造血检验专题知识讲座培训课件

造血检验专题知识讲座本章主要内容：造血检验的基本方法血象和骨髓像检验

骨髓检查的步骤与方法

有核细胞增生程度、分级标准及粒红比例细胞化学染色检验

常用的细胞化学染色及临床应用（POX、NAE、NAP、Fe、PAS）骨髓组织病理学检验血细胞的超微结构检验造血检验的临床应用其他自学

2造血检验专题知识讲座三、骨髓象检验

普通显微镜检查诊断：主要是血液疾病

内容：

常规检验特殊检验3造血检验专题知识讲座三、骨髓象检验

㈠临床应用

1．适应症血细胞减少或增多。各种急慢性白血病。各种类型的贫血。4造血检验专题知识讲座

不明原因的骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜；不明原因的长期发热，肝、脾、淋巴结肿大；出血；恶性血液病化疗的疗效观察；5造血检验专题知识讲座禁忌症：血友病、晚期妊娠6造血检验专题知识讲座主要作用：

辅助诊断（肯定性、支持性、可疑性、排除性诊断）

疗效的观察（完全缓解、部分缓解、未缓解）7造血检验专题知识讲座（二）骨髓穿刺

穿刺部位髂后上棘：第五腰椎向上3cm处。髂前上棘：顶端后约1-2cm处。胸骨：胸骨中线，相当第二肋间水平的胸骨体上端。小于3岁的小儿选择胫骨内侧8造血检验专题知识讲座标本的采集骨髓取材的部位和方法部位：胸骨、棘突、髂骨等处方法：多用穿刺法吸取9造血检验专题知识讲座骨髓取材情况的判断

⑴取材满意：

①抽吸骨髓时病人有特殊的痛感；②骨髓液和涂片均有骨髓小粒和脂肪滴；③显微镜观察涂片

骨髓特有细胞如：

巨核细胞、浆细胞、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞、网状细胞、网状纤维等。10造血检验专题知识讲座④细胞比值骨髓中性粒细胞杆状核与分叶核＞外周血中性粒细胞杆状核与分叶核骨髓有核细胞＞外周血有核细胞11造血检验专题知识讲座

二、骨髓细胞学检查的

内容与方法

一、骨髓涂片检查低倍镜检查油镜检查检查结果的临床意义血涂片的观察填写检查报告单12造血检验专题知识讲座1、低倍镜检查：（1）观察骨髓涂片:

取材：骨髓小粒、脂肪小滴制片：厚薄，头、体、尾分布染色：细胞着色情况13造血检验专题知识讲座取材、制片、染色14造血检验专题知识讲座2.判断骨髓增生程度骨髓细胞增生分级(五级)增生极度活跃增生明显活跃增生活跃增生减低增生明显减低15造血检验专题知识讲座骨髓增生程度分级(高倍镜）极度减低1~5/HP增生减低5~20/HP增生活跃20~50/HP明显活跃50~100/HP极度活跃>100/HP16造血检验专题知识讲座（二）、油镜检查：

（1）有核细胞分类计数：

计数200-500个有核细胞，计算各系统各阶段细胞百分率。（巨核细胞单独计数）（2）计数粒红比例（G∶E）（3）观察细胞形态有无异常（4）观察有无其他特殊细胞及寄生虫。17造血检验专题知识讲座二、血象检验：

1.低倍镜检查：（1）涂片、染色情况；（2）有无大的异常细胞；（3）寄生虫；

18造血检验专题知识讲座2.油镜检查：

（1）分类计数100个WBC

（注意形态及有无异常细胞）；（2）注意成熟红细胞的形态（如有幼稚红细胞应在计数100个WBC中记录幼稚红细胞的数目及其阶段）；（3）粗略估计血小板数目或形态;

（4）有无寄生虫。19造血检验专题知识讲座血片检查的重要性

1.不同疾病时，骨髓象相似而血象有区别

2.不同疾病时，骨髓象有区别而血象相似（传淋和慢淋）

3.同一患者骨髓象变化不显著，血象有异常（传单）

4.同一患者骨髓象异常，血象无变化（MM）

5.骨髓象难辨认，血象易辨认20造血检验专题知识讲座细胞化学结果报告细胞化学结果（专门讲述）21造血检验专题知识讲座填写骨髓报告或打印骨髓报告保存好骨髓与血液片22造血检验专题知识讲座诊断意见综合骨髓象、血象和细胞化学所见意见：肯定性诊断-----

各种白血病、巨幼细胞性贫血、MM、骨髓转移癌、戈谢病、尼曼-匹克病等支持性诊断-----

缺铁性贫血、再障、溶贫等可建议作相应检查

23造血检验专题知识讲座可疑性诊断--

难治性贫血等排除性诊断--ITP、类白血病形态学描写--

骨髓象有改变，但提不出诊断性意见，建议动态观察对比意见---

几次骨穿结果对比诊断意见24造血检验专题知识讲座骨髓象检查的注意事项

正确认识细胞是骨髓象检查的前提，检查者必须反复实践，积累经验，需经较长时间的锻炼才能熟练掌握。不要根据一两个特点就做出肯定或否定的判断。宁可看得仔细而少看，不可贪多而马虎25造血检验专题知识讲座

正常骨髓象报告：

1)增生活跃

2)粒红比值正常（G∶E2～4：1）

3)粒系增生良好：

a.占有核细胞的40～60%；

b.各阶段细胞比例适当；

c.细胞形态无明显异常。26造血检验专题知识讲座粒细胞各阶段比例：

原粒<2%，早幼粒<5%，中性中幼粒约8%，嗜酸中幼粒约<1%；中性晚幼粒约10%，嗜酸晚幼粒<2%

杆状核约20%，嗜酸杆状核<3%，中性分叶核约12%，嗜酸分叶核<5%，嗜碱性中幼粒、晚幼粒细胞罕见，

杆状核、分叶核<1%27造血检验专题知识讲座

4)

红系增生良好：

a.占有核细胞的20-25%左右

b.各阶段比例适当；

原红细胞<1%，

早幼红细胞<5%，以中、晚幼红细胞为主，各占10%；

c．形态无明显异常或红细胞形态大致正常。28造血检验专题知识讲座

5)淋巴细胞系统占20-25%；

（主要是成熟细胞）

6）单核细胞系统<4%

（主要是成熟细胞）

7）浆细胞系统<2%

（主要是成熟细胞）29造血检验专题知识讲座

7)巨核细胞

a.数量/全片：7-35个；

(1.5cm×3.0cm)

b.各阶段情况正常；原巨核细胞不见或偶见，

幼巨核细胞0-5%，

颗粒巨核细胞10-27%，

产血小板巨核细胞44-60%，

裸核

8-30%，

血小板易见、成堆状存在，形态正常。

30造血检验专题知识讲座

8)其他细胞:

组织细胞、内皮细胞、肥大细胞、网状细胞及组织嗜碱细胞等欧间，未见异常。

9)无特殊细胞及寄生虫。31造血检验专题知识讲座四、骨髓象分析

有核细胞增生程度

极度活跃：反映骨髓造血功能亢进（白血病）明显活跃：反映骨髓造血功能旺盛（贫血）

增生活跃：反映骨髓造血功能基本正常

（正常骨髓象）增生低下：反映骨髓造血功能减低（AA）增生重度低下：反映骨髓造血功能衰竭（重型AA）。32造血检验专题知识讲座血细胞数量改变

1、粒/红比值⑴粒/红比值增加：

>5：1，CML，感染⑵粒/红比值正常：

2-4：1，两系成比例增加或减少⑶粒/红比值减少：

<2：1，粒系减少,红系增加，增生贫血33造血检验专题知识讲座

粒细胞数量改变

1）粒系细胞增多原粒增多：M1、M2a、M4、CML（急变）早幼粒增多：M3，粒细胞缺乏，感染中幼粒增多：M2b，，CML，类白晚幼粒，杆状核为主：CML、感染等。34造血检验专题知识讲座

嗜酸粒细胞增多：

变态反应，寄生虫，嗜酸粒细胞白血病，CML；

嗜碱粒细胞增多：嗜碱粒细胞白血病，CML等

粒细胞减少粒细胞缺乏症、AA、急性造血停滞等35造血检验专题知识讲座

红系细胞数量改变

红系细胞增多

原红及早幼红增多：红血病，M6

中红及晚幼红增多：增生性贫血（溶贫，缺铁贫等）巨幼红/巨幼样变增多：巨幼贫、红白血病、MDS等铁粒幼红细胞增多:

铁粒幼红细胞贫血、MDS36造血检验专题知识讲座巨核细胞数量改变

巨核细胞增多增殖性疾病、M7、ITP、脾亢

巨核细胞减少

AA、AML37造血检验专题知识讲座淋巴系细胞数量改变

原幼淋增多：

ALL、慢粒急变、淋巴瘤白血病等；

成熟淋巴细胞增多：

CLL、淋巴瘤白血病、再障、淋巴细胞性类白血病、传淋、传单等

38造血检验专题知识讲座单核细胞改变

原、幼单核细胞为主：急单，慢单急变、粒-单白血病等

成熟单核细胞为主：慢单、慢性粒--单细胞白血病、CML

39造血检验专题知识讲座其他细胞改变

浆细胞增多：恶性增多：浆白，MM等良性增多：AA，感染等

组织细胞增多：恶性增多：恶组，MM

良性增多：感染性疾病40造血检验专题知识讲座（三）、血细胞形态的改变

1.胞体异常大小异常：巨变，幼红，小原粒形态异常：不规则，多形性，伪足状突起成熟红细胞椭圆形，口形，球形，泪滴形，靶形。41造血检验专题知识讲座成熟红细胞的形态异常42造血检验专题知识讲座2.胞核异常

数目：双核和多核形态异常：不规则形，凹陷，切迹，折叠，扭曲。核染色质核仁异常异常核分裂43造血检验专题知识讲座3.胞质量异常：增多或减少内容物异常：Auer，中毒性颗粒，空泡变化着色异常：多嗜性红细胞颗粒异常：增多或减少内外质异常：发育不平衡44造血检验专题知识讲座本节小结骨髓细胞的形态学特征；骨髓细胞学检查的步骤与方法；骨髓细胞的增生程度、粒红比值；正常骨髓的特征；45造血检验专题知识讲座第二节、血细胞的细胞化学染色定义：血细胞化学染色是以形态学为基础，根据化学反应原理,将骨髓片染色,观察单个细胞内在的生化特性，了解它们的代谢活动，生理功能和病理变化.鉴别各种类型血液细胞46造血检验专题知识讲座（一）过氧化物酶染色

(Peroxidase,POX)）

[原理]

H2O2细胞内

POX[O]↑

联苯胺[O]联苯胺蓝+

亚硝基氰化钠暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)

[结果]

粒系：强阳性单核系：弱阳性淋巴系：阴性

[临床意义]

鉴别急粒和急淋47造血检验专题知识讲座（二）苏丹黑B染色

(Sudanblack,SB)

[原理]

苏丹黑B（脂溶性染料）细胞质内含脂结构

棕黑色或深黑色

[结果]

粒细胞系统：阳性（黑色粗大）单核细胞系统：阳性（黑色细小）其他细胞：阴性48造血检验专题知识讲座[临床意义]

大致同POX;可用陈旧骨髓片49造血检验专题知识讲座（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilalkalinephosphataseNAP）

（偶氮偶联法）

[原理]

磷酸萘酚钠NAP萘酚+重氮盐偶联

PH9.6

（亮红色沉着于胞浆中）

[结果]NAP主要存在于成熟中性粒细胞，其他血细胞均呈阴性反应。50造血检验专题知识讲座中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（neutrophilalkalinephosphataseNAP）

（钙钴法）

[原理]β-甘油磷酸钠NAP甘油+磷酸钠

NaHPO4+Ca（NO3)2+（NH4）

SCO↓

棕黑色（沉着于胞浆中

[结果]NAP主要存在于成熟中性粒细胞，其他血细胞均呈阴性反应。51造血检验专题知识讲座1、胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。2、反应强度分为五级：

-++++++++++

淡红淡灰灰黑浅棕黑深棕黑色3、百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算阳性率。4、积分法：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作出分级，将其百分率乘以级数，然后相加。52造血检验专题知识讲座53造血检验专题知识讲座54造血检验专题知识讲座类白血病反应慢粒白血病反应55造血检验专题知识讲座[参考值]

正常：百分率10-40%，

积分40-80分[临床意义]1.区别CML

、类白血病反应↓积分为0;↑积分>200分

2.急粒积分↓;急淋积分↑;急单N或↓

3.AA时↑PNH↓4.化脓性感染↑病毒性感染时↓56造血检验专题知识讲座慢性粒细胞性白血病

Chronicmyeloidleukemia57造血检验专题知识讲座慢粒阴性58造血检验专题知识讲座（四）、酸性磷酸酶

（acidphoshataseACP)原理：硫化铅和偶带偶联法结果：胞质内出现棕黑色颗粒者为阳性（硫化铅）

胞质内出现亮红色颗粒者为阳性（偶氮偶联法）

59造血检验专题知识讲座临床意义

鉴别多毛细胞白血病，不被L-酒石酸所抑制60造血检验专题知识讲座鉴别T细胞白血病与B细胞白血病阳性阴性鉴别Gaucher病与Nienann-Pick病阳性阴性61造血检验专题知识讲座（五）、氯醋酸AS-D萘酯酶染色

naphytholAS-Dchloroacetateesterase,AS-DNCE原理：

氯醋酸AS-D萘酚AS-DNCEAS-D萘酚

H2O不溶性红色沉淀+坚牢酱紫62造血检验专题知识讲座结果63造血检验专题知识讲座临床评价

急性白血病的鉴别：1.急性粒白血病M31+～2+2+～3+2.急性单核细胞白血病原、幼单核细胞---阴性3.急性淋巴细胞白血病原、幼淋细胞----阴性

64造血检验专题知识讲座（六）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)

(α-naphythyolacetateesterase）α-醋酸萘酚α–NAEα-萘酚+重氮盐（坚牢蓝B）

棕黑或灰黑色（胞桨中）65造血检验专题知识讲座临床评价鉴别白血病类型；同时必须做NaF抑制试验急性粒细胞白血病

---

原粒细胞弱阳性，不被NaF抑制；急性单核细胞白血病---

原单核细胞阳性，被NaF抑制；66造血检验专题知识讲座结果判断阳性：胞桨中出现棕黑、灰黑色颗粒沉淀67造血检验专题知识讲座急性单核细胞白血病

acutemonocyticleukemia

68造血检验专题知识讲座非特异性酯酶+NaF69造血检验专题知识讲座（七）糖原染色（过碘酸-雪夫反应）

(periodicacid–Schiff,PAS)【原理】

过碘酸细胞内的糖原氧化双醛基+无色品红（雪夫碱）紫红色沉淀70造血检验专题知识讲座结果判断

阳性：胞质中红色颗粒或弥漫状物质71造血检验专题知识讲座淋巴细胞判断0无色1+一圈PAS颗粒2+两圈PAS颗粒3+三圈PAS颗粒4+红色大团块72造血检验专题知识讲座（八）、铁染色原理：

4Fe3++3K4「Fe(CN)6」含铁物质亚铁氰化钾

Fe4「Fe(CN)6」3+12K+

亚铁氰化铁74造血检验专题知识讲座结果判断细胞外铁：存在于骨髓小粒的巨噬细胞中的蓝色颗粒细胞内铁：存在于有核红和成熟红细胞内的铁；

75造血检验专题知识讲座细胞外铁76造血检验专题知识讲座第三节、骨髓活检观察结构和空间定位77造血检验专题知识讲座骨髓活检的适应症骨髓穿刺失败全血细胞减少白血病疗效观察78造血检验专题知识讲座临床评价

血液病诊断金标准：骨髓活检与穿刺涂片联合检测79造血检验专题知识讲座血细胞超微结构检验定义：在电子显微镜下结合各种超微结构技术，如酶细胞化学、放射自显影和X光衍射等，所观察到的血细胞微细结构。80造血检验专题知识讲座第六节血细胞染色体技术在血液病领域广泛应用（1960年Ph小体）81造血检验专题