标准解读

《GB/T 27521-2011 猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法》是一项国家标准，该标准规定了采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术对猪流感病毒进行核酸检测的方法。其主要内容包括样品采集、保存与运输；RNA提取；逆转录合成cDNA；以及通过特异性引物和探针对目标片段进行扩增等步骤。

在样品处理方面，要求采集的样本应尽快送检，并且在整个过程中保持低温环境以保证病毒核酸的稳定性。对于RNA提取过程，则推荐使用商业化试剂盒按照说明书操作或参照文献报道的方法执行，确保获得高质量的RNA用于后续实验。

关于RT-PCR的具体实施，本标准提供了详细的指南，包括但不限于选择合适的逆转录酶、优化PCR反应条件（如退火温度、循环次数等）、设计具有高度特异性的引物序列等关键要素。此外，还强调了阳性对照品的选择及阴性对照设置的重要性，以确保实验结果准确可靠。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-11-21 颁布
  • 2012-03-01 实施
©正版授权
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27521—2011

猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法

RT-PCRassayforswineinfluenzavirusnucleicacid

2011-11-21发布2012-03-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27521—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中国农业科学院哈尔滨兽医研究所中国检验检疫科学研究院中国兽医药品监

:,,

察所

。

本标准主要起草人乔传玲韩雪清杨焕良刘业兵陈艳吴绍强陈化兰林祥梅辛晓光朱中武

:、、、、、、、、、、

王慧煜刘建李建梅琳王伊琴徐彪阮周曦宁宜宝薄清如秦智锋林志雄

、、、、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27521—2011

猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪流感病毒核酸检测方法的技术要求

RT-PCR。

本标准规定的检测方法适用于检测猪肺脏组织鼻腔及气管分泌物和这些采集样品培养

RT-PCR、

物中的猪流感病毒核酸

。

2缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethypyrocarbonate)

脱氧核苷酸三磷酸

dNTP:(deoxy-ribonucleosidetriphosphate)

溴化乙锭

EB:(ethidiumbromide)

莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶

M-MLVRT:(moloneymurineleukemiavirusreversetran-

scriptase)

聚合酶链式反应

PCR:(polymerasechainreaction)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

酶抑制剂

RNAaseinhibitor:RNA

反转录聚合酶链式反应

RT-PCR:-(reverse-transcriptionpolymerasechainreaction)

无特定病原体

SPF:(specificpathogenfree)

TaqTaq聚合酶

DNApolymerase:DNA

3仪器

31仪

.PCR。

32台式低温高速离心机

.。

33电泳仪

.。

34电泳槽

.。

35冰箱

.。

36凝胶成像系统

.。

37微量移液器

.。

38水浴锅

.。

4试剂

41提取试剂或其他商品化的提取试剂

.LSTRIzolRNARNA。

42氯仿异丙醇无水乙醇

.、、。

43琼脂糖凝胶见附录中

.1.2%,A

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