滚压泵建立猪肺持续灌注与缺血再灌注模型 3600字

滚压泵建立猪肺持续灌注与缺血再灌注模型3600字【摘要】目的：通过滚压泵建立一种操作简单的猪肺持续灌注和缺血再灌注模型,并比拟两种灌注办法对肺的损伤.办法：18只乳猪随机分为对照组，缺血再灌注(IR)组和非搏动持续灌注(NCP)组,每组6只.分别在右心房、左心房和肺动脉插管，灌注前引流全部血液入贮血器.将贮血器中灌注液通过滚压泵泵入肺动脉,灌注双肺后再通过左心房插管将灌注液引回贮血器,从而建立猪肺灌注模型.对照组双肺保持生理灌注120min;IR组双肺缺血90min后，滚压泵灌注30min;NCP组滚压泵持续灌注双肺120min.测定实验0min和120min时肺静态顺应性以及灌注液中TNF《α，IL《6浓度.实验后测定肺组织湿干比并进行光镜和电镜察看.结果：与0min相比，IR组肺顺应性(P0引言

动物肺灌注模型被广泛用于移植肺保留、肺缺血再灌注损伤以及肺肿瘤部分药物灌注等的研究.本文探讨通过滚压泵建立操作简单并且更为接近临床实际的乳猪肺缺血再灌注和非搏动持续灌注模型,并比拟这两种灌注办法对肺的损伤程度.

1材料和办法

1.1材料上海市松江区松联实验动物场提供的上海种乳猪18头，雌雄不拘，年龄4～5wk，体质量7～10kg，随机分为对照组、缺血再灌注组(ischemia《reperfusion，IR)组和非搏动持续灌注(nonpulsatilecontinuousperfusion，NCP)组,每组6只.

1.2办法

1.2.1手术操作将已禁食12h的乳猪以阿托品20μg/kg，氯胺酮15mg/kg肌注和硫喷妥钠25mg/kg耳缘静脉推注诱导麻醉，气管插管，接Svervo900C呼吸机(德国SiemensElemaAB公司)控制呼吸，采用控制通气模式，呼吸频率20次/min，潮气量15mL/kg，吸入氧浓度400mL/L.以硫喷妥钠和氯化琥珀胆碱交替维持麻醉.解剖左侧腹股沟区，游离左侧股动静脉，分别穿刺置管，通过股动脉监测血压和抽取血样，通过股静脉建立静脉通道.连续监测心电图和动脉血压.经胸骨正中切口劈开胸骨，剪开并悬吊心包，游离暴露心脏及大血管.分别在左右心耳和肺动脉缝大小适宜的荷包.肝素化(3mg/kg)后，以10F动脉插管插入肺动脉，以两根16F静脉插管分别插入左、右心耳.通过右心耳插管将自体血约400mL引入FCR《1型一次性贮血器(宁波菲拉尔医疗用品厂)，与贮血器中预充的200mL明胶(40g/L)一起组成含自体血灌注液.通过Sarns7400滚压式血泵(美国SarnsINC公司)将贮血器中的含血灌注液经肺动脉插管泵入肺动脉，灌注双肺，再通过左心耳插管将灌注液引回贮血器，从而建立乳猪肺持续灌注和缺血再灌注模型.IR组，全身血液引入贮血器后即开始实验，停止肺部灌注90min后，通过滚压泵以80mL/(kg·min)的流量灌注双肺30min，实验结束.NCP组，全身血液引入贮血器后，立即开始实验，通过滚压泵以80mL/(kg·min)的流量灌注双肺120min，实验结束.对照组开胸插管后,不将血液引入贮血器，在保持心脏跳动的情况下,保持双肺的自然灌注状态120min.三组实验时间均为120min.

1.2.2指标监测实验开始和结束时测定气道平台压和潮气量，计算肺静态顺应性.放免法检测实验开始和结束时灌注液中TNF《α及IL《6变化(试剂盒由301医院提供)，采用SN《695A型智能放免γ测量仪(上海原子核研究所日环仪器一厂)测量.实验结束时取左下肺组织，分为三局部.第一局部称湿质量后，置60℃恒温烘烤48h称干质量，计算湿干比(W/D).第二局部40g/L甲醛固定,苏木素《伊红染色,在光镜下察看肺组织内水肿和多形核白细胞浸润情况.第三局部戊二醛固定,常规办法制片,在透射电镜下察看肺组织超微结构改变.

统计学处理：采用SPSS13.0统计软件进行数据处理.计量资料用x±s表示,采用单因素方差分析，组间比拟用Dunnett法，组内比拟用SNK法.P2结果

2.1各组肺顺应性、炎症因子、W/D比拟0min时3组动物的肺静态顺应性、炎症因子浓度无统计学差别.120min时缺血再灌注组肺顺应性低于其他两组(P表1各组肺静态顺应性、灌注液炎症因子及肺湿干比比拟(略)

aP2.2各组肺组织光镜和电镜表现缺血再灌注组光镜下可见肺泡壁增厚,肺间质水肿,多形核白细胞浸润,毛细血管内微血栓形成,肺组织渗出增加.而持续灌注组上述变化不明显(图1).透射电镜下可见缺血再灌注组Ⅱ型上皮细胞明显肿胀，板层小体脱颗粒现象明显，旁边的毛细血管有淤血现象.持续灌注组Ⅱ型上皮细胞板层小体内尚有较多的颗粒，表明相关炎性物质尚未完全释出(图2).

3讨论

胸心外科许多新的治疗伎俩，如体外循环心脏手术、肺移植手术、袖式肺叶切除手术以及肺部的抗肿瘤药物灌注等，都牵涉到了对肺的缺血再灌注或者非搏动性持续灌注问题.建立适宜的动物肺灌注模型对于深入研究这些治疗伎俩对机体的影响是十分重要的.

A:对照组;B：缺血再灌注组;C：持续灌注组.

图1肺组织光镜表现HE×40(略)

A:对照组;B：缺血再灌注组;C：持续灌注组.

图2肺组织透射电镜表现TEM×6000(略)

早期的肺灌注模型一般为体外灌注，多局限于鼠、兔等小型动物，经过改良,模型的建立均是应用颈胸腹联合切口，肝素化后分别结扎高低腔静脉、升主动脉，通过右心室切口穿越肺动脉瓣实现肺动脉插管，通过左心室切口，穿过二尖瓣实现左心房插管;随后将心肺气管连同肺动脉插管、左心房插管和气管插管整块移出胸腔，进而在体外通过灌注系统建立全肺灌注模型[1-2].晚些时间出现的大动物肺灌注模型的手术办法主要为肝素化后主动脉和高低腔静脉分别结扎，通过肺动脉灌注爱护液，将心肺整块切除移出胸腔后，把心肺浸泡在爱护液中，进而通过肺动脉和左心房插管，建立双肺灌注模型[3].体外肺灌注模型建立需要完全将心肺取出，操作复杂，耗时.为简化操作开展了在体的左肺隔离灌注模型.大鼠模型为左侧后开胸，别离左肺门的左肺动静脉，钳夹或者结扎左肺门，通过静脉以及气管注射甲基兰以确保肺门阻断完全[4].猪的单侧肺灌注模型那么较复杂，左侧切除肋骨进胸，结扎半奇静脉后，别离左肺门结构，分别别离结扎左肺动脉、左主支气管和左肺高低静脉，通过左肺动脉和左肺高低静脉插管实现左肺灌注[5-6].本实验通过Sarns7400滚压式血泵建立乳猪在体隔离肺非搏动持续灌注和缺血再灌注模型.该模型较之小动物更为接近临床;较之离体肺灌注模型，不需要进行心肺的广泛游离，操作难度明显减低，时间明显缩短;较之其它在体隔离肺灌注模型