液相实验室相关知识培训

液相实验室相关知识培训目录01.

仪器项目工作流程02.防腐剂色素喹诺酮瘦肉精毒素03.流动相，建仪器方法排序列，建数据处理方法，处理数据，导出图谱，写记录04.

误差的来源项目前处理影响检测结果因素液相实验室基本知识上机检测，处理数据，写记录检测设备仪器：液相／液质检测器ＤＡＤ／ＰＤＡ检测器（紫外，二极管荧光检测器（柱后衍生系统）RI检测器LC－MS-MS主要对应项目防腐剂，农残，维生素，色素,毒素等毒素，农残，维生素等甜味剂等农残，兽残等色谱法原理利用混合物中各组分在不同的两相中溶解，分配，吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使各组分在两相中反复多次受上述各作用力而达到相互分离液相色谱基本原理Waters超高效液相色谱仪溶剂（流动相）检测器（检测样品）检测器（检测样品）色谱柱（固定相）自动进样器（进样）泵（提供动力）1.基本原理——仪器介绍色谱柱2.检测器2.1紫外检测器2.2荧光检测器2.3示差检测器2.4蒸发光散射检测器1紫外检测器和二极管阵列检测器紫外检测器二极管阵列检测器适用于大部分项目检测：具有紫外吸收且在仪器检测波长范围内，例如：苯甲酸、山梨酸、糖精钠等。2.2荧光检测器可检测具有荧光特性的物质，如：苯并芘，罗丹明等。不直接具备荧光特性的可以使用柱后衍生系统使其具备荧光特性后检测，如：黄曲霉毒素，氨基甲酸酯类农药等。2.3示差检测器测定流通池中溶液折射率来测定各组分浓度，例如各类糖类且无紫外吸收，如：三氯蔗糖4蒸发发射检测器碳水化合物未衍生的氨基酸脂肪酸等色谱柱1.基本原理自动进样器泵MS检测器PEQsight220/A30超高效液相色谱质谱联用仪流动相样品引入1.液质基本原理液相色谱质谱联用基本原理液态样品发生离子化及其碎片离子在电场和磁场中被筛选分离。其离子在检测器上被检测产生信号，与其在样品中浓度大小成正比，它通过测定分子质量和相应的离子电荷(质荷比m/z)实现样品中分子结构的分析液相主要检测项目防腐剂富马酸二甲酯，过氧化苯甲酰，脱氢乙酸，苯甲酸，山梨酸，糖精钠，纳他霉素，丙酸，双乙酸钠抗氧化剂等酸/甜味剂甜菊糖苷，阿斯巴甜，阿力甜，苹果酸，甜蜜素，安赛蜜，三氯蔗糖(HLB亲水亲酯)，纽甜（C18)，乳糖,蔗糖，麦芽糖，果糖，葡萄糖等毒素苯并芘（分子印迹柱），三聚氰胺，展青霉素，赭曲霉毒素，玉米赤霉烯酮，黄曲霉毒素，呕吐毒素(免疫亲和柱)农残氟虫腈，吡蚜酮，克百威，灭线磷，氧乐果，茚虫威，丙溴磷，涕灭威，灭多威，甲奈威，甲霜灵，多菌灵，氯唑林，硫线磷，烯草酮，氯吡脲，甲维盐，氟虫腈，啶虫脒，草甘膦，唑螨酯，唑虫酰胺，辛硫磷，烯酰吗啉，嘧酶胺，哒螨灵，丙环唑，吡虫啉，百草枯，敌草快阿维菌素灭蝇胺等兽残磺胺，硝基咪唑，金刚烷胺，氟苯尼考，地西泮，呋喃类，土霉素，四环素，多西环素，金霉素，沙丁胺醇，莱克多巴胺，克伦特罗，氯霉素，喹诺酮，五氯酚那，替米考星，尼卡巴嗪，氯丙嗪，喹乙醇等等(乳蛋肉蜂蜜）（国标农业部出口标准BJS检验检测标准补充方法）色素姜黄素，胭脂红（卤肉），苋菜红，新红，柠檬黄，日落黄，亮蓝，罗丹明B，β胡萝卜素，酸性橙，酸性红，赤藓红，诱惑红，苏丹红

甲醛次硫酸氢钠等(5009.359695219161743聚酰胺粉吸附）其他添加剂香兰素，乙基麦芽酚，牛磺酸，维生素AB族CD(2.3)EK1，烟酸烟酰胺等其他游离棉酚，茶多酚，儿茶素，对氯苯，6BA，那非，西布曲明，罂粟碱，吗啡，可待因，那可丁，蒂巴因等羟甲基糠醛，液相工作流程下发项目-统计项目-安排前处理-按项目02

前处理步骤及一些前处理设备

样品前处理：对一系列经前处理后的样品进行定性和定量分析，其结果的可靠性和准确性将取决于这些处理过程是否会将待测组分丢失或使待测组分发生一些不可预测的变化。进行食品中残留分析，面临基质复杂多样，待测组分多为微量或痕量等问题，因此必须采取适当的前处理方法，去除基质干扰，分离富集待测组分，提高检测灵敏度和准确性。检验项目多，食品基质复杂多样，同一标准因样品基质不同前处理也不同，同一个项目因基质不同所以标准不同进而前处理也不同，今天我给大家分享一些前处理步骤及用到的一些前处理设备，和几个项目的前处理。食品残留前处理一般包括：样品提取，净化，浓缩和衍生化样品前处理称取样品：按国标，用天平准确称取所需质量的样品。前处理重点步骤提取：根据检测项目选择合适的提取剂：提取剂水，酸（乙酸，盐酸等），碱（NaOH溶液等），盐（EDTA溶液，乙酸铵溶液等），有机溶剂（甲醇，乙腈，乙酸乙酯正己烷等注：特殊项目不能直接提取，需要衍生后才能提取，如喹乙醇，呋喃，β-受体激动剂（俗称瘦肉精），有些项目皂化酶解等。加提取剂后选择涡旋混匀，超声，震荡等方式进行充分提取。前处理重点步骤净化：根据国标常用的有几种净化方法净化剂净化：根据样品机制选择合适的QuEChERS试剂净化液液萃取净化：主要用分液漏斗SPE小柱净化：根据目标物选择合适的SPE小柱，用固相萃取装置净化浓缩根据检测浓度需求选择浓缩或者稀释。浓缩：液体量多的选择减压旋蒸，液体量少的选择氮吹复溶过滤上机检测数据处理建立标准曲线调整标准曲线线性，一般线性相关系数要大于0.995.添加样品数据对于检出的样品判断是否为假阳性，根据出峰时间，吸收波长，离子峰度比，加标样品等判断。阳性样品检出值计算是否超过限值，超过限值需要进行复测。保存图谱，写原始记录部分项目的一些危害及部分项目前处理步骤食品前处理是食品检测的关键步骤，前处理步骤就是提取浓缩被测物质，消除基质干扰，保护仪器，提高方法的准确性，精密性。防腐剂（苯甲酸，山梨酸糖精钠）是指天然或合成的化学成分，用于加入食品、药品、颜料、生物标本等，以延迟微生物生长或化学变化引起的腐败。合成色素

人工合成色素是指用人工化学合成方法所制得的有机色素，主要是以煤焦油中分离出来的苯胺染料为原料制成的。危害包括一般毒性、致泻性、致突性(基因突变)与致癌作用。特别是偶氮化合物类合成色素的致癌作用更明显喹诺酮类1喹诺酮类药物会引起患者肠胃不适(2)服用剂量过大、时间过长会导致患者出现头晕、头疼和四肢麻烦的症状(3)部分患者服用喹诺酮药物后会出现过敏、皮疹、荨麻疹(4)滥用喹诺酮类药物也会产生耐药性。(5)大量或是长期使用会造成肝脏损伤。黄曲霉毒素抑制蛋白质合成损害肝脏等器官致使人体急性中毒（剧毒）诱发癌症β-受体激动剂人食用含瘦肉精的猪肉后会出现头晕、恶心、手脚颤抖、心跳加速甚至心脏骤停致昏迷死亡，特别对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病和甲状腺机能亢进等患者有极大危害。糕点

GB5009.28—2016

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1原理：样品经水提取,高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白,采用液相色谱分离、紫外检测器检测,外标法定量。2试样制备取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合;非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆;固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀;奶酪、黄油、巧克力等采用50℃~60℃加热熔融,并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中,密封,液体试样于4℃保存,其他试样于-18℃保存。试样提取1一般性试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min离心5min,将水相转移至50mL容量瓶中,于残渣中加水20mL,涡旋混匀后超声5min,于8000r/min离心5min,将水相转移到同一50mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜,待液相色谱测定。注:碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。2含胶基的果冻、糖果等试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加水约25mL,涡旋混匀,于70℃水浴加热溶解试样,于50℃水浴超声20min,之后的操作同1。3油脂、巧克力、奶油、油炸食品等高油脂试样准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中,加正己烷10mL,于60℃水浴加热约5min,并不时轻摇以溶解脂肪,然后加氨水溶液(1+99)25mL,乙醇1mL,涡旋混匀,于50℃水浴超声20min,冷却至室温后,加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL,混匀,于8000r/min离心5min,弃去有机相,水相转移至50mL容量瓶中,残渣同1再提取一次后测定。3仪器参考条件色谱柱:C18柱,柱长250（150）mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱。2流动相:甲醇+乙酸铵溶液=5+95。3流速:1mL/min。4检测波长:230nm。5进样量:10μL饮料

GB5009.35—2016

食品中合成着色剂的测定原理:食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离,根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。1试样制备:.1果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100mL烧杯中。含二氧化碳样品加热或超声驱除二氧化碳。2配制酒类:称取20g~40g(精确至0.001g),放入100mL烧杯中,加小碎瓷片数片,加热驱除乙醇。3硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等:称取5g~10g(精确至0.001g)粉碎样品,放入100mL小烧杯中,加水30mL,温热溶解,若样品溶液pH较高,用柠檬酸溶液调pH到6左右。4巧克力豆及着色糖衣制品:称取5g~10g(精确至0.001g),放入100mL小烧杯中,用水反复洗涤色素,到巧克力豆无色素为止,合并色素漂洗液为样品溶液.2色素提取1聚酰胺吸附法:样品溶液加柠檬酸溶液调pH到6,加热至60℃,将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状,倒入样品溶液中,搅拌片刻,以G3垂融漏斗抽滤,用60℃pH为4的水洗涤3次~5次,然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤3次~5次(含赤藓红的样品用5.2.2法处理),再用水洗至中性,用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3次~5次,直至色素完全解吸,收集解吸液,加乙酸中和,蒸发至近干,加水溶解,定容至5mL。经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析。2:液-液分配法(适用于含赤藓红的样品):将制备好的样品溶液放入分液漏斗中,加2mL盐酸、三正辛胺-正丁醇溶液(5%)10mL~20mL,振摇提取,分取有机相,重复提取,直至有机相无色,合并有机相,用饱和硫酸钠溶液洗2次,每次10mL,分取有机相,放蒸发皿中,水浴加热浓缩至10mL,转移至分液漏斗中,加10mL正己烷,混匀,加氨水溶液提取2次~3次,每次5mL,合并氨水溶液层(含水溶性酸性色素),用正己烷洗2次,氨水层加乙酸调成中性,水浴加热蒸发至近干,加水定容至5mL。经0.45μm微孔滤膜过滤,进高效液相色谱仪分析。5.3仪器参考条件1色谱柱:C18柱,4.6mm×250mm,5μm。2进样量:10μL。.3柱温:35℃。4二极管阵列检测器波长范围:400nm~800nm,或紫外检测器检测波长:254nm。5.3.5梯度洗脱表见表GB5009.35—2016

食品中合成着色剂的测定

CNWPoly-seryGB5009.35-2016食品中合成着色剂专用SPE小柱使用说明书样品前处理果汁，果酱基质1g试样于50mL离心管中，加入6mL去离子水，涡旋30s，超声振提取15min，4000rpm离心6min，取上清液。剩余残渣再加入6mL去离子水，重复操作一次，合并两次上清液。用20%柠檬酸溶液调节待净化溶液至pH3~4.面粉，玉米粉基质：1g试样于50mL离心管中，加入氨水：70%甲醇水(V/V=1：99)10mL作为提取剂提取，涡旋15s，超声15min，4000r/min离心6min，再加入10mL，10mL提取剂重复2次；合并上清液离心，取上清液，旋转蒸发至约5mL，用20%柠檬酸溶液调节pH至3~4，待小柱净化活化5mL甲醇平衡5mL去离子水上样全部待净化液过柱，流速控制在3-5mL/min，淋洗5mL甲醇甲酸水(4：2：4)洗脱10%氨水甲醇3mL*2次仪器分析氮吹近干，约200μL左右，50%流动相A+50%流动相B定容至1mL涡旋，过0.22μm滤膜，待上机.鸡肉鸡蛋鱼GB/T21312-2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法方法提要：用0.1mol/LEDTA-Mellvaine缓冲液(pH4.0)提取样品中的喹诺酮类抗生素，经过滤和离心后，上清液经HLB周相萃取柱净化。高效液相色谱-质谱/质谱测定，用阴性样品基质加标外标法定量制样方法：制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化1动物肌肉和动物内脏，将场采集的样品放入小型冷冻箱中运输到实验室，在一10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻动物组织样品去筋、捣碎均匀..2牛奶：将现场采集的样品放人小型冷冻箱中运输到实验室，在一10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜或冷冻解冻的样品混合均匀。3鸡蛋：将现场采集的样品放人小型冷冻箱中运输到实验室，在--10℃以下保存，一周内进行处理。取适量新鲜的样品，去壳后混合均匀。提取与净化1提取.1.1动物肌肉姐织、肝脏，肾脏称取均质试样5.0g(辆到0.1g)，于50mL聚丙烯离心管中、加人20mL0.1mol/LEDTAMcllvaine缓冲溶液，.1000r/min涡旋混合11min.超声提取10min，1000r/min离心5min(温度低于5T)，提取三次，合并上清液。

GB/T21312—2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法1.2牛奶和鸡蛋称取均质试样5.0g(精确到0.0lg)，置于50mL.聚丙烯离心管中，用40mL0.1mol/LEDTA-Mellvaine缓冲溶液(5.12)溶解，1000r/min旋涡混合!min，超声提取10min，10000r/min离心10min(温度低于5℃)，取上清液。2净化HLB固相萃取柱(200mg；6mL)，使用时用6mL甲醇洗涤、6mL水活化.将提取的溶液以2mLmin~3mL/ti的速度过柱，弃去滤液，用2mI.5%甲醇水溶液(5.13)淋洗，弃去淋洗液，将小柱抽干，再用6mL甲醇洗脱并收集洗脱液。洗脱液用氮气吹干、用1mL0.2%甲酸水溶液(5.14)溶解，1000r/min旋浏混合1min，用于上机测定。3基质加标标准工作曲线的制备将混合标准工作液用初始流动相逐级稀释成2.5μg/L~100.0μg/L的标准系列溶液。称取与试样基质相应的阴性样品5.0g，加人标准系列溶液1.0mL，按照与试样同时进行提取和净化。8高效液相色谱-质谱/质谱测定

GB/T21312—2007动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法1色谱柱：WatersACQUITYUPL.CTBEHC18柱100mmmn×2.1rnm，1.7yurn)或其他等效柱。2流动相：A[40+60甲醇-乙腈溶液(5.5)]；B[0.2%甲酸水溶液(5.14)]梯度淋洗3流速：0.2mL/min.4柱温：40℃.5进样体积：20uL.2质谱条件电离模式：电喷雾电离正离子模式(ESI+)；质谱扫描方式：多反应监测(MRM)；分辨率：单位分辨率：其他参考质谱条件见附录A，定性定量分析导图谱写记录GB/T21311-2007动物源性食品中硝基呋类药物代谢物残留量检测方法GB/T21311-2007动物源性食品中硝基呋类药物代谢物残留量检测方法GB/T21311-2007动物源性食品中硝基呋类药物代谢物残留量检测方法GB/T21311-2007动物源性食品中硝基呋类药物代谢物残留量检测方法GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定

第三法高效液相色谱-柱后衍生法导语：下述方法的仪器检测部分，包括碘或溴试剂衍生、光化学衍生、电化学衍生等柱后衍生方法，可根据实际情况，选择其中一种方法即可。原理试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2，用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取，提取液经免疫亲和柱净化和富集，净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离.柱后衍生(碘或溴试剂衍生、光化学衍生、电化学衍生等)，经荧光检测器检测，外标法定量。免疫亲和柱：AFTB柱容量≥200ng，AFTB，柱回收率≥80%，AFTG的交叉反应率≥80%(验证方法参见附录B)。注：对于每个批次的亲和柱使用前需质量验证。警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光(直射阳光)、具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施。黄曲霉毒素是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢产物。粮食未能及时晒干或储藏不当时往往被黄曲霉菌或容寄生曲霉菌污染而产生此类毒素。比较容易受污染的食物是玉米、花生、大米，其次是大麦、小麦，大豆一般不易受到污染。另外，黄曲霉毒素在热带和亚热带的核果类和谷类上也较为常见。是独立致癌危险因素之一。GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定样品提取及稀释：大米、玉米、小麦、坚果、调料、花生及其制品：19准确称取试样25.0于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及准确加入125.0mL甲静水(7+3)，以均质器高速搅拌提取2min。槽纹滤纸，准确移取15.0mL滤液并加入30.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。植物油脂：准确称取试样25.0g于250mL具塞锥形瓶中，加入5.0g氯化钠及入125.0mL甲醇-水(7+3)，以均质器高速搅拌提取2min。槽纹滤纸过滤，准确移取或15.0mL滤液并加入30.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。酱油：称取试样50.0g于250.0mL具塞锥形瓶中，加入2.5g氯化钠及加入甲醇-水(8+2)至100.0mL，以均质器高速搅拌提取1min。槽纹滤纸过滤，准确移虑取10.0mL滤液并加人40.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。食醋：准确称取5.0g样品，加入1.0g氯化钠，以pH7.0磷酸盐缓冲溶液稀释至25.0mL，混匀，定量滤纸过滤。取10.0mL滤液加入10.0mLpH7.0磷酸盐缓冲溶液，混匀。以玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定样品的净化黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的柱容量(最大吸附黄曲霉毒素B1量)为300ng，当样品中黄曲霉毒素超过测定范围时，请适当减小上柱体积，使其在检测范围内，计算出准确含量。大米、玉米、小麦、坚果、调料、花生及其制品、植物油脂：将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min(1滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2~3mL空气通过柱体。以2-3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL水淋洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入2.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min~2mL/min(1滴/秒)，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。酱油和食醋：将免疫亲和柱连接于10.0mL玻璃注射器下。准确移取10mL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2mL/min(1滴/秒)流速缓慢通过免疫亲和柱。以2-3mL/min(1-2滴/秒)流速用10.0mL0.1%的吐温/PBS清洗，再以10.0mL水清洗柱子2次，弃去全部流出液，并使2mL~3mL空气通过柱体。准确加入2.0mL色谱级甲醇洗脱，流速为1mL/min~2mL/min(1滴/秒)，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。GB5009.22-2016食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定注意事项1)