甾体激素类药物的分析

关于甾体激素类药物的分析第一页，共八十页，2022年，8月28日基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111213141516171819第一节基本结构与分类母核第二页，共八十页，2022年，8月28日分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素第三页，共八十页，2022年，8月28日ABCD肾上腺皮质激素第四页，共八十页，2022年，8月28日第五页，共八十页，2022年，8月28日氢化可的松肾上腺皮质激素第六页，共八十页，2022年，8月28日肾上腺皮质激素醋酸地塞米松第七页，共八十页，2022年，8月28日第八页，共八十页，2022年，8月28日第九页，共八十页，2022年，8月28日雄性激素丙酸睾酮第十页，共八十页，2022年，8月28日蛋白同化激素苯丙酸诺龙第十一页，共八十页，2022年，8月28日孕激素第十二页，共八十页，2022年，8月28日孕激素结构特点第十三页，共八十页，2022年，8月28日孕激素第十四页，共八十页，2022年，8月28日雌激素

A环为苯环，C3位有酚羟基C3位有酚羟基

A环为苯环第十五页，共八十页，2022年，8月28日雌激素结构特点第十六页，共八十页，2022年，8月28日雌激素炔雌醇第十七页，共八十页，2022年，8月28日第十八页，共八十页，2022年，8月28日第二节理化性质与鉴别试验一、性状特征1.性状与溶解度：白色至微黄色粉末或结晶性粉末，在水中不溶或几乎不溶。2.熔点：具有鉴定意义，还可以反应药物的纯度。3.比旋度：多有手性碳原子，具有旋光性。4.吸收系数：具有紫外吸收。第十九页，共八十页，2022年，8月28日结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性

常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。第二十页，共八十页，2022年，8月28日2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯

常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。第二十一页，共八十页，2022年，8月28日3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应C17–乙炔基与AgNO3反应

常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。第二十二页，共八十页，2022年，8月28日4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯

常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。第二十三页，共八十页，2022年，8月28日二、化学鉴别法甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4

HCl（一）与强酸的呈色反应第二十四页，共八十页，2022年，8月28日与硫酸显色反应

显色荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙色清第二十五页，共八十页，2022年，8月28日（二）官能团的反应1.C17

–

α–醇酮基(还原性)肾上腺皮质激素+碱性酒石酸铜→Cu2O↓（红色）第二十六页，共八十页，2022年，8月28日甾酮激素类药物呈色羰基试剂2.酮基的呈色反应（C3–酮基和C20–酮基）常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼第二十七页，共八十页，2022年，8月28日具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色

亚硝基铁氰化钠间二硝基酚、芳香醛3.甲酮基第二十八页，共八十页，2022年，8月28日黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色不显色第二十九页，共八十页，2022年，8月28日黄体酮第三十页，共八十页，2022年，8月28日蓝紫色第三十一页，共八十页，2022年，8月28日雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基第三十二页，共八十页，2022年，8月28日含炔基的甾体激素银盐沉淀硝酸银5.炔基的沉淀反应↓第三十三页，共八十页，2022年，8月28日有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸-硝酸银AgCl↓呈蓝紫色第三十四页，共八十页，2022年，8月28日茜素氟蓝蓝紫色F-第三十五页，共八十页，2022年，8月28日7.酯的反应C17或C21位上有羟基的酯，一般先进行水解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。戊酸酯→戊酸（臭气）己酸酯→己酸（臭气）第三十六页，共八十页，2022年，8月28日△４-3-酮240nm苯环280nm三、UV法第三十七页，共八十页，2022年，8月28日第三十八页，共八十页，2022年，8月28日3300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1四、IR法3750～3300cm-1ν第三十九页，共八十页，2022年，8月28日醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯第四十页，共八十页，2022年，8月28日1630cm-1ν3420cm-1亚甲基、角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1第四十一页，共八十页，2022年，8月28日五、色谱法

薄层色谱法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法要求：供试品溶液所显主斑点的颜色和位置

与对照品溶液的主斑点相同。第四十二页，共八十页，2022年，8月28日

HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

方法：对照品法要求：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。第四十三页，共八十页，2022年，8月28日第三节特殊杂质与检查一、有关物质的检查（一）薄层色谱法

判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色第四十四页，共八十页，2022年，8月28日醋酸氟轻松检查其他甾体

取本品加氯仿-甲醇（9：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97:3）为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试第四十五页，共八十页，2022年，8月28日液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。12第四十六页，共八十页，2022年，8月28日

特点：

（1）简便易行，不需特殊的仪器；（2）不需对照品；（3）只能控制单个杂质的限量；（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。第四十七页，共八十页，2022年，8月28日（二）HPLC法（高低浓度对比法）

判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积第四十八页，共八十页，2022年，8月28日来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理：S二、硒的检查第四十九页，共八十页，2022年，8月28日三、有机溶剂（甲醇和丙酮）的检查甲醇不得出峰（灵敏度法）检测限=3.1ng丙酮≤5.0%

内标法+校正因子GC法第五十页，共八十页，2022年，8月28日四、游离磷酸盐的检查（对照品法）地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠第五十一页，共八十页，2022年，8月28日原理：方法：第五十二页，共八十页，2022年，8月28日第四节含量测定一、UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环

280nm（±）雌激素第五十三页，共八十页，2022年，8月28日二、比色法1.适用于非分光光度活性药物2.使待测组分光谱位移，避免干扰3.增加测定灵敏度4.增加选择性弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应第五十四页，共八十页，2022年，8月28日

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性OH-[还原]（一）四氮唑比色法（1）原理：第五十五页，共八十页，2022年，8月28日三苯甲臜↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）（2）种类第五十六页，共八十页，2022年，8月28日蓝四氮唑（BT）第五十七页，共八十页，2022年，8月28日双甲臜（暗蓝）第五十八页，共八十页，2022年，8月28日ChPTTC（RT）BPTTC（RT）USPBT40～45′暗（2）操作方法（对照品法）第五十九页，共八十页，2022年，8月28日

基团对反应速度的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16无论何种取代基ν↓（3）讨论第六十页，共八十页，2022年，8月28日

溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应——无醛无水乙醇醛→A↑——无水乙醇第六十一页，共八十页，2022年，8月28日

O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、快速、充N2第六十二页，共八十页，2022年，8月28日

碱的种类及加入顺序

反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行，以氢氧化四甲基铵的结果最佳。加入顺序：第六十三页，共八十页，2022年，8月28日

温度与时间t、℃↑→ν↑→甲臜分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h第六十四页，共八十页，2022年，8月28日（4）特点：

缺点影响因素太多

优点测定结果能指示药品的稳定性（氧化及降解产物无此反应）第六十五页，共八十页，2022年，8月28日2.其他比色法

异烟肼比色法

Kober反应比色法第六十六页，共八十页，2022年，8月28日异烟肼比色法

1.原理具有△4—3—酮基的肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合成异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。第六十七页，共八十页，2022年，8月28日2.讨论（1）溶剂的选择：无水甲醇或无水乙醇（2）酸的种类：HCl、H2SO4、HAc均可，且酸与异烟肼的摩尔比为2:1时可获得最大吸收。第六十八页，共八十页，2022年，8月28日（3）水分、温度、光线和氧的影响：

水分使反应逆转，温度使反应加快，具塞玻管中反应，光线和氧不影响。（4）关于反应专属性：在一定的反应条件下，只有C3-酮基起反应，故本法对△4-3-酮甾体具有专属性。第六十九页，共八十页，2022年，8月28日Kober反应比色法

Kober反应是指雌激素与硫酸-乙醇反应呈色，在515nm附近有最大吸收。可用于雌激素的比色法测定。

第七十页，共八十页，2022年，8月28日ChP（2005）、USP、BP、JP均采用RP-HPLC（大多内标法）特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快三、HPLC法第七十一页，共八十页，2022年，8月28日1．甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团

A.酚羟基

B.活泼次甲基

C.甲酮基

D.C17-α-醇酮基

E.酮基习题第七十二页，共八十页，2022年，8月28日2.用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是A．强酸性B．中性C．强碱性D．弱碱性E．以上都不对第七十三页，共八十页，2022年，8月28日3.问题（1）～（5）

A．维生素B1B．醋酸地塞米松

C．两者皆是D．两者皆不是（1）异烟肼比色法（2）硫色素反应（3）紫外分光光度法（4）绿奎宁（Thaciaquin）反应BACD第七十四页，共八十页，2022年，8月28日4.可用于氢化可的松鉴别的试剂有

A．氨制硝酸银

B．异烟肼

C．红四氮唑

D．硫酸

E．