植物生物学实验植物种子生命力快速测定

植物生物学实验植物种子生命力快速测定种子生命力

指种子的萌发能力。种子生命力测定的常规方法发芽实验、浮力实验

种子生命力快速测定的常用方法BTB法、TTC法、以及荧光法、纸上荧光法、电导率测定法、冷冻测定法等二、知识背景植物生物学实验植物种子生命力快速测定三、测定方法BTB法TTC法红墨水法荧光法植物生物学实验植物种子生命力快速测定1、BTB法——原理凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离成H+和HCO3-，使得胚周围环境的pH值降低，可用酸碱指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）来测定pH值的改变。颜色变化越明显则表明种子活力越强。死细胞没有呼吸作用，也没有BTB的颜色变化。植物生物学实验植物种子生命力快速测定BTB法——试剂0.1%BTB溶液：溶解于煮沸过的自来水100mL中，用滤纸滤去残渣。溶液若呈黄色，可滴加稀氨水或NaOH溶液，使之呈现蓝色或蓝绿色，棕色试剂瓶中保存。BTB琼脂凝胶：取1g琼脂煎碎后加入100mL0.1%BTB溶液中，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在干燥洁净的培养皿中，使之为一均匀的薄层，冷却后备用。植物生物学实验植物种子生命力快速测定BTB法——材料与设备恒温箱、培养皿、小麦或绿豆植物生物学实验植物种子生命力快速测定BTB法——步骤浸种：将待测种子在30℃温水中浸种24h。倒平板：取预先加热融化的BTB琼脂凝胶倒入培养皿，静置冷却，使之形成凝胶薄层。

显色：取吸胀的种子，整齐地将胚向下埋于准备好的BTB琼脂凝胶培养皿中，间隔距离在1cm左右。然后将培养皿置于恒温培养箱中30-35℃培养1h。植物生物学实验植物种子生命力快速测定BTB法——步骤1h后，记数种胚附近出现的黄色晕圈的活种子数，计算活种子的百分率。植物生物学实验植物种子生命力快速测定植物生物学实验植物种子生命力快速测定2、TTC法——原理

凡是有生命活力的细胞均具有呼吸作用，从而都有氧化还原反应，而死细胞则无此反应。TTC（氯化三苯四氮唑）可渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被辅酶（NADH2或NADPH2）上的氢还原，此时无色的TTC便转变为红色的TTF（三苯基甲曁），并吸附在活细胞的表面，根据活细胞着色的深浅可定性的判断种子活力的有无与大小。

该方法在国际间、地区间交换种子最为常用。

注意：染色部位为生活种子的胚细胞。植物生物学实验植物种子生命力快速测定TTC法——试剂0.5%TTC溶液：（酒精溶解后）定容至100ml，棕色瓶4℃保存。若溶液变成红色，表示已被氧化不能再用。植物生物学实验植物种子生命力快速测定TTC法——材料与设备恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片植物生物学实验植物种子生命力快速测定TTC法——步骤浸种：同BTB法。显色：取吸胀的种子适量，用刀片沿胚的中心线纵切为两半，将每一种子的半粒置于培养皿中，另半粒待用。加入适量的0.5%TTC溶液（以浸没种子为度），置于30℃恒温箱中；1h后，倒去染色液，观察现象。计算活种子的百分率。将待测种子在30℃温水中浸种24h。植物生物学实验植物种子生命力快速测定3、红墨水法——原理活细胞的原生质膜具有选择透性，红墨水中的染色成分大红G不能进入细胞；因而胚不被红墨水染色。死亡的种胚细胞原生质膜丧失选择透性，大红G进入胚细胞并染色。

注意：生活种子的胚细胞不染色。植物生物学实验植物种子生命力快速测定红墨水法——试剂5%红墨水：以市购红墨水为原液，用自来水配制成5%的红墨水溶液

红墨水法——材料与设备恒温箱、培养皿、玉米种子、刀片植物生物学实验植物种子生命力快速测定红墨水法——步骤浸种：同BTB法。显色：将TTC法中剩余待用的一半种子置于另1只培养皿中，加入适量的5%红墨水液（以浸没种子为度）。15min后倒去红墨水，用自来水冲洗多次，直至冲洗液为无色为止。观察现象，判断种子活力的有无和大小。计算活种子的百分率。将待测种子在30℃温水中浸种24h。植物生物学实验植物种子生命力快速测定红墨水法植物生物学实验植物种子生命力快速测定活种子死种子植物生物学实验植物种子生命力快速测定4、荧光法——原理

植物种子中常含有一些物质，能在紫外线照射下产生荧光，如黄酮类、香豆素类、酚类等。在衰老过程中：荧光物质的结构、成分往往发生变化，因而改变荧光的颜色。可借助直接观察荧光来鉴定种子的生命力。——适用于禾谷类、松柏纲等植物的种子。细胞膜透性增加，导致浸种后荧光物质外泄，可通过观察荧光物质的渗出情况判断种子的生命力。——适用于十字花科植物的种子。植物生物学实验植物种子生命力快速测定荧光法——材料与仪器玉米种子。紫外光灯，不产生荧光的滤纸。植物生物学实验植物种子生命力快速测定荧光法——步骤随机取20粒种子，用刀片将玉米种子沿中心线切为两半，使其切面朝上放在滤纸上，置于紫外光灯下照射观察。有生命力的种子将产生明亮的蓝色、蓝紫、蓝绿色荧光。死亡种子往往呈黄色、褐色，并暗淡无光。观察、计数，计算活种子的百分率。植物生物学实验植物种子生命力快速测定荧光法观察孔紫外分析仪电源选择波长植物生物学实验植物种子生命力快速测定思考题1、试比较TTC法、BTB法、红墨水法及荧光法，测定的结果是否相同?为什么?哪一种方法更准确？它们与种子的实际萌芽率是否一致？如若有偏差，理论上应为偏高还是偏低？为什么？植物生物学实验植物种子生命力快速测定2、BTB法测定种子发芽率时，若用煮死的种子做比较，有时也发现在种子周围出现黄色晕圈，为什么？3、如果用以上各方法来进行实验观察没有完全成熟的种子，将会有怎样的结果？思考题植物生物学实验植物种子生命力快速测定纸上荧光法原理：凡