出厂检验常见微生物指标检验方法（包括菌落总数、大肠菌群等）

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菌落总数

菌落总数的测定

检验标准:

GB4789.2-2023食品平安国家标准食品微生物学检验菌落总数测定

菌落总数:

食品检样经过处理，在肯定条件下(如培育基、培育温度和培育时间等)培育后，所得每g检样中形成的微生物菌落总数。

制备1:10样品匀液

称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水水的无菌均质杯内8000rimin-10000r/min均质1min-2min.或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中。用拍击式均质器拍打1min~2min。制成1:10的样品匀液。

制备1:100样品匀液

用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL沿管壁渐渐注入盛有9mL稀释液的无菌试管中(留意吸管或吸头不要触及稀释液面)，振摇试管或换用支无菌吸管反复吹打使其混合匀称。制成1:100的样品匀液。

制备10倍品匀液

按上一步操作程序。制务10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

取样并制备平板

选择2个一3个相宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个释释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内空白对比。

准时将15mL-20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培育基(可放置于46℃士1℃恒温水浴锅中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合匀称。

大肠菌群

01

大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。

02

大肠菌群的测定

固体和半固体样品:

·称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

液体样品:

·以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

·用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其混合匀称,制成1∶100的样品匀液。

·依据对样品污染状况的估量,按上述操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过15min。

·制备1:10样品匀液

以无菌操作将检样25g(mL)放于含有225mI.灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的匀称稀释液。固体检样最好用均质器,以8000r/min~10000r/min的速度处理1min,做成1:10的匀称稀释液。

·制备1:100样品匀液

用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL,注入盛有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管中，振摇试管混合匀称，制成1:100的样品匀液。

·制备10倍品匀液

领取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。

·移取样品

依据食品卫生标准要求或对样品污染状况的估量,选择三个稀释度，每个稀释度接种三。

02乳糖发酵试验

将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lmL及以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36℃±1℃培育24h±2h,如全部乳糖胆盐发酵管都不产气则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。

03分别培育

将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃温箱内，培育18h~24h,然后取出，观看菌落形态，并做革兰氏染色和证明试验。

伊红美蓝琼脂:伊红Y和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长.伊红Y为酸性染料，美蓝为碱性染料，琼脂是凝固剂。大肠菌群发酵乳糖产酸时，细菌带正电荷，所以染上伊红(红色)，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，大部分有金属光泽。

03证明试验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃培育24