诊断学-临床免疫学检测

临床免疫学检测赵虎复旦大学附属华东医院检验科2009-11-25主要授课内容免疫学检测的基本原理免疫学检测技术临床常用的免疫学检测免疫功能检测感染免疫检测肿瘤免疫检测自身免疫检测移植免疫检测一、免疫学检测的基本原理基本原理-抗原抗体反应抗原(antigen,Ag)抗体(antibody):inmmunoglobin,Ig抗原抗体反应原理:结构互补性与亲和性。凝集\沉淀\溶解\补体结合抗原抗体反应特点：特异性\按比例\

可逆性二、免疫学检测的基本技术免疫学基本技术（方法）沉淀试验凝集试验溶血反应和补体结合试验标记技术*（一）荧光免疫技术荧光免疫技术（fluorescentantibodytechnique），最早的标记免疫技术。荧光物质荧光色素（异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸荧光素）酶作用后产生荧光的物质（-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶）镧系螯合物（Eu3+、Tb3+、Ce3+）检测方法：直接观测、时间分辨荧光、荧光偏振测定（二）放射免疫技术放射免疫技术（radioimmunoassay,RIA）：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。灵敏度高。标记物：射线（131I、125I、57Cr、60Co）

射线（14C、3H、32P）标记方法：直接法间接法（三）酶免疫技术

酶免疫技术：以酶为标记物（酶标记的抗体或抗原）的标记免疫分析技术。ELISA（酶联免疫吸附测定）斑点-ELISA（dot-ELISA）免疫印迹法（immunoblotingtest,IBT）——Westernblot（SDS-聚丙烯纤胺凝胶电泳）（四）发光免疫技术

发光免疫技术是将发光系统与免疫反应相结合，以检测抗原或抗体。特点：既具有免疫反应的特异性，更兼有发光反应的高敏感性。底物：氨基苯二酰肼类（鲁米诺或异鲁米诺衍生物），丫啶酯类、电化学发光（三联吡啶钌、三丙胺）方法：化学发光酶免疫测定

电化学发光免疫测定（五）金免疫技术

以胶体金作为标记物的标记免疫检测技术。胶体金（colloidalgold），由金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。斑点金免疫渗滤试验（dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA）：硝酸纤维膜为载体，以免疫金为结合物。斑点免疫层析试验（dotimmunochromatographicassay,DICA）：硝酸纤维膜为载体，利用微孔膜的毛细管层吸三、临床常用的免疫学检测（一）免疫功能检测1.血清免疫球蛋白检测2.血清补体的检测3.细胞功能的检测1.血清免疫球蛋白检测

免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于血液、体液、外分泌物物和部分细胞膜上。按其功能和理化性质分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE五大类。采用单向免疫扩散法、免疫透射比浊法、免疫散射比浊法检测。血清免疫球蛋白检测-IgGIgG—单体Ig，占总Ig的70-80%。病毒、细菌、寄生虫抗体。参考值：7.0-16.6g/L临床意义生理变化：母体→胎儿，16岁达成人水平。病理变化：↑各种慢性感染、淋巴瘤、SLE

等自身免疫性疾病；↓体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、重链病、轻链病等。血清免疫球蛋白检测-IgAIgA：分为血清型和分泌型，血清型占总Ig的10-15%，后者存在于分泌物中。参考值：血清0.7-3.5g/L临床意义生理变化：儿童较低，16岁达正常病理变化：↑SLE、类风关、肝硬化、肾病；↓反复呼吸道感染、重链病、轻链病、免疫缺陷病、自身免疫性疾病和代谢病。血清免疫球蛋白检测-IgMIgM：初次免疫应答反应中的Ig，最早出现，分子量最大。占总Ig的5-10%。参考值：血清0.5-2.6g/L临床意义生理变化：胎儿儿童较低（10%），8-16岁达正常病理变化：↑病毒感染早期、肝硬化、SLE、类风关、肝硬化、肾病；↓先天性免疫缺陷病、代谢病。2.血清补体检测

补体（Complement,C）是一组具有酶原活性的糖蛋白，包括传统途径的9种成分和旁路途径的3种成分。参与机体抗感染及免疫调节，也可介导病理反应。总补体溶血活性检测（CH50）：检测补体经典途径。↑急性炎症、组织损伤；↓免疫复合物性疾病、自身免疫性疾病活动期（SLE等）。补体C3（C3）：为经典途径和旁路途径的关键物质。↑急性炎症、传染病早期；↓SLE、RA、肾炎、慢活肝等。3.细胞功能检测

免疫活性细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞、以及其他吞噬细胞。细胞免疫功能主要检测T细胞的免疫活性。T细胞花结形成试验（E玫瑰花结形成试验）T细胞转化试验T细胞分化抗原测定*：白细胞分化抗原（CD）

CD3+总T细胞，CD3+/CD4+T辅助细胞CD3+CD8+T抑制细胞。流式细胞（仪）技术。（二）感染免疫检测-细菌血清抗链球菌溶血素“O”试验溶血素“O”是A群溶血性链球菌产生的具有溶血活性的代谢产物，相应的抗体称作抗链球菌溶血素“O”。参考值：乳胶凝集法（LAT）阴性临床意义：阳性-近期A群溶血性链球菌感染（活动性风湿热、风湿性心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤软组织感染等。

感染免疫检测-细菌2.伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定伤寒沙门菌感染后菌体“O”和鞭毛“H”抗原可刺激机体产生相应抗体。甲、乙、丙型副伤寒沙门菌也可产生相应的“O”

“H”抗体。肥达反应（Widalreaction,WR）。参考值：伤寒H1∶160,O1∶80；副伤寒1∶80临床意义：单份血清O1∶80，H∶160；或动态观察升高4倍以上。①O、H均升高，伤寒；②O不高、H升高，预防接种；③O升高、H不高，感染早期。感染免疫检测-病毒甲型肝炎病毒抗原抗体抗原检测（ELISA）：微量板包被抗-HAV，加入待检样本，再加入酶标记的抗-HAV，显色，测定OD值。待检样本OD值-空白OD值/阴性对照OD值0.21为阳性。抗体检测：检测抗-HAVIgM和总抗-HAV。

ELISA法或化学发光法。感染免疫检测-病毒乙型肝炎病毒抗原抗体表面抗原（HBsAg）及其抗体（抗-HBs）,e抗原（HBeAg）及其抗体（抗-HBe），核心抗原（HBcAg）及其抗体（抗HBc）。HBsAg：急慢性乙肝或携带者抗-HBs：保护性抗体，病毒已清除，或疫苗接种后HBeAg：HBV复制状态及血清有传染性的指标抗-HBe：非保护性抗体，提示预后良好。抗HBc：IgM型抗体。急性感染指标。感染免疫检测-病毒丙型肝炎病毒特异性抗体ELISA：微量板包被抗-HAV，加入待检样本，再加入酶标记的抗-HAV，显色，测定OD值。待检样本OD值-空白OD值/阴性对照OD值0.21为阳性。免疫印迹试验（RIBA）：用于ELISA检测可疑者，区别特异性HCV抗体和非特异性反应。感染免疫检测-病毒TORCH试验：妇产科产前常规检查项目，包括弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒I和II型抗体风疹病毒抗体：IgM和IgG单纯疱疹病毒（I和II型）抗体：IgM和IgG巨细胞病毒抗体：IgM和IgG弓形虫：抗原或抗体（IgM和IgG）（三）肿瘤免疫检测

肿瘤标志物（tumormarker,TM）：肿瘤细胞直接产生或非肿瘤细胞经肿瘤细胞诱导后合成的一类物质，存在于血液、细胞、组织或体液中，反映肿瘤存在和生长。包括蛋白质、激素、酶和多胺等。特定的TM可以提示或确定某一部位肿瘤。定期检查各种TM，有可能早期发现肿瘤。肿瘤若治疗（手术切除、放疗或化疗等）有效，相应的TM会明显减少。有复法或转移后，相应的TM可能再次增加。

肿瘤免疫检测-AFP定义——甲胎蛋白（AFP）是胎儿发育早期，由肝脏和卵黄囊合成的一种血清糖蛋白，胎儿出生后不久即逐渐消失。参考值——血清

25g/L临床意义原发性肝细胞癌，77.1%患者明显升高（300g/L）。但也有18%患者可无AFP升高生殖腺胚胎性肿瘤，如睾丸、奇胎瘤和卵巢肿瘤等，血清AFP升高。病毒性肝炎、肝硬化，可有不同程度的升高，但其水平300g/L。肿瘤免疫检测-CEA定义——癌胚抗原（CEA）是一种结构复杂的可溶性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿的胃肠道、胰腺和肝脏，出生后组织内含量很低。参考值——血清

5g/L临床意义胃肠道肿瘤，尤其是结肠癌、直肠癌（术后复发）、胃癌、胰腺癌等其他部位肿瘤：乳腺癌、肺癌胃肠道肿瘤术后或化疗的疗效观察肿瘤免疫检测-hCG定义——人绒毛膜促性腺激素（hCG）是孕卵着床后有人体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素。出生后逐渐减少。参考值——各种检测方法以及生产厂商的不同，其参考值各不相同。临床意义胚胎细胞肿瘤如葡萄胎、绒毛膜癌和睾丸癌等。早期妊娠肿瘤免疫检测-CA19-9定义——糖链抗原19-9（CA19-9），又称胃肠癌相关抗原，是一种与胰腺癌、胆囊癌、结肠癌和胃癌相关的肿瘤标志物。正常人体组织中含量很低。参考值——血清

37000U/L临床意义胰腺癌、胆囊癌和胆管壶腹癌，明显升高，尤其胰腺癌，敏感性70%-95%，特异性72-90%。其他消化道肿瘤：胃癌阳性率50%，结肠癌阳性率60%，肝癌51%。消化道炎症，如急性胰腺炎、胆囊炎、肝硬化和肝炎等，也有不同程度升高。肿瘤免疫检测-CA125定义——癌抗原125（CA125）是很重要的卵巢癌相关抗原，是一种大分子多聚糖蛋白，存在于上皮性卵巢癌组织和患者血清中。参考值——血清

35000U/L临床意义卵巢癌明显升高，手术或化疗有效者很快下降；复发时再度明显升高。其他肿瘤：卵巢癌40%，其他妇科肿瘤43%，胰腺癌50%，胃癌47%，肺癌41.4%。非恶性肿瘤，如子宫内膜异位症、盆腔炎、卵巢囊肿等，也可不同程度升高。肿瘤免疫检测-CA15-3定义——癌抗原15-3（CA15-3）是一种乳腺癌相关抗原，为大分子糖蛋白。参考值——血清

25000U/L。临床意义乳腺癌患者升高。是原发性乳腺癌的辅助诊断指标，也是手术后随访和监控肿瘤复法、转移的指标。其他恶性肿瘤：肺癌、肾癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌和原发性肝癌，也有不同程度的阳性率。肝脏、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤疾病，阳性率低于10%。肿瘤免疫检测-CA72-4定义——糖链抗原72-4（CA72-4）是一种大分子糖蛋白，为胃肠道和卵巢癌的肿瘤标志物。参考值——血清

4000U/L临床意义对胃癌检测的特异性明显优于CA19-9和CEA。卵巢癌也明显增加，且有助于监测病情。结肠癌、胰腺癌和小细胞肺癌，也可见增高。肿瘤免疫检测-SCC定义——鳞状细胞癌抗原（SCC）是一种大分子糖蛋白，属于肿瘤相关抗原TA-4的亚段，存在于鳞状细胞癌的胞浆内。参考值——血清.1.5g/L临床意义子宫颈癌、肺癌、头颈部癌等鳞癌，血中的SCC升高，其浓度随病期的加重而增高。肝炎、肝硬化、肺炎、肾衰、结核等，也有一定程度升高。标本应避免汗液、唾液和其他体液的污染，否则可引起假性升高。肿瘤免疫检测-PSA定义——前列腺特异性抗原（PSA）是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶。目前临床可以检测血清总PSA（T-PSA）和游离PSA（F-PSA）。参考值——T-PSA4.0g/L，F-PSA0.8g/L，F-PSA/T-PSA0.25临床意义前列腺癌患者血清PSA升高，其浓度和阳性率随病程的进展而增高。前列腺肥大、前列腺炎、肾脏和泌尿生殖系统疾病，也可轻度升高。应用F-PSA/T-PSA比值临床意义更大。比值0.1提示前列腺癌，0.25提示可能是前列腺增生。（四）自身免疫检测机体的免疫系统对自身组织成分产生免疫应答，产生相应的自身抗体，并引起组织损伤，形成自身免疫性疾病。自身抗体的种类很多。类风湿因子抗核抗体抗组织细胞抗体其他自身抗体自身免疫检测-类风湿因子定义——类风湿因子（RF）是变性IgG刺激机体产生的一种自身抗体。主要存在于类风湿关节炎患者的血清或关节液中。主要为IgM型。以检测血清总PSA（T-PSA）和游离PSA（F-PSA）。参考值——正常人阴性。临床意义——类风湿疾病，尤其类风湿关节炎，RF的阳性率70-90%。IgM和IgA的效价与病情及骨质破坏有关。其他自身免疫性疾病也可阳性。自身免疫检测-抗核抗体定义——抗核抗体（ANA）泛指抗各种核成分的自身抗体。主要为IgG，也有IgM和IgA。类型——抗核蛋白（DNA）抗体、抗DNA抗体、抗可提取的核抗原（ENA）抗体方法——免疫荧光、ELISA、免疫印迹等参考值——正常人阴性。临床意义——不溶性DNA抗体-狼疮细胞因子；可溶性DNA抗体-RA；抗dsDNA抗体-SLE；抗核糖核蛋白（RNP）抗体-混合性结缔组织病；抗Sm抗体-SLE；抗干燥综合征（SS）A抗体-SS；抗组蛋白抗体（AHA）-SLE自身免疫检测-抗组织细胞抗体抗肾小球基底膜（GBM）抗体：多产生于链球菌感染后，为共同抗原交叉诱导产生，可引起GBM损伤，导致肾小球肾炎。抗胃壁细胞抗体（PCA）：器官及细