帕金森病模型定稿

帕金森病模型定稿帕金森病又称震颤麻痹，是一种由于脑内黑质纹状体通路多巴胺缺乏所致的，在老年人中常见的进展性中枢神经系统退行性疾病。此病主要病理特征为黑质多巴胺()能神经元缺失及胞质内包涵体路易小体()出现主要病症静止性震颤肌强直运动缓慢体位不平衡、步态紊乱焦虑、睡眠障碍等非运动病症脊髓前角运动神经元调节运动功能黑质纹状体作用过程正常帕金森病多巴胺多巴胺乙酰胆碱乙酰胆碱首先在1817年对帕金森病的临床表现进展了描述。当时，对的发病机制几乎一无所知。直到20世纪50年代等对啮齿类动物注射利血平后，使动物产生类似样病症，这是最早建立的动物模型。

动物模型的开展随着对儿茶酚胺特异性神经毒素六羟基多巴胺(6，6)的认识，在1968年等人成功地建立6动物模型。之后，于1983年等报道了利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6四氢吡啶()制作小鼠和猴的动物模型。在国内，周厚广等用两点注射法将6注入大鼠一侧的黑质及内侧前脑束，成功率高达71.1%，电镜观察可见中脑黑质神经细胞普遍存在变性坏死及不同阶段的凋亡改变，可以较快地建立稳定地成功率较高的类似于人类中晚期帕金森病行为和病理的大鼠模型。随着研究的深入，相继出现了、3+及机械损伤的动物模型，根据研究目的的不同，选择不同的动物模型。帕金森病动物模型的制备为模拟人类，理想的动物模型应具备以下一些特点：〔1〕多巴胺能神经元在出生时数量及形态正常，青年时期开场逐渐选择性地减少，减少量超过50％，且容易通过神经化学和神经生理学的方法检测到；〔2〕模型应能容易检测其运动功能的损伤，包括运动缓慢、肌僵直和静止性震颤等的主要病症；

〔3〕模型应能显示出路易小体的形成；〔4〕如果模型是遗传性的，应基于单一突变而使突变模型有着强大的传播能力；〔5〕模型应有相对较短的疾病周期〔如数月〕，以使药物筛选得以经济、快速地进展。

①通过在大鼠的黑质或内侧前脑束注射6羟多巴胺〔6〕②通过对模型动物(如:猴、小鼠、猪等)进展1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶〔〕的管饲法和立体定位注射等方法国际通用国内应用较多是两种方法：模型制备方法前者是较精典的模型制备的方法，也是在国内较早开展的，但是由于神经元的毁损出现的较早，这与临床病人的中脑黑质多巴胺能神经元的渐进性死亡不同；近距离的毁损很难把握毁损的程度，这使得采用这种方法获取局部损毁的模型的成功率很低；存在的问题较之前者采用管饲法和立体定位注射方法，在国内最近几年才运用到帕金森动物模型的制备，国外已经利用在猴和小鼠身上建立了较为理想的模型，制备通常采用皮下、静脉、腹腔注射和肌肉给药，具有方法可靠且重复性较好。但是其危险性较高，对于试验人员和试验条件有着严格的要求模型制备应用6制备偏侧鼠模型应用制备动物模型其它建模方法应用6制备偏侧鼠模型1〕雄性大鼠，体重230～250g2〕戊巴比妥钠(30)麻醉后，固定于立体定向仪3〕参照大鼠脑立体定位图谱,取两个靶点，将12µg6-立体定向注射于右侧黑质a、b两个靶点(每点注射量6µg，浓度2µg／µl，溶解于含0.1%抗坏血酸的生理盐水中)。注射速度0.3µl／．注毕留针15。应用制备动物模型灵长类模型恒河猴戊巴比妥腹腔麻醉下，切开颈部皮肤，暴露一侧颈总动脉。将新鲜配制的按1.0～1.5／体重溶于2生理盐水中，逆血流方向缓慢注入血管中。假设动物在第1次手术后病症不明显，分别在每隔5d后又给予第2～4次注射，直至病症出现。小鼠模型小鼠对的敏感性存在种系和年龄的差异。一般选10~12周龄，体重25~30g成年C57褐鼠，按体重30~40／腹腔注射，连续7d。于第6~7次注射后出现暂时性(2~3h)躯干震额、竖毛、尾巴过伸、动作减少及爬杆试验障碍利血平主要可以通过抑制去甲肾上腺素能神经元末梢的再摄取功能，使囊泡内贮存的多巴胺()及其他的儿茶酚胺类递质耗竭。将雄性大鼠(体重280—300g)腹腔内注射一定剂量的利血平后可使其出现骨伤肌慢硬、震颤、身体屈曲、运动过少以及其他的一些运动病症。神经化学分析发现大鼠纹状体内和其他单胺类递质的含量明显减少利血平模型其它建模方法它存在明显的缺乏：一是药物注射造成的运动障碍在不同时间和不同个体之间变异性较大；二是利血乎同时引起了多种递质释放并且无法造成类似的病理改变。因此该模型的应用只局限于探索药物影响肌僵状态的实验中，对其他的运动病症的研究现已很少应用1991年在雄性大鼠(250~300g)单侧黑质内注射3+三周后可使其出现明显的运动行为改变，表现为在新环境中自主运动减少，短暂的僵直病症及自发的同测旋转行为。3+模型研究发现机械损伤内侧前肋束(可以造成黑质内的能神经元进展性死亡。已经建立的造模方法有独突切断术和中脑半切术，尤以前者应用较多。机械损伤模型用该方法造模有如下优点：①成功率高，较为经济。②黑质能神经元呈现渐进性死亡，可以模拟病理变化的全过程，对于研究神经元的再生和的预防有一定的意义。缺点是切断术后短时间内，损伤的程度不稳定。6大鼠模型：在注射6后连续6周进展行为学检测，用阿朴吗啡腹腔注射，1～5分钟后出现旋转,旋转时以健侧后肢为支点,身体向健侧弯曲,首尾相接,原地转动。有的甚至出现翻转,有的呈小环行旋转，速度>7视为成功模型。通过旋转记录仪计算一定时间内旋转的总次数，可以粗略估计大鼠脑内能神经元的死亡程度。动物模型的评价行为学测试致灵长类模型：腹腔注射或静脉注射第2天，动物即出现自发性运动减少，呈进展性加重，以至于运动不能，弓背姿势，四肢紧张性弯曲，肌强直伴震颤，吞咽困难，不能进食及发音减弱。小鼠模型：爬杆实验：将一直径为25的软木小球固定于一根长50、粗1的木杆顶部,木杆上缠上纱布以防打滑，然后将被测小鼠放到小球上，并记录以下时间：小鼠从小球上下来所需的时间，小鼠爬完秆子的上半部和下半部所需的时间。游泳实验：将受试小鼠放入一个20×30×20的水箱中，水温为22℃～25℃。假设在受试时间内能连续不断的游泳者记3分，大局部时间游泳仅偶尔漂浮者记2.5分，漂浮时间占整个受试时间50%以上者记2.0分，偶尔游泳者记0.5分，偶尔用后肢游动并漂浮在一起者记1.0分。以正常小鼠作为对照，最后计算得分情况，并作统计学分析。将动物麻醉后，用0.9%盐水和4%多聚甲醛灌注固定，连续冰冻切片，行酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色。毁损一侧黑质和腹侧背盖区的阳性神经元明显消失，而同一脑片健侧可见大量阳性神经元。形态学评价

利用高效液相2电化学法测定模型黑质及纹状体中多巴胺及其代谢产物高香草酸()含量，结果发现各种动物模型毁损侧黑质、纹状体内、含量均显著降低。神经生化改变

治疗金刚烷胺左旋多巴抗胆碱能药物多巴胺受体冲动剂抗胆碱能药物药物：东莨菪碱、盐酸苯海索作用：1、能维持纹状体的递质平衡2、对震颤和肌强直有效金刚烷胺1、促进神经末梢释放多巴胺，并阻止其再摄取；2、能改善震颤、肌强直和运动缓慢等病症。左旋多巴制剂左旋多巴合并多巴脱羧酶抑制剂是目前最有效的药物。对各期病人都有效，但一般主张病人出现姿势平衡障碍或工作受到影响时使用，它对运动缓慢和肌强直疗效好，对震颤亦有效。多巴胺受体冲动剂1、早期：可延缓多巴胺代替药物的使用；2、中晚期：改善病症，并减少替代药物的用量。随着对的发病机制研究的不断深入，目前，已有学者应用患者血清、脂多糖()、铁离子(3+)、32氮基酪氨酸注射于单侧黑质来建立偏侧大鼠模型。等已成功地制备了α转基因小鼠和转基因果蝇，高表达人类α的转基因小鼠具有的局部特征。总之，目前建立的动物模型都是使动物在短时间内出现帕金森病的病症或病理变化，很难模仿帕金森病这一神经系统的慢性疾病的自然进程。因此，获得一种更为理想的帕金森病动物模型，将更有利于对帕金森病的发病机制及实验治疗进展深入研究。机遇与挑战

除上述模型，等还建立了动物模型。为一种蛋白酶体抑制剂，此模型为研究人类相关的运动障碍和病理病因学提供了一个很有价值的平台。目前，在常染色体显性家族患者脑内发现的高表达突变的亮氨酸丰富区重复激酶2(22，2)在发病过程中可能具重要作用，为建立新的基因模型提供了理论根底。此外，采用细菌人工染色体(，)技术介导α转基因鼠模型也将成为今后研究致病机制的有力工具。

尽管目前尚无完全理想的模型,但随着分子发病机制研究的逐步深入，相信动物模型的建立将更日臻完善。参考文献1、王彦永，顾平.建立帕金森病动物模型的研究进展，中风与