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第第页T、B淋巴细胞分离试验淋巴细胞主要分T淋巴细胞和B淋巴细胞两大亚群，它们具有不同的特性和功能，为此在进行某些免疫学试验时，首先需分别出纯的T淋巴细胞和B淋巴细胞。本试验的原理为：淋巴细胞与用溴花二氨基异硫氢化物（简称AET）处理的绵羊红细胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴细胞均能吸附AETSRBC，形成坚固稳定而巨大的E花环，较正常未处理的SRBC形成的E花环百分比为高，而且形成快速，不易脱落，重复性好。再经淋巴细胞分层液分别时，AETE花环易沉于管底，而未形成E花环的T淋巴细胞，用低渗液解花环四周的AETSRBC，便可获得纯T淋巴细胞，而B淋巴细胞可直接取自分层液的界面。材料及试剂：

a)新奇豚鼠血

b)兔红细胞（RRBC）

c)溴花二氨基异硫氢化物（AET）

d)淋巴细胞分层液

e)其它Hanks液，含小牛血清的199培育液，无菌生理盐水，3.5%氯化钠溶液，离心机等。

方法：

1.AETRRBC制备

（1）.AET溶液的制备

称取AET粉剂402毫克，溶于10毫升蒸馏水中，使成为0.143M溶液，用4NNaOH溶液调pH9.0。该溶液必需新奇配制，不宜久存。

（2）.AET处理RRBC

取洗涤好压积的RRBC，按一份压积AETRRBC加入4份新奇配制的pH9.0的AET溶液充分混匀置37℃水浴15分钟，每隔5分钟摇匀一次。取出加冷无菌生理盐水至离心管口（12厘米）1800转/分别心5分钟。连续洗涤35次，每洗一次，必需充分摇匀，以削减AETRRBC粘附成团，并观看有无溶血。若有溶血现象，则用含小牛血清的199培育基再洗一次，最终配成10%AETRRBC悬液，置4℃保存，不得超过5天。

（3）.1%AETRRBC的配制：

将预先配制并保存于4℃冰箱的10%浓度的AETRRBC，以含10%小牛血清的199培育液稀释至1%。

2.从新奇豚鼠血液分别单个核细胞，操作见后试验。

3.AETE花环试验：

将分别的单个核细胞（2ⅹ106/毫升）与等量1%AETRRBC混合，置37℃水浴15分钟，每隔5分钟摇匀一次，分装数管，每管23毫升，低速离心（1000转/分钟）5分钟后，移至4℃冰箱45分钟。

4.T淋巴细胞和B淋巴细胞的分别

将形成E花环的细胞悬液，再用淋巴细胞分层液分别，吸取界面云雾状的细胞，即为富含B淋巴细胞群。沉淀于管底的E花环，用Hanks液洗一次后，加双蒸水3毫升处理3分钟，低渗

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