自然科学07药品无菌检测技术

第七章

药品无菌检测技术中药和生物系1药物制剂的卫生学检查意义确定药物是否污染或其污染程度，控制药品的质量；保证用药的有效性和安全性；可作为衡量药品生产全过程卫生水平的根据之一。2药物微生物污染案例2009年2月，香港有15名病人被发现肠道感染毛霉菌，其中5人死亡。经过调查，在一百五十个药物样本中，发现「別嘌醇」含毛霉菌。再追查十六个「別嘌醇100毫克样本，证实全部帶菌，「每克药丸有超过一万个毛霉菌」。值得关注的是完全溶解「別嘌醇」後，才驗出毛霉菌。可见毛霉菌並非存在於药瓶、药物表面，而是药里面，说明是药品在生产时被污染出3药物制剂的卫生学检查两种情况无菌检查微生物限度检查4第一节

药品无菌检测概述中药和生物系5一、药品无菌检测概念及意义相关概念㈠无菌检查：用于确定要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及要求无菌的其他用品是否染有活菌的一种方法。无菌制剂：即规定用无菌法制备或制备后经无菌处理的不含活的微生物的药物。需氧菌厌氧菌真菌6一、药品无菌检测概念及意义意义㈡确定药物是否污染。控制药品的质量，保证用药的有效性和安全性都具有重要意义。同时也可作为衡量药品生产全过程卫生水平的重要根据之一。7一、基础知识需做无菌检查的制剂㈢注射剂：注射液、注射用无菌粉末、注射用浓溶液眼用制剂：眼用液体制剂、眼用半固体制剂、眼用固体制剂等用于烧伤、溃疡或严重创伤等外用药物制剂：软膏剂、乳膏剂、气雾剂、喷雾剂、散剂、耳用制剂（用于手术、耳部伤口或耳膜穿孔的滴耳剂与洗耳剂）、鼻用制剂、冲洗剂、涂剂、洗剂、涂膜剂、凝胶剂。植入剂:植入性硅橡胶、植入性生物降解材料其他：透析液，可吸收止血剂等8一、药品无菌检测概念及意义无菌检查环境和人员要求㈣环境要求:无菌室内进行。背景洁净度10,000级下的局部100级，单向流空气。操作人员：卫生、着装符合要求。操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。无菌检查环境和人员要求㈣9正确进行样品采集（取样量及比例按药典规定）严格进行无菌操作无菌检查取样量及比例需按药典规定无菌操作工作区与工作台面必须进行洁净度验证一、药品无菌检测概念及意义无菌检查的基本原则（五）10

级别项目100级1万级10万级30万级悬浮粒子(个/m3)≥0.5um≤3,500≤350,000≤3,500,000≤10,500,000≥5um0≤2,000≤20,000≤60,000沉降菌(90mm皿沉降0.5h菌落/皿)≤1≤3≤10≤15浮游菌(个/m3)≤5≤100≤500≤1000GMP空气洁净度标准11二、药品无菌检测概况利用无菌操作，将药品分别加入适合需氧菌、厌氧菌和真菌生长的液体培养基中，置于适宜温度下培养一段时间，观察有无微生物生长，由此判断药品是否合格。无菌检查原理㈠12二、药品无菌检测概况1.检查项目（1）阴性对照试验：稀释液+培养基，应无菌生长。（2）阳性对照试验：供试品+阳性对照菌+培养基，应有菌生长。（3）供试品检查：供试品+培养基，有菌生长，判不符合规定；无菌生长，判符合规定无菌检查方法㈡13二、药品无菌检测概况2.检查数量和检查量（p130）检查数量与批产量、检品来源有关检查量与装量有关无菌检查方法㈡14产品每批产品数量/个最低检验量小体积注射剂≤

10010%或4个（取较多者）100＜

N≤50010个＞5002%或20个（取较少者）大体积注射剂2%或10个（取较少者）眼用及其他非注射产品≤2005%或2个（取较多者）＞20010个桶装固体原料≤4每个容器5＜

N≤1020%或4个容器＞502%或10个容器二、药品无菌检测概况

批出厂无菌制剂无菌检查的最少检验数量15二、药品无菌检测概况3.培养基、培养温度、培养时间无菌检查方法㈡检查菌培养基名称装量培养温度培养时间细菌硫乙醇酸盐流体培养基≥15ml30℃～35℃14天真菌改良马丁培养基≥10ml23℃～28℃14天16培养基概念和必备条件培养基的概念：由人工配制的、适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物用的营养基质。培养基的必备条件营养物的浓度与比例应恰当适宜的酸碱度适当的物理状态本身必须是无菌的。17培养基的配制程序：称量加水加热溶解补足水分调节pH分装包扎、标记高压灭菌需氧菌、厌氧菌培养基真菌培养基无菌检查用培养基18二、药品无菌检测概况4.检查方法无菌检查方法㈡薄膜过滤法直接接种法19第二节

药品无菌检测方法中药和生物系20无菌检查方法

阳性对照试验和阴性对照试验阳性对照试验=阳性对照菌液+供试品金黄色葡萄球菌（无抑菌作用或抗G+菌）大肠埃希菌（抗G-菌为主的供试品）生孢梭菌（抗厌氧菌的供试品）白色念珠菌（抗真菌的供试品）阳性对照菌选用原则阴性对照试验：以无菌检查所用稀释剂做阴性对照，不得长菌21一、直接接种法接种量培养基项目好氧、厌氧菌培养真菌培养硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基供试品：每种培养基各若干支（与检查数量有关）若干ml（与装量有关）若干ml（与装量有关）阳性对照：供试品＋阳性对照菌菌液若干ml（供试品）+1.0ml（菌液）或：若干ml(供试品)+1.0ml（菌液）阴性对照若干ml稀释液若干ml稀释液培养温度30～35℃23～28℃培养时间14天（阳性对照48～72小时）22一、直接接种法

直接接种法注意点：接种量不得大于培养基体积的10%；硫乙醇酸盐液体培养基不得少于15ml改良马丁培养基不得少于10ml硫乙醇酸盐流体培养基于30～35℃培养14天

改良马丁培养基于23～28℃均培养14天23二、薄膜过滤法封闭式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器24无菌检查

薄膜过滤法25薄膜过滤法50ml硫乙醇酸盐流体培养基50ml改良马丁培养基阳性对照30～35℃14天23～28℃14天26二、薄膜过滤法改良马丁培养基硫乙醇酸盐流体培养基阳性对照培养观察结果，写检验记录取规定量供试品预处理滤膜过滤冲洗滤膜27三、结果判断供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。当符合（p134）至少一个条件时，可判试验结果无效。并取同量供试品重试。？28结果判断当符合下列至少一个条件时，方可判试验结果无效：

无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法的要求；回顾无菌试验过程，发现有可能引起微生物污染的因素；阴性对照管有菌生长；供试品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验中所使用的物品和（或）无菌操作技术不当引起的。29第三节

药品无菌检测方法实例中药和生物系30注射剂的无菌检查实训目的掌握常用注射剂的无菌检查的方法及其结果分析与判断；熟悉无菌检查使用的培养基；能够规范书写检验报告书。31注射剂的无菌检查实训原理方法是按规定取一定量的检品，严格按照无菌操作技术，接种至需、厌氧培养基、真菌培养基中，在适宜的温度下培养一定时间，观察有无细菌、真菌生长，以判断检品是否无菌、是否合格。主要程序如下32注射剂的无菌检查实训材料1仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、烧杯、量筒、试管、吸量管、电热套、pH精密试纸、酒精灯、火柴等。2试剂：酪胨、氯化钠、葡萄糖、刃天青、L-胱氨酸、硫乙醇酸钠（或硫乙醇酸）、酵母浸出粉、牛肉浸出粉、蛋白胨、硫酸镁、磷酸氢二钾、琼脂等。4供试品：规格10ml葡萄糖酸钙注射液3阳性试验菌：金黄色葡萄球菌33注射剂的无菌检查实训过程1实训用液、培养基的配制和仪器的包扎

②配制0.9％无菌氯化钠溶液

（稀释液）③配制试液和指示液：碘酒溶液、75％乙醇溶液①制备金黄色葡萄球菌菌悬液，用作阳性对照菌④制备营养肉汤培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基⑤包扎1.0ml吸量管若干支。⑥包扎好的物品、稀释液和培养基，贴标签，统一灭菌，备用。

34注射剂的无菌检查实训过程2直接接种法取若干支供试品11支，消毒后，用砂轮在安瓿颈部划一环行线，再用75％酒精棉球将碘酒擦净，待干，打开颈部后，按下表中的要求接种供试品管、阳性对照管和阴性对照管。35表无菌检查接种及其培养培养基好氧、厌氧菌培养真菌培养硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基供试品：每种培养基10支2.0ml2.0ml阳性对照2.0ml（供试品）1.0ml（阳性对照菌液）－阴性对照－－培养温度30℃~35℃23℃~28℃培养时间14天（阳性对照48~72小时）14天2023/1/1236注射剂的无菌检查实训过程3结果判断阴性对照管应澄清无菌生长

阳性对照管细菌应生长良好供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定。37注射剂的无菌检查实训过程3结果判断除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品，按上述方法复试重试，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长，判供试品不符合规定。判断说明38注射剂的无菌检查实训过程填写记录单