免疫学的临床应用

第十章免疫学的临床应用■免疫学诊断■免疫学防治

第一节免疫学诊断●抗原或抗体的检测●免疫细胞及其功能检测第一节体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素一、抗原抗体反应特点1．高度特异性

由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。

2．表面化学基团之间的可逆结合

3．适宜的抗原抗体浓度和比例抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度和比例。

二、抗原抗体反应的影响因素

1．电解质

抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为pH3~5和5~6不等。实验中常用0.85%的NaCl溶液，以提供适当浓度的电解质。

2．温度

适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗原抗体复合物的形成。通常37℃是抗原抗体反应的最适温度。

3．酸碱度

抗原抗体反应的最适pH在6~8之间，pH过高或过低，均可直接影响抗原、抗体的理化性质。

第二十二章免疫学检测技术（四）常见抗原抗体反应的种类1.凝集反应

类型：★直接凝集反应★间接凝集反应★间接凝集抑制试验★协同凝集试验

概念：细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块称凝集反应。凝集反应原理图解（一）凝集反应原理图解（二）凝集反应原理图解（三）2.沉淀反应

概念：可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物称沉淀反应。类型：★单向免疫扩散★免疫比浊法★双向免疫扩散★对流免疫电泳

单向琼脂扩散试验

双向琼脂扩散试验

对流免疫电泳三、免疫标记技术（immunolabelingtechnique）

将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法。

常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。

1.免疫酶测定法（EIA）

这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。

①双抗体夹心法

②间接EILSA

血清检测中：肝癌、骨肉瘤-----血清碱性磷酸酶（ALP）升高。

前列癌-------血清酸性磷酸酶升高。2.免疫荧光技术是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。

123.放射免疫测定法

是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。敏感性可达到pg/ml水平，常用的放射性核素有131I和125I等。

于1977年因创建放射免疫测定法而获得医学诺贝尔奖。最敏感4.化学发光免疫技术是将化学发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新的免疫分析技术。

5.免疫胶体金技术用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。

四、蛋白质芯片技术

是指固定于支持介质上的大量蛋白质构成的微阵列。

6.免疫印迹技术又称Westernblotting蛋白定性定量应用最广泛第二节免疫细胞功能的检测一、免疫细胞的分离1.外周血单个核细胞的分离

2.淋巴细胞及其亚群的分离和分析

有：免疫吸附分离法、磁珠分离法、荧光激活细胞分离仪分离法、抗原肽-MHC分子四聚体技术

流式细胞术可用于分离混合的T、B细胞。用于细胞分离鉴定的最好方法。二、免疫细胞功能的测定1.T细胞功能测定①T淋巴细胞增殖试验：T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原（PHA、ConA）刺激后可发生增殖，可通过以下三种方法检测。

形态计数法3H-TdR或125Ｉ-UdR掺入法

MTT比色法

②迟发型超敏反应（DTH）的检测

此方法为体内检测细胞免疫功能的简便易行的皮试方法。

2.B细胞功能测定抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验。

3.细胞毒试验培养4-6小时51Cr释放法乳酸脱氢酶释放法

细胞染色法凋亡细胞检测法

第二十二章免疫学检测技术4.吞噬功能测定①硝基蓝四氮唑试验

②巨噬细胞吞噬试验

5.细胞因子的检测

①生物活性检测法

②免疫学检测法

酶联免疫斑点试验

第二十二章免疫学检测技术用于功能性细胞的定量检测第二节、免疫学防治一、免疫预防特异性免疫的获得方式：1、自然免疫：自然主动免疫（感染病原体后）自然被动免疫（经胎盘、乳汁获得抗体）2、人工免疫：人为获得人工主动免疫（也称预防接种）人工被动免疫过继免疫人工主动免疫制品人工被动免疫制品疫苗类毒素抗毒素（动物血清）人丙种球蛋白（人血浆和胎盘）细胞因子与单克隆抗体1.灭活疫苗（死疫苗）2.减毒活疫苗1、死疫苗（deathvaccine）用物理或化学方法将病原微生物杀死或灭活而制成如霍乱、百日咳、伤寒疫苗等优点：安全，稳定，易保存缺点：主要诱导体液免疫，不能通过内源性抗原呈递途径诱导产生效应性CTL。不能繁殖，需多次刺激注射局部和全身反应严重2、减毒活疫苗（live-attenuatedVaccine）用毒力高度减弱或基本无毒的病原微生物制成优点：一次免疫即可获得长久免疫力，类似隐性感染。诱导体液免疫和细胞免疫缺点：不易保存，存在回复突变的危险如卡介苗牛痘麻疹等

死疫苗与活疫苗的特点比较区别要点死疫苗活疫苗制剂特点强毒株制成弱毒或无毒株制成接种方式多为皮下注射多模拟自然感染途径接种剂量次数量较大，2~3次量较小，多为1次副作用较大较小免疫效果较差，维持较好，维持3~5年数月~数年或更长疫苗保存较易保存不易保存3.亚单位疫苗（SubunitVaccine）提取有效免疫原成分,去除无关或有害成分如提取乙肝表面抗原--乙肝亚单位疫苗优点：免疫效果高，不良反应少

4.基因工程疫苗原理：编码免疫原基因→载体→酵母菌、大肠杆菌体内↓体外培养，表达目的基因产物（2）类毒素（Toxid）细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒性减弱而保留其免疫原性。白百破：白喉类毒素+百日咳杆菌死疫苗+破伤风类毒素二、人工被动免疫(一)概念：是人为的给机体输入抗毒素、免疫血清等免疫效应物质，使机体立即获得特异性免疫力的方法。(二)特点：免疫力出现快、维持时间短，可用于传染病的特异性治疗和紧急预防。(三)常用人工被动免疫制剂■抗毒素用细菌类毒素多次给马注射，待其产生大量抗体后，放血并分离马血清经提纯后制成的制剂。■胎盘球蛋白从胎盘血中提取的免疫球蛋白（IgG）。■血浆丙种球蛋白从正常人血中提取的免疫球蛋白（IgG、IgM）。

是指给患者转输具有在体内继续扩增效应细胞的一种疗法。四、过继免疫治疗（四）计划免疫1.概念根据特定传染病的疫情监测和人群免疫状况分析，按照规定的免疫程序有计划地进行人群预防接种，以提高人群免疫水平，控制或消灭相应传染病。2.我国儿童计划免疫程序（表）第三节免疫治疗

免疫治疗是指利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗目的所采取的措施。

第二十三章免疫学防治一、分子治疗

分子治疗指给机体输入分子制剂，以调节机体的特异性免疫应答，例如使用抗体、细胞因子以及微生物制剂等。1.分子疫苗

2.抗体

3.细胞因子

4.微生物抗原疫苗

二、细胞治疗

细胞治疗指给机体输入细胞制剂，以激活或增强机体的特异性免疫应答，例如使用细胞疫苗、干细胞移植、过继免疫治疗等。1.细胞疫苗

肿瘤细胞疫苗、基因修饰的瘤苗、树突状细胞疫苗。2.过继免疫治疗

取自体淋巴细胞经体外激活、增殖后回输患者，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应。如TIL。3.造血干细胞移植

干细胞是具有多种分化潜能，自我更新能力很强的细胞，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织