗脱,试说出每种肽洗脱的相对次序。A赖-甘-丙-甘B赖-甘-丙-谷C谷-甘-丙-谷D组-甘-丙-谷3某一条肽经酸水解组成分析含5种氨基酸,其N端非常容易环化。经CNBr处理后得一游离碱性氨基酸,Pauly反应阳性。若用胰蛋白酶作用则得两个肽段;其一为坂口反应阳性,另一在280nm有强的光吸收,并呈Millon氏阳性反应。求此肽段氨基酸排列顺序,并指出它的等电点应该是大于、等于或小于pH7。4蛋白质化学中常用的试剂有下列一些:CNBr;尿素,3-疏基乙醇,胰蛋白酶,过甲酸,丹磺酰氯,6mol/LHCl,苛三酮,异硫鼠酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。为完成下列各项试验,请回答每项的最适试剂是什么?(1)一个小肽的氨基酸顺序的测定(2)多肽链的氨基末端的测定(3)一个没有二硫键的蛋白质的可逆变性(4)芳香族氨基酸残基的竣基一侧肽键的水解(5)甲硫氨酸的竣基一侧肽键的裂解(6)通过氧化途径将二硫键打开参考答案二、是非题对15错3对对15错3对4对5错6对7对8错9错10错16对17错18对19错20对11错12错13对1421错22错23错24对25对26错27对28对29错30错三、选择题1B2B3C4A5C6C7B14B15C1B2B3C4A5C6C7B14B15C16C17D18B8D9A10C11D12A19C20B21B22D23D13D24A25C26D25C26D27A28B29C30A31B32A33D34A35D四、问答及计算题1(1)谷氨酰胺或天冬酰胺(2)半胱氨酸(3)色氨酸(4)组氨酸(5)脯氨酸(6)1(1)谷氨酰胺或天冬酰胺(24个肽被洗脱下来的先合顺序依次为AfB-D-C。3该五肽的顺序为:谷氨酰-精氨酰-酪氨酰-甲硫氨酰-组氨酰。此肽段的等电点大于7。4(1)异硫氟酸苯酯(2)丹磺酰氯(3)尿素(4)胰凝乳蛋白酶(5)CNBr(6)过甲酸。第三章:酶化学一、填充题1全酶是由()组成,在催化反应时,二者所起的作用不1全酶是由()组成,在催化反应时,二者所起的作用不同,其中()决定酶的专一性和高效率,子或化学基团的作用。)起传递电子、原2酶活性中心往往处于酶分子表面的(物之间的作用加强。)中,形成()区,从而使酶与底3T.R.Cech和S.Altman因各自发现了()而共同获得同,其中()决定酶的专一性和高效率,子或化学基团的作用。)起传递电子、原2酶活性中心往往处于酶分子表面的(物之间的作用加强。)中,形成()区,从而使酶与底3T.R.Cech和S.Altman因各自发现了()而共同获得1989年的诺贝尔化学奖。4金属离子对酶的激活作用有两种,一是作为(),二是作为()。5乳酸脱氢酶有()种()个亚基组成。体内有()种乳酸脱氢酶的同工酶,在临床诊断上有应用价值。6胰蛋白酶的专一性就是在()残基右侧的肽键上水解;竣肽酶B专一性地从蛋白质的竣厥切下()氨基酸。7同一种酶有n个底物,就有()个Km值,其中Km值最(便为该酶的最适底物。)的底物,8测定酶活力时,底物浓度应((),反应时间应在反应的(),反应温度应选在()期进行。),反应pH选在9表不酶量的多少常用()表不。二、是非题TOC\o"1-5"\h\z1与非酶反应相比,酶反应能使更多的底物变成为产物。()2酶影响它怕催化反应的平衡的到达时间。()3辅基与辅酶的区别只在于它们与蛋白质结合的牢固程度不同,并无严格的界限。()4氧化酶都含有细胞色素。()5酶反应最适pH只取决于酶蛋白本身结构。()6在极低底物浓度时,酶促反应初速度与底物浓度成正比。()7做为辅因子的金属离子,一般并不参与酶活性中心的形成。()8底物与酶的活性中心靠共价键结合,以提高催化效率。()9测定反应的最适温度时,先将酶在不同温度下保温一段时间,然后在30c下测定酶活性。()10Km值是酶的一种特征性常数,有的酶虽可以有几种底物,但其Km值都是固定不变的。三、选择题1在测定酶活力是,用下列哪种方法处理酶和底物才合理()A其中一种用缓冲液配制即可B分别用缓冲液配制,然后混合进行反应C先混合,然后保温进行反应D分别用缓冲液配制,再预保温两者,最后混合进行反应2假定一种酶只有当某一特定的组氨酸残基侧链未被质子化时,酶分子才具有活性,降低TOC\o"1-5"\h\zpH对于该酶会发生下列哪一种类型的抑制作用。()A反竞争性B非竞争性C竞争性D混合型3酶的纯粹竞争性抑制具有下列哪种动力学效应()AVmax不变,Km增大BVmax不变,Km减少CVmax增大,Km减小DVmax增大,Km不变4酶与底物分子间的关系可以恰当地表述成()A一种临时性结合B通过共价键的一种稳定结合C酶在其中发生永久性改变的一种结合
D随机的非互补结合5已知胰凝乳蛋白酶的转换数是100s1,DNA聚合酶是15s-1。下列说法正确的是()A胰凝乳蛋白酶的底物结合常数高于DNA聚合酶B胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶反应速度更大C在一定的酶浓度和饱和底物水平下胰凝乳蛋白酶反应速度比DNA聚合酶在相同条件下更低D在饱和底物水平下,胰凝乳蛋白酶的反应速度大约是DNA聚合酶反应速度的6.7倍四、问答及计算题1何为酶的活力和比活力?测定酶活力时应注意什么?为什么测定酶活力时以测定初速度为宜,并且底物浓度远远大于酶浓度?2已糖激酶溶液在45C,12min内会丢失50%活性。但是当有大量底物葡萄糖存在时,该酶在45c只丢失3%活性。试解释此现象。9甘油醛-3-磷酸脱氢酶,相对分子质量为4万,由4个相同亚基组成,每个亚基上有一个活性位点,在最适条件下,5ug纯酶制品每分钟可以催化2.8umol甘油醛-3-磷酸转化为甘油酸-3-磷酸。请计算酶的比活力和单个活性位点的转换数。10“-糜蛋白酶(Mr24000)可以水解苯甲酰-L-酪氨酸乙酯。比活为45.0umol/min/mg酶。已知“-糜蛋白酶只有一个活性位点。求转换数。(2)当网=2X10-5mol/L,(3)若I表示竞争性抑制剂,时,U(2)当网=2X10-5mol/L,(3)若I表示竞争性抑制剂,时,U是多少?u=40umol/min,这个酶的Km是多少?Ki=4X10-5mol/L,当[S]=3x10-2mol/L和[I]=3x10-5mol/L12在不同底物浓度的反应体系中,分别测有无抑制剂存在时的u,数据如下:[S]无Imol/L(X10-4)v(gol/min)1.028171.536232.043295.065507.57461求有无抑制剂存在时的有I(2.2X10-4mol/L)v(pmol/min)求有无抑制剂存在时的Vmax和Km(K,m),并判断这种抑制剂是什么类型的抑制剂。13称取25mg蛋白酶粉配制成25mL酶溶液,从中取出0.1mL酶液,以酪蛋白为底物,用Folin-酚比色法测定酶活力,得各每小时产生1500ug酪氨酸。另取2mL酶液,用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。若以每分钟产生1ug酪氨酸的酶量为1个活力单位计算,根据以上数据,求出:(1)1mL酶液中所含蛋白质量及活力单位;(2)比活力;(3)1g酶制剂的总蛋白量及总活力。参考答案一、填充题1酶蛋白辅酶因子酶蛋白4酶的辅助因子直接的激活剂8远远超过酶浓度最适温度辅酶因子1酶蛋白辅酶因子酶蛋白4酶的辅助因子直接的激活剂8远远超过酶浓度最适温度辅酶因子52最适凹穴5疏水3核酶(具有催化作用的RNA)6碱性氨基酸9酶的活力单位数碱性7n108111绝对立体12T/Km1/Vmax13亚基解离14正碳离子五价磷过渡态Zn2+-活化水四面体肽键氧阴离子活化水15无酶时不反应被靶酶专一性激活与靶酶反应必须比解离更为迅速,即K1>>Kdis16最慢的第一步反应17酶活性中心18别构酶共价调节酶齐变序变19丝氨酸20蛋白激酶蛋白磷酸酯酶21糖基化乙酰化丫-竣基化ADP-核糖基化22天冬氨酸组氨酸23腺昔酰化脱腺甘酰化24比活力总活力25增大变小二、是非题1错2对3对4错5错6对7错8错9错10错11对12对13错14对15错16错17错18错19对20对21对22错23对24错25对26对27错28错29错30对三、选择题1D2B3A4A5D6D7D8B9A10C11C12B13A14B15A16B17B18B19C20D四、问答及计算题1酶活力指酶催化某一化学反应的能力,可以用一定条件下所催化的化学反应的反应速度来表不。酶比活力指一定量的酶,例如1mg或1g等,所具有的总的活力。由于酶催化的反应只在反应初始阶段具有恒定的速率,因此测定酶的活力以测定初速度为宜。由于酶的活性受到测定环境如底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等影响,因此酶活力测定要选择最适条件,包括最适pH最适温度、最适底物浓度、最适离子强度等。由于酶活力与酶量是成正比的,为保证所有的酶都能结合底物,参与反应,底物浓度要远远大于酶浓度。2已糖激酶能催化葡萄糖与ATP反应,使葡萄糖磷酸化。在无ATP时,葡萄糖与已糖激酶结合,能稳定游离酶分子,抵抗酶变性。由于无ATP,不会发生上述反应。比活力=2.8U/5x10-3mg=560U/mg转换数/活性位点=2.8umol/min+(5ug/40000ug/umolX4)=5600/min=93.3/s转换数=45.0x10-6x1000x24000=1080/min答:(1)Vmax=70umol/minKm=1.5x10-5mol/L(3)因为,[S]>>Km,[I],所以,u=Vmax=70umol/min12答:先分别求出1/[S],1/V,1/V',作1/Vs1/[S],1N's1/[S]图,从图中求出:1/Vmax=0.01min/molVmax=100gol/min-1/Km=-3.7X103L/molKm=2.7x10-4mol/L-1/K'm=-2.0X103L/molK'm=5X10-4mol/L因为Vmax不变,Km增大,所以是竞争性可逆抑制。13答:(1)0.625mg蛋白质;250U400U/mg蛋白质0.625g;2.5X105U第五章:核酸化学一、填充题1、核酸完全的水解产物是()、()和()。其中TOC\o"1-5"\h\z()又可分为()碱和()碱。2、体内的喋吟主要有()和();喀咤碱主要有()、()和()。某些RNA分子中还含有微量的其它碱基,称为()。3、喋吟环上的第()位氮原子与戊糖的第()位碳原子相连形成()键,通过这种键相连而成的化合物叫()。4、体内两种主要的环核甘酸是()和()。5、写出下列核甘酸符号的中文名称:ATP();dCDP()。6、RNA的二级结构大多数是以单股()的形式存在,但也可局部盘曲形成()结构,典型的tRNA结构是()结构。7、tRNA的三叶草型结构中有()环,()环,()环及()环,还有()。8、tRNA的三叶草型结构中,其中氨基酸臂的功能是(),反密码环的功能是()。9、其中一股链为5ATGCC3'的双螺旋DNA的互补链顺序是()。二、是非题1稀有碱基是指细胞中含量很少的游离喋吟或喀咤。()2如果DNA样品A的Tm低于DNA样品B的Tm,那么样品A含有的A-T碱基对高于样品B。()3由于DNA是多阴离子,所以它的熔点随盐物质质量浓度增加而增加。()4超速离心测定DNA相对分子质量时待测DNA溶液应具有较高浓度。()5“荷载的"tRNA指结合有氨基酸的tRNA。()6包括核糖体在内的所有RNP,蛋白质是其主要的功能成分,核酸则作为结构成分。()7用碱水解核酸,可以得到纯的3/-核甘酸的混合物。()8对于提纯的DNA样品,测得OD260/OD280V1.8,则说明样品中有蛋白质残留。()9真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3,-OH。()10rRNA在蛋白质合成中只起到装配者作用,而tRNA不但具有携带氨酸功能并有解译作用。三、选择题1、自然界游离核甘酸中,磷酸最常见是位于()A戊糖的C-5上B戊糖的C-2上C戊糖的C-3上D戊糖的C-2和C-5'上2、可用于测量生物样品中核酸含量的元素是()A碳B氢C氧D磷3、下列哪种碱基只存在于RNA而不存在于DNA()A尿喀咤B腺喋吟C胞喀咤D胸腺喀咤4、核酸中核甘酸之间的连接方式是()A2;3磷酸二酯键B糖昔键C2;5磷酸二酯键D35磷酸二酯键5、核酸对紫外线的最大吸收峰在哪一波长附近()A280nmB260nm
D340nmC200nmD340nmTOC\o"1-5"\h\zDNA变性是指()A分子中磷酸二酯键断裂B多核甘酸链解聚CDNA分子由超螺旋-双链双螺旋D互补碱基之间氢键断裂DNATm值较高是由于下列哪组核甘酸含量较高所致()AG+ABC+GCA+TDC+T8某DNA分子中腺喋吟的含量为15%,则胞喀咤的含量应为()A15%B30%C40%D35%9、寡聚dT-纤维素柱层析用于()。A从总DNA中分离纯化质粒DNAB从总核蛋白中分离出DNPC从总RNA中纯化mRNAD除去杂蛋白10、双链DNA热变性后()A黏度下降B沉降系数下降C浮力密度下降D紫外吸收下降四、问答题1DNA勺Walson-Crick双螺旋结构模型要点是什么?DNA在纯水室温下放置时,为什么线状双链DNA会分离成它的组成链?3预测所给样品各组成部分的相对迁移速度或相对沉降位置^(1)琼脂糖凝胶电泳分离某质粒DNA的环状、开环形、线形和变性无规则线团的混合物。(2)氯化葩密度梯度离心分离长度相同的两种DNA的混合物,A来自一种嗜热菌,B来自大肠杆菌。4下列哪些物质能降低双链DNA的Tm值?并解释它们的作用方式。SSB;核组蛋白;氯化钠;甲酰胺;碱5某细菌DNA相对分子质量为4.0X108,求(1)此DNA分子长度;(2)此DNA分子的体积;(3)此DNA分子含多少个螺旋?6某DNA分子的浮力密度是1.699g/cm3,求其含(G-C)%?7试用酶学方法来区别:(1)单链DNA和双链DNA;(2)线状DNA和环状DNA参考答案一、填充题1磷酸含氮碱腺喋吟1磷酸含氮碱腺喋吟鸟喋吟91糖昔键CAMPcGMP戊糖含氮碱胞喀咤尿喀咤喋吟核昔喋吟喀咤胸腺口密咤稀有碱基..三磷酸腺昔.多核甘酸链.二氢尿喀咤.与氨基酸结合9、5GGCAT3脱氧二磷酸胞甘双螺旋三叶草氨基酸臂反密码T<f)C额外氨基酸臂辨认密码子10、连接核糖与磷酸、连接两个DNA链、将碱基连到
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