标准解读

《GB/T 22916-2008 水泡性口炎病毒荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，主要针对水泡性口炎病毒（VSV）的快速、准确检测提供了具体的操作指南。该标准详细规定了从样品采集到结果分析的一系列步骤，旨在通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术来识别和量化VSV RNA。

标准首先明确了适用范围，指出其适用于疑似感染VSV动物组织或细胞培养物中VSV核酸的检测。接着对实验所需的主要试剂与材料进行了列举，包括但不限于RNA提取试剂盒、反转录酶、dNTPs、引物及探针等，并且强调了这些材料的质量控制要求以保证实验准确性。

在操作流程部分，《GB/T 22916-2008》详述了样本处理的具体方法，比如如何正确地收集样本并进行初步处理；随后是关于总RNA提取的过程描述，以及使用特定引物和探针进行cDNA合成与扩增的条件设定。此外，还特别提到了荧光信号收集的时间点选择及其重要性。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2008-12-31 颁布
  • 2009-05-01 实施
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GB/T 22916-2008水泡性口炎病毒荧光RT-PCR检测方法_第1页
GB/T 22916-2008水泡性口炎病毒荧光RT-PCR检测方法_第2页
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文档简介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中华人民共和国国家标准

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒荧光犚犜犘犆犚检测方法

犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳犳犾狌狅狉狅犵犲狀犻犮犚犜犘犆犚犳狅狉狏犲狊犻犮狌犾犪狉狊狋狅犿犪狋犻狋犻狊狏犻狉狌狊

２００８１２３１发布２００９０５０１实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局

发布

中国国家标准化管理委员会

书

犌犅／犜２２９１６—２００８

前言

本标准参考了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）《陆生动物诊断试验和疫苗手册（哺乳动物、禽鸟与蜜蜂）》

（第５版）。

本标准的附录Ａ为规范性附录，附录Ｂ为资料性附录。

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检

疫局。

本标准主要起草人：花群义、周晓黎、曾少灵、曹琛福、詹爱军、张彩虹、林庆燕、陈兵、杨云庆、孙洁。

Ⅰ

书

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒荧光犚犜犘犆犚检测方法

１范围

本标准规定了水泡性口炎病毒荧光ＲＴＰＣＲ检测的操作方法。

本标准适用于动物及其产品中水泡性口炎病毒的检测。

２缩略语

下列缩略语适用于本标准。

２．１荧光犚犜犘犆犚

荧光反转录聚合酶链反应。

２．２犆狋值

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

２．３犚犖犃

核糖核酸。

２．４犇犈犘犆

焦碳酸磷酯。

２．５犘犅犛

磷酸盐缓冲盐水（配方见附录Ａ）。

２．６犜犪狇酶

犜犪狇ＤＮＡ聚合酶。

２．７犞犛犞

水泡性口炎病毒。

３原理

水泡性口炎病毒属ＲＮＡ病毒，根据水泡性口炎病毒两型共有基因特定的序列，合成一对特异性引

物和一条特异性的荧光双标记探针。通过严格设计和筛选的引物和探针，涵盖水泡性口炎病毒的两个

型和突变株，为水泡性口炎病毒的特异性通用引物和探针。探针的５′端标记ＦＡＭ荧光素，它发出的荧

光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团；３′端标记ＴＡＭＲＡ荧光素，它在近距离内能吸收５′端报告

荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团。在扩增时，犜犪狇酶发挥它的５′→３′端外切核酸酶的功

能，将探针水解成单核苷酸，消除阻碍，标记在探针两端的报告荧光基团和淬灭荧光基团均游离于溶液

中，仪器检测到发出的荧光信号。

４材料与试剂

４．１仪器与器材

４．１．１荧光ＲＴＰＣＲ检测仪。

４．１．２高速台式冷冻离心机（离心速度１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。

４．１．３台式离心机（离

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